用Formalin fix过的细胞提RNA然后作microarray会有问题么？# Biology - 生物学
s*r
1 楼
http://www.mitbbs.com/article_t/Dreamer/32962345.html
这在Georgia，活得得非常爽吧。
这在Georgia，活得得非常爽吧。
x*y
2 楼
music123.com 和musicianfriend 是一家的. 另外这两家貌似都有 pricematch和
45days lowest price guranttee.
俺刚才问 zzsounds, music123, 经过一圈 pm, coupon, xxoff, 两家给了俺个同样的
最低价, 俺很好奇, 多嘴问了一下, 原来是invoice + shipping, 虽然说的是free
shipping. 再降就亏本了
45days lowest price guranttee.
俺刚才问 zzsounds, music123, 经过一圈 pm, coupon, xxoff, 两家给了俺个同样的
最低价, 俺很好奇, 多嘴问了一下, 原来是invoice + shipping, 虽然说的是free
shipping. 再降就亏本了
y*j
3 楼
做一个实验， 细胞需要染色然后sort一下再提RNA。
染色至少冰上30min，另外再flow cytometer里有几十秒钟的时间温度会升到RT甚至更
高.会不会有影响呢？
formalin fix一下再染色会不会影响下一步的RNA提取呢？准备用qiagen的RNeasy
micro kit.
或者有什么其他专门的可以再进细胞的RNAse inhibitor么？
染色至少冰上30min，另外再flow cytometer里有几十秒钟的时间温度会升到RT甚至更
高.会不会有影响呢？
formalin fix一下再染色会不会影响下一步的RNA提取呢？准备用qiagen的RNeasy
micro kit.
或者有什么其他专门的可以再进细胞的RNAse inhibitor么？
p*r
4 楼
认识一个女的，哥们的老婆，年薪4万多。。。
y*i
5 楼
那你还不买那个话放啊，快买了
m*5
6 楼
感兴趣，同问
H*J
7 楼
I think 180k is normal in consulting, whatever major....
j*t
8 楼
music123网上有个什么link过去可以拿6% rebate的
【在 x******y 的大作中提到】
: music123.com 和musicianfriend 是一家的. 另外这两家貌似都有 pricematch和
: 45days lowest price guranttee.
: 俺刚才问 zzsounds, music123, 经过一圈 pm, coupon, xxoff, 两家给了俺个同样的
: 最低价, 俺很好奇, 多嘴问了一下, 原来是invoice + shipping, 虽然说的是free
: shipping. 再降就亏本了
【在 x******y 的大作中提到】
: music123.com 和musicianfriend 是一家的. 另外这两家貌似都有 pricematch和
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: 俺刚才问 zzsounds, music123, 经过一圈 pm, coupon, xxoff, 两家给了俺个同样的
: 最低价, 俺很好奇, 多嘴问了一下, 原来是invoice + shipping, 虽然说的是free
: shipping. 再降就亏本了
l*u
9 楼
不行.
【在 y***j 的大作中提到】
: 做一个实验， 细胞需要染色然后sort一下再提RNA。
: 染色至少冰上30min，另外再flow cytometer里有几十秒钟的时间温度会升到RT甚至更
: 高.会不会有影响呢？
: formalin fix一下再染色会不会影响下一步的RNA提取呢？准备用qiagen的RNeasy
: micro kit.
: 或者有什么其他专门的可以再进细胞的RNAse inhibitor么？
【在 y***j 的大作中提到】
: 做一个实验， 细胞需要染色然后sort一下再提RNA。
: 染色至少冰上30min，另外再flow cytometer里有几十秒钟的时间温度会升到RT甚至更
: 高.会不会有影响呢？
: formalin fix一下再染色会不会影响下一步的RNA提取呢？准备用qiagen的RNeasy
: micro kit.
: 或者有什么其他专门的可以再进细胞的RNAse inhibitor么？
s*d
10 楼
我要改行干这个
L*n
11 楼
45days lowest price guranttee
那我可以要求他们PA么？ 嘿嘿
【在 x******y 的大作中提到】
: music123.com 和musicianfriend 是一家的. 另外这两家貌似都有 pricematch和
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: 俺刚才问 zzsounds, music123, 经过一圈 pm, coupon, xxoff, 两家给了俺个同样的
: 最低价, 俺很好奇, 多嘴问了一下, 原来是invoice + shipping, 虽然说的是free
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那我可以要求他们PA么？ 嘿嘿
【在 x******y 的大作中提到】
: music123.com 和musicianfriend 是一家的. 另外这两家貌似都有 pricematch和
: 45days lowest price guranttee.
