t*u
2 楼
还小的时候盼着长大，长大了就没有那么多的功课要做，离开校园就没有那么多的约束
，见到老师不用像老鼠遇见猫，爸爸妈妈会耐心听你说话，偶尔还可以给别人一个可理
喻的意见...
时间一点一滴悄悄地流逝，饱尝“愁滋味”的我终于熬过了学生时代，终于走出了校园
，终于参加了工作。一路走来，真的很心酸。友情也好，爱情也罢，时隔多年再提起当
年，记忆已经不是那么清晰，从前发生的种种早已释怀，再次想起的时候已不能惊起心
中波澜。我拼命地回忆，拾起每一个瞬间，还是会泪流满面，原来每一段路我都在领悟
。再美好也只能是曾经，回忆就是回忆，在也回不到过去。
记得刘若英的那首歌“我想我会一直孤单...当孤单已经变成一种习惯...我想我会一直
孤单...”
，见到老师不用像老鼠遇见猫，爸爸妈妈会耐心听你说话，偶尔还可以给别人一个可理
喻的意见...
时间一点一滴悄悄地流逝，饱尝“愁滋味”的我终于熬过了学生时代，终于走出了校园
，终于参加了工作。一路走来，真的很心酸。友情也好，爱情也罢，时隔多年再提起当
年，记忆已经不是那么清晰，从前发生的种种早已释怀，再次想起的时候已不能惊起心
中波澜。我拼命地回忆，拾起每一个瞬间，还是会泪流满面，原来每一段路我都在领悟
。再美好也只能是曾经，回忆就是回忆，在也回不到过去。
记得刘若英的那首歌“我想我会一直孤单...当孤单已经变成一种习惯...我想我会一直
孤单...”
z*n
3 楼
话说前虚江县城隍庙庙祝戴先生被李大人半强迫的安排活计，推辞不掉，只好无奈答应
,出了总察院衙署，在回去的路上心头惴惴、神思不属。
他算是搞清楚了，李大人是想要整治那个什么叫做南城兵马司察院的衙门，所以利
用他出面打头阵。
这是政治斗争啊，他这样的小人物插进去可不是好玩的！戴先生为自己的发现感到
很惊恐。
他的庙祝差事是怎么没的？那新来县尊的小妾和县丞夫人去城隍庙上香，因为位置
次序闹了矛盾，他出于正房高于侧室的原则，稍微偏了县丞夫人几句。
随即被县尊小妾吹了枕头风，祖传三代的庙祝铁饭碗就此丢掉。城隍庙是太祖钦封
的官方庙宇，庙祝等同于县衙差役，自然县尊一句话就能让他滚蛋了。
京城的政治斗争，肯定比这县里还厉害十倍罢…差事生意还是小事，会不会丢掉命？
回到崇文门外歇脚住处，戴恭将心中担忧对自家娘子说了，却听韩氏数落道：“你
这没志气的真气煞人也！虽然我这妇道人家不懂行情，但那日我去告状，亲眼看见李大
老爷好大的排场。在天子脚下能有大摇大摆的派头，肯定是个得志人物，若能靠上他，
不是天大的福分么。难道不比我们在京城两眼摸黑自己瞎闯好？”
戴恭偷偷仔细观察娘子脸面，确定没有什么异色，才道：“神仙打架，小鬼遭殃，
你又不是不知道…”
“那又怎么的？你没见李家在县里多么兴盛，我们若被李大老爷连累的在京师立不
住脚，那凭此人情，回了虚江便可以去李家那里讨碗饭吃，总没坏事。”
戴恭被娘子说的无语，一夜再无话。到了次日。戴恭早早将娘子打发到另一处，随
后静待李大人上门，还有两个伙计，也被打发出去。
果然等到日头初升时候，便见李大人粗衣布服，带着强壮亲信到了他住处，门外还
有几个准备观望报信的。
按照昨日的说法，这李大人和那亲信是要扮成他的伙计。然后一起被兵马司抓去。
李佑微服装作伙计。不是恶趣味，也不是有受虐倾向，确实是工作需要。百度搜索
-（七月中文网 wWw.7ycn.nEt）无弹窗,
一是为了亲眼目睹作为实证♀年头没有多媒体设备，办案取证有短板，而且容易被
抵赖。
如果能有主审官一句“本官亲眼所见。尔还敢抵赖”，那称得上威力无穷。所以微
服私访是清官小说中必不可少的元素，小说家言总是有些现实基础。
二是为了抵消可能会出现的说情压力。京城关系网太复杂，他李佑虽然不怕，但总
是个掣肘。
但如果他自己都被当嫌犯抓去，那么之后李大人暴跳如雷并血洗南城在情理上就是
理所应当，资格不够的人怎么好意思出面说情和阻拦？
不得不说，在国朝官场做什么事，都是十分讲究策略的。无论是讲理还是不讲理。
讲理是和人讲理，不讲理也是和人不讲理，归根结底还是要先顾及到人，然后才是理。
