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transfection of suspension cells

transfection of suspension cells# Biology - 生物学

b*92010-10-19 07:10

1 楼

☆─────────────────────────────────────☆
normantu (Norman) 于 (Sun Jun 12 22:20:05 2011, 美东) 提到:
来美国8年了，已经7年没回去了，今父母一签，很是忐忑不安，求祝福。。。
☆─────────────────────────────────────☆
jacquelinejj (jj) 于 (Sun Jun 12 22:25:22 2011, 美东) 提到:
Bless
☆─────────────────────────────────────☆
feifei2008 (feifei2008) 于 (Sun Jun 12 22:28:30 2011, 美东) 提到:
Bless
☆─────────────────────────────────────☆
mxkwk (m k) 于 (Sun Jun 12 23:17:08 2011, 美东) 提到:
BLESS
☆─────────────────────────────────────☆
fbfb (fbfb) 于 (Sun Jun 12 23:23:50 2011, 美东) 提到:
ding
☆─────────────────────────────────────☆
benbenzhu (笨笨猪) 于 (Sun Jun 12 23:54:07 2011, 美东) 提到:
blesssssss
☆─────────────────────────────────────☆
Tony11 (Tony11) 于 (Mon Jun 13 00:48:03 2011, 美东) 提到:
bless
☆─────────────────────────────────────☆
Rosmarinus (迷迭香) 于 (Mon Jun 13 00:57:00 2011, 美东) 提到:
bless ...
☆─────────────────────────────────────☆
KingMing (洱东金茗) 于 (Mon Jun 13 01:24:15 2011, 美东) 提到:
bless。。。
☆─────────────────────────────────────☆
Liane (Liane) 于 (Mon Jun 13 02:42:19 2011, 美东) 提到:
bless
☆─────────────────────────────────────☆
baozi09 (包子拿来) 于 (Mon Jun 13 11:29:53 2011, 美东) 提到:
bless！
☆─────────────────────────────────────☆
laughmadly (laughmadly) 于 (Mon Jun 13 11:30:01 2011, 美东) 提到:
bless......
☆─────────────────────────────────────☆
vivian060629 (vivian) 于 (Mon Jun 13 11:36:10 2011, 美东) 提到:
Bless!
☆─────────────────────────────────────☆
vegebeef (蔡老牛) 于 (Mon Jun 13 13:23:35 2011, 美东) 提到:
祝福！
☆─────────────────────────────────────☆
chouwacuipin (cuiping) 于 (Mon Jun 13 14:02:37 2011, 美东) 提到:
bless
☆─────────────────────────────────────☆
bbrabbit (bbrabbit) 于 (Mon Jun 13 14:59:07 2011, 美东) 提到:
bless~
☆─────────────────────────────────────☆
FZYX (FZYX) 于 (Mon Jun 13 15:34:24 2011, 美东) 提到:
Bless!
☆─────────────────────────────────────☆
conan8282 (coman) 于 (Mon Jun 13 16:36:02 2011, 美东) 提到:
BLESS!
☆─────────────────────────────────────☆
EChen (EChen) 于 (Mon Jun 13 19:44:48 2011, 美东) 提到:
祝福顺利签过!
☆─────────────────────────────────────☆
mmai (mmai) 于 (Mon Jun 13 20:51:29 2011, 美东) 提到:
bless

X*72010-10-19 07:10

2 楼

都准备干啥？

s*g2010-10-19 07:10

3 楼

我按照Lonza/Amaxa的program做transfection of suspension cells.当时过夜后的细
胞存活率是60%.可是加抗生素选择后几乎就死光光了.即使几天后有20%的细胞,也最后
走向死亡.
有做着方面的专家,给分析一下,是为什么?
以前都做附着细胞的transfection.过夜后活细胞都附着培养皿底部.把含死细胞的培养
液换成新培养液.再加抗生素/培养液就可以得到想要的但细胞克隆了.

X*72010-10-19 07:10

4 楼

我早晨带老二去医生那里做复诊，下午我们带3个娃看电影，然后找个酒吧去坐一会儿
顺带晚餐。

c*r2010-10-19 07:10

5 楼

个人建议哈。这个Amaxa最好还是先做个test。找个GFP plasmid，用他们提供的那个也
可以，然后买个test kit，里面有两个还是三个不同的buffers，然后按照他们的
manual各种情况都做一下。然后flow，这样可以有个比较准确的了解trasfection
efficiency。flow的时候可以加上PI，这样可以了解viability。
这样可以选个比较好的protocol。
如果选好了，这个Amaxa的效率是非常高的。

【在 s*****g 的大作中提到】

: 我按照Lonza/Amaxa的program做transfection of suspension cells.当时过夜后的细
: 胞存活率是60%.可是加抗生素选择后几乎就死光光了.即使几天后有20%的细胞,也最后
: 走向死亡.
: 有做着方面的专家,给分析一下,是为什么?
: 以前都做附着细胞的transfection.过夜后活细胞都附着培养皿底部.把含死细胞的培养
: 液换成新培养液.再加抗生素/培养液就可以得到想要的但细胞克隆了.

