western blot 洗膜tween 浓度到底重要吗？# Biology - 生物学
s*y
1 楼
我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
谢谢
我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
谢谢
s*s
2 楼
tween 20是detergent，用来洗脱unspecific binding
一般都用0.1%
【在 s******y 的大作中提到】
: 我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
: 我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
: 谢谢
一般都用0.1%
【在 s******y 的大作中提到】
: 我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
: 我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
: 谢谢
s*s
3 楼
Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
【在 s******y 的大作中提到】
: 我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
: 我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
: 谢谢
这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
【在 s******y 的大作中提到】
: 我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
: 我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
: 谢谢
s*s
4 楼
我们都是PBS+0.1%Tween 20,我所知道的lab大部分也都是PBS/T
偶尔有lab用TBS/T
或者有些cell signaling的抗体特别强调用TBS/T,如foxo的几个抗体
【在 s******s 的大作中提到】
: Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
: 这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
: btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
偶尔有lab用TBS/T
或者有些cell signaling的抗体特别强调用TBS/T,如foxo的几个抗体
【在 s******s 的大作中提到】
: Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
: 这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
: btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
O*e
5 楼
俺就是用PBST的，竟然成了化石。。。
【在 s******s 的大作中提到】
: Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
: 这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
: btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
【在 s******s 的大作中提到】
: Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
: 这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
: btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
T*t
6 楼
正在配PBST的人飘过。。。
v*a
7 楼
嗯，俺们lab也用PBS。。。
【在 O******e 的大作中提到】
: 俺就是用PBST的，竟然成了化石。。。
【在 O******e 的大作中提到】
: 俺就是用PBST的，竟然成了化石。。。
o*e
8 楼
我也是新手，顺便问一下，blocking solution里“一般”也要有tween吗？
（用“有tween的PBS/TBS”配,而不是用PBS/TBS配？）
Thanks。
~~~~倒是看到不少用0.05%的
【在 s******y 的大作中提到】
: 我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
: 我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
: 谢谢
（用“有tween的PBS/TBS”配,而不是用PBS/TBS配？）
Thanks。
~~~~倒是看到不少用0.05%的
【在 s******y 的大作中提到】
: 我是新手， 前人留下的protocol用的是0.1%, 有人推荐0.5%.
: 我们用pbs+tweeen， 这个浓度区别大吗？ tween到底是什么作用呢？
: 谢谢
s*s
9 楼
也不是完全不可以。前面有人贴过，Tris有点细胞毒性，所以
活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰，所以为了
方便，体外分子生化啥的用TBS。这个WB没什么关系，不过一般
还是用TBS的比较多，再说Tris实在是太便宜
【在 O******e 的大作中提到】
: 俺就是用PBST的，竟然成了化石。。。
活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰，所以为了
方便，体外分子生化啥的用TBS。这个WB没什么关系，不过一般
还是用TBS的比较多，再说Tris实在是太便宜
【在 O******e 的大作中提到】
: 俺就是用PBST的，竟然成了化石。。。
s*s
10 楼
yes
【在 o****e 的大作中提到】
: 我也是新手，顺便问一下，blocking solution里“一般”也要有tween吗？
: （用“有tween的PBS/TBS”配,而不是用PBS/TBS配？）
: Thanks。
:
: ~~~~倒是看到不少用0.05%的
【在 o****e 的大作中提到】
: 我也是新手，顺便问一下，blocking solution里“一般”也要有tween吗？
: （用“有tween的PBS/TBS”配,而不是用PBS/TBS配？）
: Thanks。
:
: ~~~~倒是看到不少用0.05%的
C*e
11 楼
谁说没人用PBS
我phd的实验室
现在破四刀实验室
都是用的PBS/Triton
【在 s******s 的大作中提到】
: Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
: 这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
: btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
我phd的实验室
现在破四刀实验室
都是用的PBS/Triton
【在 s******s 的大作中提到】
: Tween是detergent，多用了背景低，但是可能信号也洗掉了
: 这个完全是更具antibody case by case，一般0.1%。
: btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用的
C*e
12 楼
Tris有点细胞毒性，所以活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰
～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～
话说WB都已经是变性的蛋白了
有没有细胞毒性谁care啊
而且变性蛋白有没有酶活性也无所谓了
phosphate对WB最后一步AP或者HRP的活性没有干扰就结了
phosphate常规chemical，也不是多贵的东西
【在 s******s 的大作中提到】
: 也不是完全不可以。前面有人贴过，Tris有点细胞毒性，所以
: 活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰，所以为了
: 方便，体外分子生化啥的用TBS。这个WB没什么关系，不过一般
: 还是用TBS的比较多，再说Tris实在是太便宜
～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～
话说WB都已经是变性的蛋白了
有没有细胞毒性谁care啊
而且变性蛋白有没有酶活性也无所谓了
phosphate对WB最后一步AP或者HRP的活性没有干扰就结了
phosphate常规chemical，也不是多贵的东西
【在 s******s 的大作中提到】
: 也不是完全不可以。前面有人贴过，Tris有点细胞毒性，所以
: 活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰，所以为了
: 方便，体外分子生化啥的用TBS。这个WB没什么关系，不过一般
: 还是用TBS的比较多，再说Tris实在是太便宜
c*r
13 楼
我好像在哪里看到的版本是PBS中的磷酸盐可能会干扰化学显色，但是如果是做
infrared fluorescence的话，PBS/TBS都行。找了半天找不到出处了，不一定正确。。
。
infrared fluorescence的话，PBS/TBS都行。找了半天找不到出处了，不一定正确。。
。
s*s
14 楼
我说的很清楚了，对WB没关系，不过为了方便常规in vitro的分子多用TBS
【在 C*******e 的大作中提到】
: Tris有点细胞毒性，所以活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰
: ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～
: 话说WB都已经是变性的蛋白了
: 有没有细胞毒性谁care啊
: 而且变性蛋白有没有酶活性也无所谓了
: phosphate对WB最后一步AP或者HRP的活性没有干扰就结了
: phosphate常规chemical，也不是多贵的东西
【在 C*******e 的大作中提到】
: Tris有点细胞毒性，所以活细胞是用PBS的；Phosphate对某些酶活性有干扰
: ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～
: 话说WB都已经是变性的蛋白了
: 有没有细胞毒性谁care啊
: 而且变性蛋白有没有酶活性也无所谓了
: phosphate对WB最后一步AP或者HRP的活性没有干扰就结了
: phosphate常规chemical，也不是多贵的东西
C*e
15 楼
不是要吵架哈
只是你自己前面话说得太满——“btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用
的”
～～～～～～～～～～～～
结果一语既出，大家纷纷表示惭愧，怎么自己一直都用PBS呢
其实如果做个调查
说不定你发现大多数人做WB用的是PBS
而不是像你说的那样
【在 s******s 的大作中提到】
: 我说的很清楚了，对WB没关系，不过为了方便常规in vitro的分子多用TBS
只是你自己前面话说得太满——“btw, 没人用PBS，都是用TBS的，PBS是直接做细胞用
的”
～～～～～～～～～～～～
结果一语既出，大家纷纷表示惭愧，怎么自己一直都用PBS呢
其实如果做个调查
说不定你发现大多数人做WB用的是PBS
而不是像你说的那样
【在 s******s 的大作中提到】
: 我说的很清楚了，对WB没关系，不过为了方便常规in vitro的分子多用TBS
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