自己动手做全长cDNA的问题# Biology - 生物学
m*o
1 楼
公婆将于9/20/2011乘坐MU587航班从上海浦东机场飞往纽约肯尼迪机场。他们不会说英
文，希望能寻找同航班的中国飞友。请站内联系。谢谢。
文，希望能寻找同航班的中国飞友。请站内联系。谢谢。
d*w
2 楼
我们现在想准备申请绿卡，不过，H1-B还有1年也就到期了，该renew了，所以，我想问
问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
x*q
3 楼
用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
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p*i
4 楼
大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
多谢各位了～
谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
多谢各位了～
F*n
5 楼
没有关系，没有冲突，两码事。
f*5
6 楼
因为为了让他们开户，新浪送ipad给她们。
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
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C*e
7 楼
自己动手做是什么意思？
另外要看你下一步是要做什么的
做RT-PCR呢
还是做primer extension呢
还是做libary呢。。。。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
另外要看你下一步是要做什么的
做RT-PCR呢
还是做primer extension呢
还是做libary呢。。。。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
f*e
8 楼
当然可以一起
你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
【在 d**w 的大作中提到】
: 我们现在想准备申请绿卡，不过，H1-B还有1年也就到期了，该renew了，所以，我想问
: 问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
: 吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
: 如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
: 种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
【在 d**w 的大作中提到】
: 我们现在想准备申请绿卡，不过，H1-B还有1年也就到期了，该renew了，所以，我想问
: 问，所以，这两者申请期间有手续上的冲突吗？应该先申请H1-B吗？等过了再申请绿卡
: 吗？是不是绿卡申请会影响H1-B的renew呢？
: 如果诸位有知晓明白的，请澄清一下这一点。我个人认为，H1-B是允许有移民倾向的一
: 种签证，应该不会跟绿卡申请有冲突的？不过，我也没有法律依据，自己瞎猜的。
d*u
9 楼
哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
真的是无底线。。。
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
真的是无底线。。。
【在 x***q 的大作中提到】
: 用新浪微博跟几个国内的明星，发现他们大部分都是用iPhone或者iPad。
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p*i
10 楼
多谢～
就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
【在 C*******e 的大作中提到】
: 自己动手做是什么意思？
: 另外要看你下一步是要做什么的
: 做RT-PCR呢
: 还是做primer extension呢
: 还是做libary呢。。。。
就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
【在 C*******e 的大作中提到】
: 自己动手做是什么意思？
: 另外要看你下一步是要做什么的
: 做RT-PCR呢
: 还是做primer extension呢
: 还是做libary呢。。。。
d*w
11 楼
是啊。第一个三年，下面再续三年。
【在 f******e 的大作中提到】
: 当然可以一起
: 你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
【在 f******e 的大作中提到】
: 当然可以一起
: 你的H1b是第一个3年 还剩1年么？
x*q
12 楼
大部分是iphone客户端。。。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 f*******5 的大作中提到】
: 因为为了让他们开户，新浪送ipad给她们。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 f*******5 的大作中提到】
: 因为为了让他们开户，新浪送ipad给她们。
D*a
13 楼
一个cdna克隆几十块钱，何必呢？想想用掉的试剂和时间。
【在 p******i 的大作中提到】
: 多谢～
: 就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
: 提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
【在 p******i 的大作中提到】
: 多谢～
: 就是老板为了省钱不想买cDNA,自己动手克隆某一个cDNA...