: 俺刚才问 zzsounds, music123, 经过一圈 pm, coupon, xxoff, 两家给了俺个同样的
: 最低价, 俺很好奇, 多嘴问了一下, 原来是invoice + shipping, 虽然说的是free
: shipping. 再降就亏本了
y*j
12 楼
why?
【在 l******u 的大作中提到】
: 不行.
【在 l******u 的大作中提到】
: 不行.
j*s
13 楼
我也是国内美国都和sap有关，我怎么和你意见有点不一样呢
我刚毕业在国内一家大的SAP顾问公司干过，这些顾问年龄都在40左右，工资很高，出
差的时候，下班了不是回酒店而是去放松。
第一次陪他们去酒吧，小姐们一过来就开始搂着捏胸，把老子给吓坏了（我那时候刚毕
业）
美国这边,下班了我不清楚
我刚毕业在国内一家大的SAP顾问公司干过，这些顾问年龄都在40左右，工资很高，出
差的时候，下班了不是回酒店而是去放松。
第一次陪他们去酒吧，小姐们一过来就开始搂着捏胸，把老子给吓坏了（我那时候刚毕
业）
美国这边,下班了我不清楚
j*t
14 楼
当然！
【在 L********n 的大作中提到】
: 45days lowest price guranttee
: 那我可以要求他们PA么？ 嘿嘿
【在 L********n 的大作中提到】
: 45days lowest price guranttee
: 那我可以要求他们PA么？ 嘿嘿
q*g
15 楼
laser capture microscope 用的是固定后的样品， 可以做qPCR.
j*s
16 楼
还有更搞笑的。某次在外项目，正好是圣诞节，大老板也过来了
分公司前台小妹，带我们这群出差的吃饭，吃完饭大老板给了个红包，就是打发她走的
意思。结果这小妹不走，一直跟着我们去了当地最大的酒吧。大老板很不爽，问她怎么
不陪男朋友，她说没有。问她怎么不回家陪父母，她说她不是本地人。愣是不走
事后，大老板大骂了分公司经理一顿~~~
分公司前台小妹，带我们这群出差的吃饭，吃完饭大老板给了个红包，就是打发她走的
意思。结果这小妹不走，一直跟着我们去了当地最大的酒吧。大老板很不爽，问她怎么
不陪男朋友，她说没有。问她怎么不回家陪父母，她说她不是本地人。愣是不走
事后，大老板大骂了分公司经理一顿~~~
x*y
17 楼
uniquesquared 便宜多阿. 332. music123和zzsound说了, invoice就33X, 加shipping
, 最低355. 低于355他们的计算机根本就不让adjust. 虽然网站policy说的是 PM 110%
guaranteed. 俺没力气去找manager argue了
【在 y****i 的大作中提到】
: 那你还不买那个话放啊，快买了
, 最低355. 低于355他们的计算机根本就不让adjust. 虽然网站policy说的是 PM 110%
guaranteed. 俺没力气去找manager argue了
【在 y****i 的大作中提到】
: 那你还不买那个话放啊，快买了
s*s
18 楼
没问题，无穷这种FFPE“ formalin-fixed, paraffin-embedded tissue”
的kit，比如qiagen rneasy ffpe kit
【在 y***j 的大作中提到】
: 做一个实验， 细胞需要染色然后sort一下再提RNA。
: 染色至少冰上30min，另外再flow cytometer里有几十秒钟的时间温度会升到RT甚至更
: 高.会不会有影响呢？
: formalin fix一下再染色会不会影响下一步的RNA提取呢？准备用qiagen的RNeasy
: micro kit.
: 或者有什么其他专门的可以再进细胞的RNAse inhibitor么？
的kit，比如qiagen rneasy ffpe kit
【在 y***j 的大作中提到】
: 做一个实验， 细胞需要染色然后sort一下再提RNA。
: 染色至少冰上30min，另外再flow cytometer里有几十秒钟的时间温度会升到RT甚至更
: 高.会不会有影响呢？
: formalin fix一下再染色会不会影响下一步的RNA提取呢？准备用qiagen的RNeasy
: micro kit.