戴恭住的这个地方是专为外地行商准备的旅店，院中地方狭窄但有厢房兼货仓，居
住存货两便。
李佑被引到屋中，而他带来的随从韩宗则提着酒食盒子尾随进来。便在房中简单摆
了一桌。
李大人看着屋中无人，随意问道：“你家娘子不在么？”
戴恭心里抽了抽，暗赞自己有先见之明，答道：“已经出外了，说是要买些针线去
用。”
李佑道：“也好。免得出意外，你也不用紧张。不会有什么事。”
一直等到日上三杆，眼看天近午时，还没见动静。李大人不禁暗暗嘀咕，那陆大使
说南城兵马司来抓肥羊总是很快的，当日得了消息，第二日准动手。怎么还不见过来？
正在想时，忽见有几个皂服差役闯进院中，叫道：“有人么？出来！”
戴恭手足失措的跳出门槛，神情紧张的迎上前去，微微弯腰问道：“几位差爷，有
何贵干？”
李佑与韩宗也出了房门，看到戴先生的表现，李大人对韩宗低声道：“姓戴德演技
不错，真像那么回事。”
却听带头的老差役不耐烦的喝道：“有人告发你们形迹可疑，与我去兵马司衙门里
走一遭！辨明清楚后再做处置！”
还真有这样来抓人的…戴恭叫屈道：“在下有路引，怎么就是形迹可疑？”
“休要罗唣！你们去衙门里说话！”那差役抬头忽然看见了戴恭身后的李佑与韩宗
，特别是李佑，敝布破帽也掩不住他的拉风气质，便疑问道：“这是伙计？”
“正是，正是。”戴恭应声道。
面对目光探询，韩宗麻利的弯腰示意，李佑也尽力挤出“谦卑”之色，昂首对着差
役们点点头。
兵马司差役疑色更重，以他的眼力，实在没看出那小子哪点像是伙计…
京师乃天子脚下，卧虎藏龙比比皆是。所以他们这些差役的直属上司，也就是当今
兵马司吏目到任后反复强调过，出来抓肥羊，要以谨防“扮猪吃老虎”为第一要则，要
“宁可漏网三千，不可错抓一个”。
为此还建立了与宣课分司良好的联动关系，一改漫天撒网的高风险慕，精确找准市
场定位，实现业绩突破。
这才是长久之道，他们南城兵马司已经创造了“安全生产三年无事故”的记录，正
在朝着新记录努力。
过完今年就是四年了，那可是载入京师五城各衙门安全生产史册的四年啊。在官员
满街走，勋贵多如狗的京城，在一块砖头掉下来就能砸到七八个和权贵官员势要之家有
关系的京城，四年踩不到地雷，这是多么不容易。
眼前这个年轻人的德性，就很像扮猪者哪，这兵马司的老差役轻易便看出了李大人
的本质！
可叹岁月消磨催人老，任是谁也不得不服。若是三年前的李佑，演个伙计当然不在
话下，而且是惟妙惟肖不会让人看出破绽。
但这三年来，李佑习惯了演出各种忠臣义士青天清流，戏路逐渐狭窄，演技也出现
了慕化严重的特点。
关键在于，李大人沉醉于成功而尚不自知，今天非要亲自上阵演低三下四的年轻小
伙计，难免出现败笔。何止粗糙生硬，简直就是漏洞百出！
老差役挥手阻止了手下粗鲁拉人的举动，又狐疑的扫了几眼。一个不像伙计的人站
在这里号称是伙计，必有内情。
若在战乱年间，这就是十足的奸细卖相，但如今天下太平，没什么奸细不奸细的…
行走京师安全第一，老差役正要开口带领手下拔腿拔腿走人。
戴恭长长的出了口气，便有种送瘟神的松快感。差役们主动走人，这下李大人却是
怨不着他了。
我靠！李佑勃然大怒，这年头扮猪吃老虎都如此困难了吗！他苦心筹谋了数日的计
划，怎能这样收场！在手下和陆大使等人面前，这脸也丢不起！
他一个箭步冲上前去，用虚江方言指着老差役道：“天子脚下乃首善之区，你们无
故闯入骚扰良民，难道为所欲为后便想一走了之么？圣人云，知错能改善莫大焉！须得
给我等一个说法！”
差役们愕然回首，虽然这南音听得不大懂，但可以分辨出不是什么好话。
李大人身边的韩宗连忙赶上前去，暗中塞了一锭银子，将领头的老差役拉到院中角
落，低声道：“我家公子在江南老家读书，书没读成却读迂了，认定读万卷书不如行万
里路。但家里管得严，县里请不到路引，只得扮作伙计跟随行商沿途周游。”
哦，老差役心下了然，难怪像是大户人家出身的，难怪说话如此不着调，原来是一
个没经过历练的外地富家子弟。不过看在银子份上就算了，今日来这趟不就是为的求财
么。
韩宗却又道：“我家公子不知人间险恶，京师里也别无所靠，没人管得了他 的跟