: 提细胞的RNA，做RT-PCR，然后再PCR……
g*i
14 楼
自命清高个啥啊
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
Z*5
15 楼
前几天刚用invitrogen的5´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA
Ends, Version 2.0搞定一个13kb的RACE出来。
RNA质量很重要；要是只做反转录的话，invitrogen的SuperScriptTM Ⅲ First-Strand
Synthesis System可能更好；可以考虑在3'UTR位置多设计几条Gene Specific
Primers，效果比Oligo dT应该要好很多；多设计几条nested PCR引物，进行多轮扩增。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
Ends, Version 2.0搞定一个13kb的RACE出来。
RNA质量很重要；要是只做反转录的话，invitrogen的SuperScriptTM Ⅲ First-Strand
Synthesis System可能更好；可以考虑在3'UTR位置多设计几条Gene Specific
Primers，效果比Oligo dT应该要好很多；多设计几条nested PCR引物，进行多轮扩增。
【在 p******i 的大作中提到】
: 大家觉得瓶颈是哪一步？ 是前面的ReverseTranscription吗？
: 谁能说说有什么要点需要注意，或那个好KIT推荐一下……
: 多谢各位了～
f*5
16 楼
这些人以前从香港买也方便
【在 x***q 的大作中提到】
: 大部分是iphone客户端。。。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 x***q 的大作中提到】
: 大部分是iphone客户端。。。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
p*i
17 楼
我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
的管子……
现在还在找其他家有没有卖……
【在 D***a 的大作中提到】
: 一个cdna克隆几十块钱，何必呢？想想用掉的试剂和时间。
的管子……
现在还在找其他家有没有卖……
【在 D***a 的大作中提到】
: 一个cdna克隆几十块钱，何必呢？想想用掉的试剂和时间。
d*u
18 楼
不清高,但也犯不上攀那帮了色呀。见一垃圾桶还要往里钻的，你不会是头一个吧？。
【在 g***i 的大作中提到】
: 自命清高个啥啊
【在 g***i 的大作中提到】
: 自命清高个啥啊
C*e
19 楼
你要的基因有多长？
一个是前面RNA提得要好
做后面的实验的时候如果有可能就加些RNaseIn之类的RNase inhibitor
Ambion,Promega之类的公司都有的
另外就是反转录酶要好
像ls有人说的invitrogen的
还有我用过USB的M-MLV的也不错
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
一个是前面RNA提得要好
做后面的实验的时候如果有可能就加些RNaseIn之类的RNase inhibitor
Ambion,Promega之类的公司都有的
另外就是反转录酶要好
像ls有人说的invitrogen的
还有我用过USB的M-MLV的也不错
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
a*a
20 楼
感觉美国用黑莓的比较多
D*a
21 楼
查查openbiosystems
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
【在 p******i 的大作中提到】
: 我现在在台湾，这里貌似没有addgene的代理……不知道海关如何……因为是邮寄细菌
: 的管子……
: 现在还在找其他家有没有卖……
g*i
22 楼
没，我对这些没兴趣，但我不觉得他们是垃圾，各有各的价值
【在 d********u 的大作中提到】
: 不清高,但也犯不上攀那帮了色呀。见一垃圾桶还要往里钻的，你不会是头一个吧？。
【在 d********u 的大作中提到】
: 不清高,但也犯不上攀那帮了色呀。见一垃圾桶还要往里钻的，你不会是头一个吧？。
C*n
23 楼
美国精蝇们都用ipad==>想当精蝇一定要买ipad
N*3
24 楼
赞优越感～
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
f*a
25 楼
和您一起灌水，我很惭愧
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
【在 d********u 的大作中提到】
: 哇,居然还有人跟着国内的那些"明星"?
: 真的是无底线。。。
i*1
26 楼
同意，这个帖子很能暴露某些果黑的素质。
中国几十年教育的误区就是太注重学业，而忽视了素质教育。
结果就是网上到处是胡乱骂街的重度精神病患者。
希望版主能把这些马甲清理出去，恢复一个干净的环境。。。
【在 f********a 的大作中提到】
: 和您一起灌水，我很惭愧
中国几十年教育的误区就是太注重学业，而忽视了素质教育。
结果就是网上到处是胡乱骂街的重度精神病患者。
希望版主能把这些马甲清理出去，恢复一个干净的环境。。。
【在 f********a 的大作中提到】
: 和您一起灌水，我很惭愧
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