: 或者有什么其他专门的可以再进细胞的RNAse inhibitor么？
f*e
19 楼
manager，工资加奖金18w一年。
不算高吧。
【在 s******r 的大作中提到】
: http://www.mitbbs.com/article_t/Dreamer/32962345.html
: 这在Georgia，活得得非常爽吧。
不算高吧。
【在 s******r 的大作中提到】
: http://www.mitbbs.com/article_t/Dreamer/32962345.html
: 这在Georgia，活得得非常爽吧。
y*i
20 楼
我都不懂uniquesquared。
上次你说这个话放是单机500加数字部分400，那原价就是900？然后你355可以买到？
要真那样我都有点动心了。
shipping
110%
【在 x******y 的大作中提到】
: uniquesquared 便宜多阿. 332. music123和zzsound说了, invoice就33X, 加shipping
: , 最低355. 低于355他们的计算机根本就不让adjust. 虽然网站policy说的是 PM 110%
: guaranteed. 俺没力气去找manager argue了
上次你说这个话放是单机500加数字部分400，那原价就是900？然后你355可以买到？
要真那样我都有点动心了。
shipping
110%
【在 x******y 的大作中提到】
: uniquesquared 便宜多阿. 332. music123和zzsound说了, invoice就33X, 加shipping
: , 最低355. 低于355他们的计算机根本就不让adjust. 虽然网站policy说的是 PM 110%
: guaranteed. 俺没力气去找manager argue了
s*s
21 楼
想想Chip－chip怎么做的？做Chip多数都是先fix的，
最多加热一下就解crosslink了
【在 l******u 的大作中提到】
: 不行.
最多加热一下就解crosslink了
【在 l******u 的大作中提到】
: 不行.
x*y
22 楼
uniquesquared.com
msrp 799. street 499, bh.com 389,
unique squared 369. google 10% coupon,
===>332
no ad/da. analog only. If it is with ad/da I will buy however many available
at 332
【在 y****i 的大作中提到】
: 我都不懂uniquesquared。
: 上次你说这个话放是单机500加数字部分400，那原价就是900？然后你355可以买到？
: 要真那样我都有点动心了。
:
: shipping
: 110%
msrp 799. street 499, bh.com 389,
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===>332
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at 332
【在 y****i 的大作中提到】
: 我都不懂uniquesquared。
: 上次你说这个话放是单机500加数字部分400，那原价就是900？然后你355可以买到？
: 要真那样我都有点动心了。
:
: shipping
: 110%
e*r
23 楼
如果解crosslink的话 RNA recovery 能达到做少呢？
y*i
24 楼
哈哈，可以做神医
available
【在 x******y 的大作中提到】
: uniquesquared.com
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【在 x******y 的大作中提到】
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y*j
25 楼
看了这种FFPE，但是都是比较大量细胞的。
几百以至于几十个个细胞的kit比较少。
另外就是recovery怎么样呢？
【在 s******s 的大作中提到】
: 想想Chip－chip怎么做的？做Chip多数都是先fix的，
: 最多加热一下就解crosslink了
几百以至于几十个个细胞的kit比较少。
另外就是recovery怎么样呢？
【在 s******s 的大作中提到】
: 想想Chip－chip怎么做的？做Chip多数都是先fix的，
: 最多加热一下就解crosslink了
t*o
26 楼
45days lowest price guranttee
这个万一违背了，咋个处理？
这招太好使了！！！！
这个万一违背了，咋个处理？
这招太好使了！！！！
s*a
27 楼
The fixing does affect RNA quality. It's doable, but you need try hard to
get good reproducibility.
get good reproducibility.
e*r
28 楼
Do you have some suggestions? I mean how to get good RNA.
【在 s******a 的大作中提到】
: The fixing does affect RNA quality. It's doable, but you need try hard to
: get good reproducibility.
【在 s******a 的大作中提到】
: The fixing does affect RNA quality. It's doable, but you need try hard to
: get good reproducibility.
l*u
29 楼
Chip - Chip
是做DNA吧.
别人是要抽RNA做microarray, 肯定不行.
【在 s******s 的大作中提到】
: 想想Chip－chip怎么做的？做Chip多数都是先fix的，
: 最多加热一下就解crosslink了
是做DNA吧.
别人是要抽RNA做microarray, 肯定不行.
【在 s******s 的大作中提到】
: 想想Chip－chip怎么做的？做Chip多数都是先fix的，
: 最多加热一下就解crosslink了
l*u
30 楼
你fix, 然后还有染色RNA 还要 facs
RNA都降解的很多了, RIN number 很难到6.0
做array 就不可靠了.