着奔波苦不堪言，求差爷将我家公子抓去，叫他吃一垫长一智，晓得外面厉害，也好早
早回家！”随即又塞了一锭分量不轻的银子。
财帛动人心，那老差役心花怒放，这可是不错，一举两得■这行二十年，第一次见
送银子求着被抓的，稀奇稀奇。只要是无依无靠孤身在京的富家子弟，那就好办！
这貌似仆役的随从也是个自以为是的蠢货！进了衙门后，想出来可就不那么容易了
。不过那和他无关系了，他只管抓人，有钱拿更是要抓。
心里计议已定，老差役对手下挥手道：“院中三人，全部带走！”
李佑在院中咆哮：“我并无过错，尔等凭何捕人！这天理何在，国法不容！我要上
告！”
老差役看在眼中，越发确定这个年轻人是色厉内荏c有靠山的，谁会开口天理闭口
国法？又一个读书读傻却不明世事的人，令人可叹可怜，老差役摇摇头。
戴先生望着李佑，愣在院中不动，被兵马司差役用力推搡，一不留神险些摔了。
,出了总察院衙署，在回去的路上心头惴惴、神思不属。
他算是搞清楚了，李大人是想要整治那个什么叫做南城兵马司察院的衙门，所以利
用他出面打头阵。
这是政治斗争啊，他这样的小人物插进去可不是好玩的！戴先生为自己的发现感到
很惊恐。
他的庙祝差事是怎么没的？那新来县尊的小妾和县丞夫人去城隍庙上香，因为位置
次序闹了矛盾，他出于正房高于侧室的原则，稍微偏了县丞夫人几句。
随即被县尊小妾吹了枕头风，祖传三代的庙祝铁饭碗就此丢掉。城隍庙是太祖钦封
的官方庙宇，庙祝等同于县衙差役，自然县尊一句话就能让他滚蛋了。
京城的政治斗争，肯定比这县里还厉害十倍罢…差事生意还是小事，会不会丢掉命？
回到崇文门外歇脚住处，戴恭将心中担忧对自家娘子说了，却听韩氏数落道：“你
这没志气的真气煞人也！虽然我这妇道人家不懂行情，但那日我去告状，亲眼看见李大
老爷好大的排场。在天子脚下能有大摇大摆的派头，肯定是个得志人物，若能靠上他，
不是天大的福分么。难道不比我们在京城两眼摸黑自己瞎闯好？”
戴恭偷偷仔细观察娘子脸面，确定没有什么异色，才道：“神仙打架，小鬼遭殃，
你又不是不知道…”
“那又怎么的？你没见李家在县里多么兴盛，我们若被李大老爷连累的在京师立不
住脚，那凭此人情，回了虚江便可以去李家那里讨碗饭吃，总没坏事。”
戴恭被娘子说的无语，一夜再无话。到了次日。戴恭早早将娘子打发到另一处，随
后静待李大人上门，还有两个伙计，也被打发出去。
果然等到日头初升时候，便见李大人粗衣布服，带着强壮亲信到了他住处，门外还
有几个准备观望报信的。
按照昨日的说法，这李大人和那亲信是要扮成他的伙计。然后一起被兵马司抓去。
李佑微服装作伙计。不是恶趣味，也不是有受虐倾向，确实是工作需要。百度搜索
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一是为了亲眼目睹作为实证♀年头没有多媒体设备，办案取证有短板，而且容易被
抵赖。
如果能有主审官一句“本官亲眼所见。尔还敢抵赖”，那称得上威力无穷。所以微
服私访是清官小说中必不可少的元素，小说家言总是有些现实基础。
二是为了抵消可能会出现的说情压力。京城关系网太复杂，他李佑虽然不怕，但总
是个掣肘。
但如果他自己都被当嫌犯抓去，那么之后李大人暴跳如雷并血洗南城在情理上就是
理所应当，资格不够的人怎么好意思出面说情和阻拦？
不得不说，在国朝官场做什么事，都是十分讲究策略的。无论是讲理还是不讲理。
讲理是和人讲理，不讲理也是和人不讲理，归根结底还是要先顾及到人，然后才是理。
戴恭住的这个地方是专为外地行商准备的旅店，院中地方狭窄但有厢房兼货仓，居
住存货两便。
李佑被引到屋中，而他带来的随从韩宗则提着酒食盒子尾随进来。便在房中简单摆
了一桌。
李大人看着屋中无人，随意问道：“你家娘子不在么？”
戴恭心里抽了抽，暗赞自己有先见之明，答道：“已经出外了，说是要买些针线去
用。”
李佑道：“也好。免得出意外，你也不用紧张。不会有什么事。”
一直等到日上三杆，眼看天近午时，还没见动静。李大人不禁暗暗嘀咕，那陆大使
说南城兵马司来抓肥羊总是很快的，当日得了消息，第二日准动手。怎么还不见过来？