o*12010-10-19 07:10

6 楼

怎么，你们都不桑板？

【在 X******7 的大作中提到】

: 都准备干啥？

q*l2010-10-19 07:10

7 楼

杯子里细胞不能太少

z*o2010-10-19 07:10

8 楼

铲雪
上班
吃饭
电视
一家人相互一句节日快乐！ ^_^

m*u2010-10-19 07:10

9 楼

最好先过一两天让细胞缓一缓，transfected gene充分表达后再加抗生素。筛之前先做
个抗生素浓度
titration,摸个合适浓度。

【在 s*****g 的大作中提到】

b*l2010-10-19 07:10

10 楼

大叔昨天摔挺厉害的，不知道原计划还能不能执行了，我们打算去bulid a bear做两个
熊的~~

s*g2010-10-19 07:10

11 楼

最好先过一两天让细胞缓一缓--done 1day or 2 days
抗生素浓度 titration--done

【在 m*****u 的大作中提到】

: 最好先过一两天让细胞缓一缓，transfected gene充分表达后再加抗生素。筛之前先做
: 个抗生素浓度
: titration,摸个合适浓度。

n*s2010-10-19 07:10

12 楼

周末决定学学大数据，干技术活很辛苦。
来美国别的还好，但是这个英语交流始终不登大雅之堂，唉。
等师太来了，一起练股的猫宁。。。

c*r2010-10-19 07:10

13 楼

关键是，有test transfection efficiency吗？大概多高？用的什么antibiotics做的
selection？

【在 s*****g 的大作中提到】

: 最好先过一两天让细胞缓一缓--done 1day or 2 days
: 抗生素浓度 titration--done

z*o2010-10-19 07:10

14 楼

您老coding哇
同道同道
保不齐师太会喜欢韩剧的嘿嘿康桑斯密达

【在 n*******s 的大作中提到】

: 周末决定学学大数据，干技术活很辛苦。
: 来美国别的还好，但是这个英语交流始终不登大雅之堂，唉。
: 等师太来了，一起练股的猫宁。。。

s*g2010-10-19 07:10

15 楼

test transfection efficiency没有做.因为他们网上有我细胞系的program参数。大约
在60%
用的什么antibiotics做的selection -Hygromycin （通常你们的细胞系都要多少浓度
？）我是用MTT来测titration的。
是否是由于四细胞和活细胞在一起，死细胞对活细胞有影响，而造成的呢？

z*o2010-10-19 07:10

16 楼

大叔不容易啊
在家烤个熊蛋糕好伐

【在 b*****l 的大作中提到】

: 大叔昨天摔挺厉害的，不知道原计划还能不能执行了，我们打算去bulid a bear做两个
: 熊的~~

z*o2010-10-19 07:10

17 楼

三娃看电影都坐得住？赞

【在 X******7 的大作中提到】

: 我早晨带老二去医生那里做复诊，下午我们带3个娃看电影，然后找个酒吧去坐一会儿
: 顺带晚餐。

n*s2010-10-19 07:10

18 楼

韩剧。。。，以后补上

【在 z***o 的大作中提到】

: 您老coding哇
: 同道同道
: 保不齐师太会喜欢韩剧的嘿嘿康桑斯密达

X*72010-10-19 07:10

19 楼

小朋友放假，老大休假一天。

【在 o******1 的大作中提到】

: 怎么，你们都不桑板？

X*72010-10-19 07:10

20 楼

我们也下雪了，要5英寸捏。

【在 z***o 的大作中提到】

: 铲雪
: 上班
: 吃饭
: 电视
: 一家人相互一句节日快乐！ ^_^

X*72010-10-19 07:10

21 楼

这种天气太容易摔到了，大家都注意脚下一点吧。

【在 b*****l 的大作中提到】

: 大叔昨天摔挺厉害的，不知道原计划还能不能执行了，我们打算去bulid a bear做两个
: 熊的~~

X*72010-10-19 07:10

22 楼

PG电影，他们自己要求的。

【在 z***o 的大作中提到】

: 三娃看电影都坐得住？赞

s*92010-10-19 07:10

23 楼

后天婆婆来喽。
所以明天采购一些杂物，再把婆婆的房间打扫一遍，干干净净的~

o*12010-10-19 07:10

24 楼

赞爱婆如妈的好媳妇。

【在 s*********9 的大作中提到】

: 后天婆婆来喽。
: 所以明天采购一些杂物，再把婆婆的房间打扫一遍，干干净净的~

i*i2010-10-19 07:10

25 楼

祝女汉子，除雪

【在 X******7 的大作中提到】

: 都准备干啥？