自己动手做全长cDNA的问题# Biology - 生物学
m*o
1 楼
公婆将于9/20/2011乘坐MU587航班从上海浦东机场飞往纽约肯尼迪机场。他们不会说英
文，希望能寻找同航班的中国飞友。请站内联系。谢谢。
文，希望能寻找同航班的中国飞友。请站内联系。谢谢。
d*w
2 楼
我们现在想准备申请绿卡，不过，H1-B还有1年也就到期了，该renew了，所以，我想问
问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
x*q
3 楼
用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
p*i
4 楼
大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
多谢各位了～
谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
多谢各位了～
F*n
5 楼
没有关系，没有冲突，两码事。
f*5
6 楼
因为为了让他们开户，新浪送ipad给她们。
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
C*e
7 楼
自己动手做是什么意思？
另外要看你下一步是要做什么的
做RT-PCR呢
还是做primer extension呢
还是做libary呢。。。。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
另外要看你下一步是要做什么的
做RT-PCR呢
还是做primer extension呢
还是做libary呢。。。。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
f*e
8 楼
当然可以一起
你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
【在 d**w 的大作中提到】
: 我们现在想准备申请绿卡，不过，H1-B还有1年也就到期了，该renew了，所以，我想问
: 问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
: 吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
: 如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
: 种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
【在 d**w 的大作中提到】
: 我们现在想准备申请绿卡，不过，H1-B还有1年也就到期了，该renew了，所以，我想问
: 问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
: 吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
: 如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
: 种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
d*u
9 楼
哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
真的是无底线。。。
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
真的是无底线。。。
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
p*i
10 楼
多谢～
就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
【在 C*******e 的大作中提到】
: 自己动手做是什么意思？
: 另外要看你下一步是要做什么的
: 做RT-PCR呢
: 还是做primer extension呢
: 还是做libary呢。。。。
就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
【在 C*******e 的大作中提到】
: 自己动手做是什么意思？
: 另外要看你下一步是要做什么的
: 做RT-PCR呢
: 还是做primer extension呢
: 还是做libary呢。。。。
d*w
11 楼
是啊。第一个三年，下面再续三年。
【在 f******e 的大作中提到】
: 当然可以一起
: 你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
【在 f******e 的大作中提到】
: 当然可以一起
: 你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
x*q
12 楼
大部分是iphone客户端。。。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 f*******5 的大作中提到】
: 因为为了让他们开户，新浪送ipad给她们。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 f*******5 的大作中提到】
: 因为为了让他们开户，新浪送ipad给她们。
D*a
13 楼
一个cdna克隆几十块钱，何必呢？想想用掉的试剂和时间。
【在 p******i 的大作中提到】
: 多谢～
: 就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
: 提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
【在 p******i 的大作中提到】
: 多谢～
: 就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
: 提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
g*i
14 楼
自命清高个啥啊
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
Z*5
15 楼
前几天刚用invitrogen的5´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA
Ends, Version 2.0搞定一个13kb的RACE出来。
RNA质量很重要；要是只做反转录的话，invitrogen的SuperScriptTM Ⅲ First-Strand
Synthesis System可能更好；可以考虑在3'UTR位置多设计几条Gene Specific
Primers，效果比Oligo dT应该要好很多；多设计几条nested PCR引物，进行多轮扩增。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
Ends, Version 2.0搞定一个13kb的RACE出来。
RNA质量很重要；要是只做反转录的话，invitrogen的SuperScriptTM Ⅲ First-Strand
Synthesis System可能更好；可以考虑在3'UTR位置多设计几条Gene Specific
Primers，效果比Oligo dT应该要好很多；多设计几条nested PCR引物，进行多轮扩增。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
f*5
16 楼
这些人以前从香港买也方便
【在 x***q 的大作中提到】
: 大部分是iphone客户端。。。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 x***q 的大作中提到】
: 大部分是iphone客户端。。。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
p*i
17 楼
我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
的管子……
现在还在找其他家有没有卖……
【在 D***a 的大作中提到】
: 一个cdna克隆几十块钱，何必呢？想想用掉的试剂和时间。
的管子……
现在还在找其他家有没有卖……
【在 D***a 的大作中提到】
: 一个cdna克隆几十块钱，何必呢？想想用掉的试剂和时间。
d*u
18 楼
不清高,但也犯不上攀那帮了色呀。见一垃圾桶还要往里钻的，你不会是头一个吧？。
【在 g***i 的大作中提到】
: 自命清高个啥啊
【在 g***i 的大作中提到】
: 自命清高个啥啊
C*e
19 楼
你要的基因有多长？
一个是前面RNA提得要好
做后面的实验的时候如果有可能就加些RNaseIn之类的RNase inhibitor
Ambion,Promega之类的公司都有的
另外就是反转录酶要好
像ls有人说的invitrogen的
还有我用过USB的M-MLV的也不错
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
一个是前面RNA提得要好
做后面的实验的时候如果有可能就加些RNaseIn之类的RNase inhibitor
Ambion,Promega之类的公司都有的
另外就是反转录酶要好
像ls有人说的invitrogen的
还有我用过USB的M-MLV的也不错
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
a*a
20 楼
感觉美国用黑莓的比较多
D*a
21 楼
查查openbiosystems
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
g*i
22 楼
没，我对这些没兴趣，但我不觉得他们是垃圾，各有各的价值
【在 d********u 的大作中提到】
: 不清高,但也犯不上攀那帮了色呀。见一垃圾桶还要往里钻的，你不会是头一个吧？。
【在 d********u 的大作中提到】
: 不清高,但也犯不上攀那帮了色呀。见一垃圾桶还要往里钻的，你不会是头一个吧？。
C*n
23 楼
美国精蝇们都用ipad==>想当精蝇一定要买ipad
N*3
24 楼
赞优越感～
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
f*a
25 楼
和您一起灌水，我很惭愧
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
i*1
26 楼
同意，这个帖子很能暴露某些果黑的素质。
中国几十年教育的误区就是太注重学业，而忽视了素质教育。
结果就是网上到处是胡乱骂街的重度精神病患者。
希望版主能把这些马甲清理出去，恢复一个干净的环境。。。
【在 f********a 的大作中提到】
: 和您一起灌水，我很惭愧
中国几十年教育的误区就是太注重学业，而忽视了素质教育。
结果就是网上到处是胡乱骂街的重度精神病患者。
希望版主能把这些马甲清理出去，恢复一个干净的环境。。。
【在 f********a 的大作中提到】
: 和您一起灌水，我很惭愧
相关阅读
德国的博士CELL RESEARCH的影响因子接近PNAS了TCR Va and Ja DNA sequence任何一个飞速发展的漂亮女人都跟一个男大牛有亲密无间的男女关系。2010 JCR (Top 500, xls file)颜宁在美国发展会怎么样？求篇paper能够上市的chem/bio背景公司是个什么水平？Thomson Reuters Releases Journal Citation Reports for 2010What is advantage and disadvantage of intronless genesRuta之前拿到了MIT 的offer吗？那种转染试剂比较好?Methylation实验中PCR的问题Disease Models & Mechanisms能否把v5接到dynal beads上做ip请问genotype和phenotype的相关性分析关于裴刚的那个帖子还是删了吧太搞了，裴钢和马兰离婚是谣言细胞免疫染色Leading Research Organizations Announce Top-Tier, Open Access Journal for Biomedical and Life Scienc