正在想时，忽见有几个皂服差役闯进院中，叫道：“有人么？出来！”
戴恭手足失措的跳出门槛，神情紧张的迎上前去，微微弯腰问道：“几位差爷，有
何贵干？”
李佑与韩宗也出了房门，看到戴先生的表现，李大人对韩宗低声道：“姓戴德演技
不错，真像那么回事。”
却听带头的老差役不耐烦的喝道：“有人告发你们形迹可疑，与我去兵马司衙门里
走一遭！辨明清楚后再做处置！”
还真有这样来抓人的…戴恭叫屈道：“在下有路引，怎么就是形迹可疑？”
“休要罗唣！你们去衙门里说话！”那差役抬头忽然看见了戴恭身后的李佑与韩宗
，特别是李佑，敝布破帽也掩不住他的拉风气质，便疑问道：“这是伙计？”
“正是，正是。”戴恭应声道。
面对目光探询，韩宗麻利的弯腰示意，李佑也尽力挤出“谦卑”之色，昂首对着差
役们点点头。
兵马司差役疑色更重，以他的眼力，实在没看出那小子哪点像是伙计…
京师乃天子脚下，卧虎藏龙比比皆是。所以他们这些差役的直属上司，也就是当今
兵马司吏目到任后反复强调过，出来抓肥羊，要以谨防“扮猪吃老虎”为第一要则，要
“宁可漏网三千，不可错抓一个”。
为此还建立了与宣课分司良好的联动关系，一改漫天撒网的高风险慕，精确找准市
场定位，实现业绩突破。
这才是长久之道，他们南城兵马司已经创造了“安全生产三年无事故”的记录，正
在朝着新记录努力。
过完今年就是四年了，那可是载入京师五城各衙门安全生产史册的四年啊。在官员
满街走，勋贵多如狗的京城，在一块砖头掉下来就能砸到七八个和权贵官员势要之家有
关系的京城，四年踩不到地雷，这是多么不容易。
眼前这个年轻人的德性，就很像扮猪者哪，这兵马司的老差役轻易便看出了李大人
的本质！
可叹岁月消磨催人老，任是谁也不得不服。若是三年前的李佑，演个伙计当然不在
话下，而且是惟妙惟肖不会让人看出破绽。
但这三年来，李佑习惯了演出各种忠臣义士青天清流，戏路逐渐狭窄，演技也出现
了慕化严重的特点。
关键在于，李大人沉醉于成功而尚不自知，今天非要亲自上阵演低三下四的年轻小
伙计，难免出现败笔。何止粗糙生硬，简直就是漏洞百出！
老差役挥手阻止了手下粗鲁拉人的举动，又狐疑的扫了几眼。一个不像伙计的人站
在这里号称是伙计，必有内情。
若在战乱年间，这就是十足的奸细卖相，但如今天下太平，没什么奸细不奸细的…
行走京师安全第一，老差役正要开口带领手下拔腿拔腿走人。
戴恭长长的出了口气，便有种送瘟神的松快感。差役们主动走人，这下李大人却是
怨不着他了。
我靠！李佑勃然大怒，这年头扮猪吃老虎都如此困难了吗！他苦心筹谋了数日的计
划，怎能这样收场！在手下和陆大使等人面前，这脸也丢不起！
他一个箭步冲上前去，用虚江方言指着老差役道：“天子脚下乃首善之区，你们无
故闯入骚扰良民，难道为所欲为后便想一走了之么？圣人云，知错能改善莫大焉！须得
给我等一个说法！”
差役们愕然回首，虽然这南音听得不大懂，但可以分辨出不是什么好话。
李大人身边的韩宗连忙赶上前去，暗中塞了一锭银子，将领头的老差役拉到院中角
落，低声道：“我家公子在江南老家读书，书没读成却读迂了，认定读万卷书不如行万
里路。但家里管得严，县里请不到路引，只得扮作伙计跟随行商沿途周游。”
哦，老差役心下了然，难怪像是大户人家出身的，难怪说话如此不着调，原来是一
个没经过历练的外地富家子弟。不过看在银子份上就算了，今日来这趟不就是为的求财
么。
韩宗却又道：“我家公子不知人间险恶，京师里也别无所靠，没人管得了他 的跟
着奔波苦不堪言，求差爷将我家公子抓去，叫他吃一垫长一智，晓得外面厉害，也好早
早回家！”随即又塞了一锭分量不轻的银子。
财帛动人心，那老差役心花怒放，这可是不错，一举两得■这行二十年，第一次见
送银子求着被抓的，稀奇稀奇。只要是无依无靠孤身在京的富家子弟，那就好办！
这貌似仆役的随从也是个自以为是的蠢货！进了衙门后，想出来可就不那么容易了
。不过那和他无关系了，他只管抓人，有钱拿更是要抓。
心里计议已定，老差役对手下挥手道：“院中三人，全部带走！”
李佑在院中咆哮：“我并无过错，尔等凭何捕人！这天理何在，国法不容！我要上