【在 y***j 的大作中提到】
: why?
RNA都降解的很多了, RIN number 很难到6.0
做array 就不可靠了.
【在 y***j 的大作中提到】
: why?
e*r
31 楼
一般RIN number多少是底线？做芯片。
【在 l******u 的大作中提到】
: 你fix, 然后还有染色RNA 还要 facs
: RNA都降解的很多了, RIN number 很难到6.0
: 做array 就不可靠了.
【在 l******u 的大作中提到】
: 你fix, 然后还有染色RNA 还要 facs
: RNA都降解的很多了, RIN number 很难到6.0
: 做array 就不可靠了.
l*u
32 楼
6.5
我自己LCM后的样品底线是7.5, 基本都是8.0以上.
RIN 越高, 结果越可信.
【在 e*r 的大作中提到】
: 一般RIN number多少是底线？做芯片。
我自己LCM后的样品底线是7.5, 基本都是8.0以上.
RIN 越高, 结果越可信.
【在 e*r 的大作中提到】
: 一般RIN number多少是底线？做芯片。
e*r
33 楼
你LCM用丙酮固定先还是乙醇乙酸？
【在 l******u 的大作中提到】
: 6.5
: 我自己LCM后的样品底线是7.5, 基本都是8.0以上.
: RIN 越高, 结果越可信.
【在 l******u 的大作中提到】
: 6.5
: 我自己LCM后的样品底线是7.5, 基本都是8.0以上.
: RIN 越高, 结果越可信.
l*u
34 楼
我LCM是切冰冻片.
就用100% EtOH 固定加脱水.
我用自己发明的方法通过参照点系列切片法定位细胞. 参照片子可以用任何方法染色,
目标片子不染色, 用100% EtOH 固定加脱水, 然后可以通过参照片上的定位找到目标
片上的细胞. 切下的细胞抽RNA,最高可以达到 9.0 以上的RIN.
【在 e*r 的大作中提到】
: 你LCM用丙酮固定先还是乙醇乙酸？
就用100% EtOH 固定加脱水.
我用自己发明的方法通过参照点系列切片法定位细胞. 参照片子可以用任何方法染色,
目标片子不染色, 用100% EtOH 固定加脱水, 然后可以通过参照片上的定位找到目标
片上的细胞. 切下的细胞抽RNA,最高可以达到 9.0 以上的RIN.
【在 e*r 的大作中提到】
: 你LCM用丙酮固定先还是乙醇乙酸？
e*r
35 楼
每次能得到多少RNA呢？总量。 测的时候取多少呢？
【在 l******u 的大作中提到】
: 我LCM是切冰冻片.
: 就用100% EtOH 固定加脱水.
: 我用自己发明的方法通过参照点系列切片法定位细胞. 参照片子可以用任何方法染色,
: 目标片子不染色, 用100% EtOH 固定加脱水, 然后可以通过参照片上的定位找到目标
: 片上的细胞. 切下的细胞抽RNA,最高可以达到 9.0 以上的RIN.
【在 l******u 的大作中提到】
: 我LCM是切冰冻片.
: 就用100% EtOH 固定加脱水.
: 我用自己发明的方法通过参照点系列切片法定位细胞. 参照片子可以用任何方法染色,
: 目标片子不染色, 用100% EtOH 固定加脱水, 然后可以通过参照片上的定位找到目标
: 片上的细胞. 切下的细胞抽RNA,最高可以达到 9.0 以上的RIN.
l*u
36 楼
切的细胞多RNA就多啊 ,取决你切多少细胞.
一般每个动物细胞20-50 pg total RNA.
用 Agilent Bioanalyzer 测 RNA quality 只要1微升
但是 Agilent Bioanalyzer 测RNA 浓度不准确,
所以要用nano drop 测浓度,
但是浓度在 在 20ng/微升以下, nanodrop 也测不准
【在 e*r 的大作中提到】
: 每次能得到多少RNA呢？总量。 测的时候取多少呢？
一般每个动物细胞20-50 pg total RNA.
用 Agilent Bioanalyzer 测 RNA quality 只要1微升
但是 Agilent Bioanalyzer 测RNA 浓度不准确,
所以要用nano drop 测浓度,
但是浓度在 在 20ng/微升以下, nanodrop 也测不准
【在 e*r 的大作中提到】
: 每次能得到多少RNA呢？总量。 测的时候取多少呢？
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