告！”
老差役看在眼中，越发确定这个年轻人是色厉内荏c有靠山的，谁会开口天理闭口
国法？又一个读书读傻却不明世事的人，令人可叹可怜，老差役摇摇头。
戴先生望着李佑，愣在院中不动，被兵马司差役用力推搡，一不留神险些摔了。
v*a
4 楼
在做一个跟cell adhesion有关的蛋白，它在apoptosis中也会有作用。in vivo用IB看
tissue中蛋白level的变化，可以看到在apoptosis的过程中该蛋白有一个瞬时的up-
regulation（试了3个不同的抗体，结果都很consistent）；而当我从tissue中提取RNA
做RT-PCR，结果却十分不稳定（来自跟IB相同的animal，结果却都不一样，有的根本看
不到我要的gene，更别提看到induction了）。
后来就没理这个茬，接着往下做细胞培养了。现在做siRNA，发现in vitro也是蛋白有
变化，但用PCR提取培养的细胞中的RNA看的时候（用DNASE I处理过的），又断断续续
的，一会有gene一会又看不到gene（包括用control duplex及未处理的细胞）。看其它
的house-keeping gene都正常。
大家遇到过这种情况吗？按理说做siRNA，是不是在mRNA的level上的变化应该比蛋白多
的？
多谢啊！
tissue中蛋白level的变化，可以看到在apoptosis的过程中该蛋白有一个瞬时的up-
regulation（试了3个不同的抗体，结果都很consistent）；而当我从tissue中提取RNA
做RT-PCR，结果却十分不稳定（来自跟IB相同的animal，结果却都不一样，有的根本看
不到我要的gene，更别提看到induction了）。
后来就没理这个茬，接着往下做细胞培养了。现在做siRNA，发现in vitro也是蛋白有
变化，但用PCR提取培养的细胞中的RNA看的时候（用DNASE I处理过的），又断断续续
的，一会有gene一会又看不到gene（包括用control duplex及未处理的细胞）。看其它
的house-keeping gene都正常。
大家遇到过这种情况吗？按理说做siRNA，是不是在mRNA的level上的变化应该比蛋白多
的？
多谢啊！
G*r
5 楼
鼠哥真是兴趣爱好广泛啊，赞一个~
【在 b*******x 的大作中提到】
: 维多利亚秘密时尚秀里面的。。。
【在 b*******x 的大作中提到】
: 维多利亚秘密时尚秀里面的。。。
M*a
6 楼
刘若英结婚了好伐?
m*5
7 楼
不懂的路过，据说有的时候si RNA只是起到了block其mRNA表达的作用，起不到si 本该
起的作用
起的作用
l*3
8 楼
还有水哇。。。
恩。。。比较应VS的景比较给力。。
恩。。。比较应VS的景比较给力。。
t*r
9 楼
青春一去不复返了 这就是人生
【在 t********u 的大作中提到】
: 还小的时候盼着长大，长大了就没有那么多的功课要做，离开校园就没有那么多的约束
: ，见到老师不用像老鼠遇见猫，爸爸妈妈会耐心听你说话，偶尔还可以给别人一个可理
: 喻的意见...
: 时间一点一滴悄悄地流逝，饱尝“愁滋味”的我终于熬过了学生时代，终于走出了校园
: ，终于参加了工作。一路走来，真的很心酸。友情也好，爱情也罢，时隔多年再提起当
: 年，记忆已经不是那么清晰，从前发生的种种早已释怀，再次想起的时候已不能惊起心
: 中波澜。我拼命地回忆，拾起每一个瞬间，还是会泪流满面，原来每一段路我都在领悟
: 。再美好也只能是曾经，回忆就是回忆，在也回不到过去。
: 记得刘若英的那首歌“我想我会一直孤单...当孤单已经变成一种习惯...我想我会一直
: 孤单...”
【在 t********u 的大作中提到】
: 还小的时候盼着长大，长大了就没有那么多的功课要做，离开校园就没有那么多的约束
: ，见到老师不用像老鼠遇见猫，爸爸妈妈会耐心听你说话，偶尔还可以给别人一个可理
: 喻的意见...
: 时间一点一滴悄悄地流逝，饱尝“愁滋味”的我终于熬过了学生时代，终于走出了校园
: ，终于参加了工作。一路走来，真的很心酸。友情也好，爱情也罢，时隔多年再提起当
: 年，记忆已经不是那么清晰，从前发生的种种早已释怀，再次想起的时候已不能惊起心
: 中波澜。我拼命地回忆，拾起每一个瞬间，还是会泪流满面，原来每一段路我都在领悟
: 。再美好也只能是曾经，回忆就是回忆，在也回不到过去。
: 记得刘若英的那首歌“我想我会一直孤单...当孤单已经变成一种习惯...我想我会一直
: 孤单...”
C*u
10 楼
primer问题吧
还有就是你这个蛋白主要是post－translation modification，和mRNA level水平关系
不大
RNA
【在 v***a 的大作中提到】
: 在做一个跟cell adhesion有关的蛋白，它在apoptosis中也会有作用。in vivo用IB看
: tissue中蛋白level的变化，可以看到在apoptosis的过程中该蛋白有一个瞬时的up-
: regulation（试了3个不同的抗体，结果都很consistent）；而当我从tissue中提取RNA
: 做RT-PCR，结果却十分不稳定（来自跟IB相同的animal，结果却都不一样，有的根本看
: 不到我要的gene，更别提看到induction了）。
: 后来就没理这个茬，接着往下做细胞培养了。现在做siRNA，发现in vitro也是蛋白有
: 变化，但用PCR提取培养的细胞中的RNA看的时候（用DNASE I处理过的），又断断续续
: 的，一会有gene一会又看不到gene（包括用control duplex及未处理的细胞）。看其它
: 的house-keeping gene都正常。
: 大家遇到过这种情况吗？按理说做siRNA，是不是在mRNA的level上的变化应该比蛋白多
还有就是你这个蛋白主要是post－translation modification，和mRNA level水平关系
不大
RNA
【在 v***a 的大作中提到】
: 在做一个跟cell adhesion有关的蛋白，它在apoptosis中也会有作用。in vivo用IB看
: tissue中蛋白level的变化，可以看到在apoptosis的过程中该蛋白有一个瞬时的up-
: regulation（试了3个不同的抗体，结果都很consistent）；而当我从tissue中提取RNA
: 做RT-PCR，结果却十分不稳定（来自跟IB相同的animal，结果却都不一样，有的根本看
: 不到我要的gene，更别提看到induction了）。
: 后来就没理这个茬，接着往下做细胞培养了。现在做siRNA，发现in vitro也是蛋白有
: 变化，但用PCR提取培养的细胞中的RNA看的时候（用DNASE I处理过的），又断断续续
: 的，一会有gene一会又看不到gene（包括用control duplex及未处理的细胞）。看其它
: 的house-keeping gene都正常。
: 大家遇到过这种情况吗？按理说做siRNA，是不是在mRNA的level上的变化应该比蛋白多
C*9
11 楼
不晓得为什么总觉得KATY PERRY最近的人气是给广播狂轰滥炸出来的。
M*a
12 楼
一个孤单的外壳, 却独得完全.
A*y
13 楼
Protein stability changed? Something happened that the protein is not being
degraded.
degraded.
b*x
14 楼
还有很多稀奇古怪的兴趣。。。哈哈
【在 G****r 的大作中提到】
: 鼠哥真是兴趣爱好广泛啊，赞一个~
【在 G****r 的大作中提到】
: 鼠哥真是兴趣爱好广泛啊，赞一个~
w*0
15 楼
结婚了也不一定就不感到孤单啊。
顺便问一句，孤单和寂寞有不同吗？
【在 M******a 的大作中提到】
: 刘若英结婚了好伐?
顺便问一句，孤单和寂寞有不同吗？
【在 M******a 的大作中提到】
: 刘若英结婚了好伐?
h*r
16 楼
很有可能是泛素化途径降解，拿MG132处理下就知道啦
b*x
17 楼
喜欢看女模特们那种自信的眼神，充满阳光和希望。。。呵呵
【在 l********3 的大作中提到】
: 还有水哇。。。
: 恩。。。比较应VS的景比较给力。。
【在 l********3 的大作中提到】
: 还有水哇。。。
: 恩。。。比较应VS的景比较给力。。
M*a
18 楼
孤单没宝盖头, 没家, 寂寞有.
【在 w*****0 的大作中提到】
: 结婚了也不一定就不感到孤单啊。
: 顺便问一句，孤单和寂寞有不同吗？
【在 w*****0 的大作中提到】
: 结婚了也不一定就不感到孤单啊。
: 顺便问一句，孤单和寂寞有不同吗？
v*a
19 楼
多谢提醒。重新order了primer。
已经publish的paper都说我的这个蛋白在basal level时表达量非常低，我的mRNA显示
确实是这样。但不明白为什么IB看蛋白那么多。。。
【在 C*********u 的大作中提到】
: primer问题吧
: 还有就是你这个蛋白主要是post－translation modification，和mRNA level水平关系
: 不大
:
: RNA
已经publish的paper都说我的这个蛋白在basal level时表达量非常低，我的mRNA显示
确实是这样。但不明白为什么IB看蛋白那么多。。。
【在 C*********u 的大作中提到】
: primer问题吧
: 还有就是你这个蛋白主要是post－translation modification，和mRNA level水平关系
: 不大
:
: RNA
c*j
20 楼
喜欢firework这首歌
主要喜欢歌词
主要喜欢歌词
w*0
21 楼
原来孤单是没家的寂寞，寂寞是有家的孤单，哈哈。
【在 M******a 的大作中提到】
: 孤单没宝盖头, 没家, 寂寞有.
【在 M******a 的大作中提到】
: 孤单没宝盖头, 没家, 寂寞有.
v*a
22 楼
能再解释一下吗？不太明白为什么跟protein的degradation有关？我的这个protein不
应该supposed to be degraded啊
being
【在 A******y 的大作中提到】
: Protein stability changed? Something happened that the protein is not being
: degraded.
应该supposed to be degraded啊
being
【在 A******y 的大作中提到】
: Protein stability changed? Something happened that the protein is not being
: degraded.
b*x
23 楼
几乎没几个词。。。呵呵
【在 c*****j 的大作中提到】
: 喜欢firework这首歌
: 主要喜欢歌词
【在 c*****j 的大作中提到】
: 喜欢firework这首歌
: 主要喜欢歌词
b*l
24 楼
孤单是形体的，寂寞是灵魂的。
【在 w*****0 的大作中提到】
: 原来孤单是没家的寂寞，寂寞是有家的孤单，哈哈。
【在 w*****0 的大作中提到】
: 原来孤单是没家的寂寞，寂寞是有家的孤单，哈哈。
O*e
25 楼
很明显，你的RNA extraction and RT没有过关，导致结果不稳定。找个人带你做一把
RNA提取，把protocol搞清楚再说别的。
RNA
【在 v***a 的大作中提到】
: 在做一个跟cell adhesion有关的蛋白，它在apoptosis中也会有作用。in vivo用IB看
: tissue中蛋白level的变化，可以看到在apoptosis的过程中该蛋白有一个瞬时的up-
: regulation（试了3个不同的抗体，结果都很consistent）；而当我从tissue中提取RNA
: 做RT-PCR，结果却十分不稳定（来自跟IB相同的animal，结果却都不一样，有的根本看
: 不到我要的gene，更别提看到induction了）。
: 后来就没理这个茬，接着往下做细胞培养了。现在做siRNA，发现in vitro也是蛋白有
: 变化，但用PCR提取培养的细胞中的RNA看的时候（用DNASE I处理过的），又断断续续
: 的，一会有gene一会又看不到gene（包括用control duplex及未处理的细胞）。看其它
: 的house-keeping gene都正常。
: 大家遇到过这种情况吗？按理说做siRNA，是不是在mRNA的level上的变化应该比蛋白多
RNA提取，把protocol搞清楚再说别的。
RNA
【在 v***a 的大作中提到】
: 在做一个跟cell adhesion有关的蛋白，它在apoptosis中也会有作用。in vivo用IB看
: tissue中蛋白level的变化，可以看到在apoptosis的过程中该蛋白有一个瞬时的up-
: regulation（试了3个不同的抗体，结果都很consistent）；而当我从tissue中提取RNA
: 做RT-PCR，结果却十分不稳定（来自跟IB相同的animal，结果却都不一样，有的根本看
: 不到我要的gene，更别提看到induction了）。
: 后来就没理这个茬，接着往下做细胞培养了。现在做siRNA，发现in vitro也是蛋白有
: 变化，但用PCR提取培养的细胞中的RNA看的时候（用DNASE I处理过的），又断断续续
: 的，一会有gene一会又看不到gene（包括用control duplex及未处理的细胞）。看其它
: 的house-keeping gene都正常。
: 大家遇到过这种情况吗？按理说做siRNA，是不是在mRNA的level上的变化应该比蛋白多
c*j
26 楼
所以才喜欢
LOL
【在 b*******x 的大作中提到】
: 几乎没几个词。。。呵呵
LOL
【在 b*******x 的大作中提到】
: 几乎没几个词。。。呵呵
t*u
27 楼
只是说如同他唱的歌好吧
【在 M******a 的大作中提到】
: 刘若英结婚了好伐?
【在 M******a 的大作中提到】
: 刘若英结婚了好伐?
v*a
28 楼
我以前做其它的都挺好的。就这个gene怎么也不行。
可不可以请教一下你是怎么看RNA和RT-PCR好不好的？我一般是co-amplify S16，我的
S16在每组中都挺稳定的呀。。。PCR出来的S16亮度也基本一致。
【在 O******e 的大作中提到】
: 很明显，你的RNA extraction and RT没有过关，导致结果不稳定。找个人带你做一把
: RNA提取，把protocol搞清楚再说别的。
:
: RNA
可不可以请教一下你是怎么看RNA和RT-PCR好不好的？我一般是co-amplify S16，我的
S16在每组中都挺稳定的呀。。。PCR出来的S16亮度也基本一致。
【在 O******e 的大作中提到】
: 很明显，你的RNA extraction and RT没有过关，导致结果不稳定。找个人带你做一把
: RNA提取，把protocol搞清楚再说别的。
:
: RNA
b*x
29 楼
哈哈
【在 c*****j 的大作中提到】
: 所以才喜欢
: LOL
【在 c*****j 的大作中提到】
: 所以才喜欢
: LOL
w*r
30 楼
真孤单的日子还没开始呢
【在 t********u 的大作中提到】
: 还小的时候盼着长大，长大了就没有那么多的功课要做，离开校园就没有那么多的约束
: ，见到老师不用像老鼠遇见猫，爸爸妈妈会耐心听你说话，偶尔还可以给别人一个可理
: 喻的意见...
: 时间一点一滴悄悄地流逝，饱尝“愁滋味”的我终于熬过了学生时代，终于走出了校园
: ，终于参加了工作。一路走来，真的很心酸。友情也好，爱情也罢，时隔多年再提起当
: 年，记忆已经不是那么清晰，从前发生的种种早已释怀，再次想起的时候已不能惊起心
: 中波澜。我拼命地回忆，拾起每一个瞬间，还是会泪流满面，原来每一段路我都在领悟
: 。再美好也只能是曾经，回忆就是回忆，在也回不到过去。
: 记得刘若英的那首歌“我想我会一直孤单...当孤单已经变成一种习惯...我想我会一直
: 孤单...”
【在 t********u 的大作中提到】
: 还小的时候盼着长大，长大了就没有那么多的功课要做，离开校园就没有那么多的约束
: ，见到老师不用像老鼠遇见猫，爸爸妈妈会耐心听你说话，偶尔还可以给别人一个可理
: 喻的意见...
: 时间一点一滴悄悄地流逝，饱尝“愁滋味”的我终于熬过了学生时代，终于走出了校园
: ，终于参加了工作。一路走来，真的很心酸。友情也好，爱情也罢，时隔多年再提起当
: 年，记忆已经不是那么清晰，从前发生的种种早已释怀，再次想起的时候已不能惊起心
: 中波澜。我拼命地回忆，拾起每一个瞬间，还是会泪流满面，原来每一段路我都在领悟
: 。再美好也只能是曾经，回忆就是回忆，在也回不到过去。
: 记得刘若英的那首歌“我想我会一直孤单...当孤单已经变成一种习惯...我想我会一直
: 孤单...”
O*e
31 楼
S16含量那么高，只有mRNA的质量相当差的时候才会做不出来。
找个less abundant的基因试试你的RT-PCR.
【在 v***a 的大作中提到】
: 我以前做其它的都挺好的。就这个gene怎么也不行。
: 可不可以请教一下你是怎么看RNA和RT-PCR好不好的？我一般是co-amplify S16，我的
: S16在每组中都挺稳定的呀。。。PCR出来的S16亮度也基本一致。
找个less abundant的基因试试你的RT-PCR.
【在 v***a 的大作中提到】
: 我以前做其它的都挺好的。就这个gene怎么也不行。
: 可不可以请教一下你是怎么看RNA和RT-PCR好不好的？我一般是co-amplify S16，我的
: S16在每组中都挺稳定的呀。。。PCR出来的S16亮度也基本一致。
S*p
32 楼
long long time no seen
【在 w****r 的大作中提到】
: 真孤单的日子还没开始呢
【在 w****r 的大作中提到】
: 真孤单的日子还没开始呢
v*a
33 楼
好吧。。。
谢谢啦哈
【在 O******e 的大作中提到】
: S16含量那么高，只有mRNA的质量相当差的时候才会做不出来。
: 找个less abundant的基因试试你的RT-PCR.
谢谢啦哈
【在 O******e 的大作中提到】
: S16含量那么高，只有mRNA的质量相当差的时候才会做不出来。
: 找个less abundant的基因试试你的RT-PCR.
n*a
34 楼
写的真好
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