flow和western比，应该是有很大优势的吧？ - 未名空间MITBBS历史存档

flow和western比，应该是有很大优势的吧？# Biology - 生物学

R*n2010-12-26 08:12

1 楼

公司给申请 H1-B 签证 Transfer，什么时候可以开始合法的在新公司工作啊？记得有
一种说法是收到 H1-B application 的 receipt，另一种说法是只要申请 file 了就
可以，各位能不能帮忙分享一下，哪一种说法更准确呢？
谢谢！

a*u2010-12-26 08:12

2 楼

【以下文字转载自 Switzerland 讨论区】
发信人: JeanIris (Iris), 信区: Switzerland
标题: 卢塞恩的狮子
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 2 15:53:29 2011, 美东)
前两张是Lowenstrasse尽头Lowenplatz的Lion monument.
马克吐温曾赞颂卢塞恩的石狮是“世界上最哀伤、最感人的石雕”。哈
纪念碑前面是一小方池水, 上边游着几只鸭子. 非常安静美丽的一个小小的地方.
第三张是我住的酒店的狮子.
我月亮星座是狮子, 所以对狮子有种说不出的情有独钟. 希望大家喜欢呀!

s*l2010-12-26 08:12

3 楼

王菲、李亚鹏这对昔日模范夫妻，13日一前一后在微博上宣布离婚，结束8年婚姻。当
晚，王菲独自落寞回京，面对媒体的围堵，她显得一脸憔悴。对于两人突然离婚的原因
，诸多推测甚嚣尘上。有消息称王菲之所以要离婚是因为计划在今年春节后在西藏萨迦
寺出家。而有细心网友指，宋祖德2010年曾爆料指，王菲和李亚鹏因为经济问题，婚姻
出现危机，协议3年后离婚。
上述细心网友指出，早在2010年天涯已经出现「王菲和李亚鹏婚姻出现危机，王菲
李亚鹏协议3 年后离婚！」的爆料帖子。华龙网报道，该帖子是宋祖德工作室的爆料，
称王菲和李亚鹏因为经济问题产生矛盾，协议3年后离婚。消息传出后，有网友感慨，
「有的料需要时间等待啊。」
不过来自微信朋友圈的消息称，西藏的和尚透露，王菲出家的地点是西藏萨迦寺，
而时间就是春节后。此外，王菲还给大女儿窦靖童很早就办理了信托，保证其一生衣食
无忧。二女儿也交给李亚鹏照顾。该网友表示，已经再无后顾之忧的王菲选择出家的可
能性很大。不过随后又删除了该微博。
中新网报道，对于网络上一时盛传的「王菲春节后要到萨迦寺出家」的传言，萨迦
寺喇嘛洛珠嘉措14日回应称，他也是刚刚听说了这一传言，对此事并不知情。
「萨迦寺本寺历史上从未收过女徒弟」，洛珠嘉措现任萨迦寺管委会常务副主任，
相当于该寺主持，他说，萨迦寺本寺之外还有一座尼姑院，只有尼姑院才可接受女弟子。
洛珠嘉措回忆，其在萨迦寺出家几十年，从未看到或者听说王菲到萨迦寺来朝拜过
，也没有听过该寺其他高僧有与其交往联系的经历。「王菲是大明星，网络炒作她出家
地点是萨迦寺，也许是因为萨迦寺的名气也比较大吧」，洛珠嘉措对这一传言看得很淡
。喇嘛班典顿玉是萨迦寺金刚上师，现在日喀则地区佛教协会任职，他也表示，对此事
并不知情。
萨迦派是藏传佛教后弘期形成的古老教派之一，元朝时期为西藏地方纳入中央版图
、实行正式管辖做出突出贡献。藏传佛教着名改革家，一世达赖、班禅的师父宗喀巴也
曾师从该派高僧，萨迦派寺院道场遍布中国很多地方。
「两人感情一年前现裂痕」
中新网报道指，一位接近王菲的知情人士说，其实王菲与李亚鹏本来就是两路人，
完全不搭。两人感情在一年之前就出现裂痕，王菲将家的地下一层改成佛堂，在里面专
心修佛。
王菲在签字离婚当晚，就独自乘坐航班于晚上19时25分从乌鲁木齐飞回北京。中新
网报道，
登机前，有网友偷拍到王菲身穿一袭暗红长裙在机场候机的样子，显得十分落寞。
晚上23时10分，飞机抵达北京机场，开始有乘客走出，但始终不见王菲身影。监控
可见，王菲已换掉离婚登记时的红裙，上身穿黑衣，下身穿宽松黑色裤子，戴着口罩，
背着黑包低头火速走进通往VIP通道的西厅。与此同时，有两辆商务车在vip通道门口静
候，其中一辆开着大灯，十分晃眼。有意思的是，李亚鹏前经纪人马葭正坐在这辆车上
，王菲不发一言闪电上车后，两车随即加足马力开走，仍有不少媒体飙车跟随。据悉，
王菲依然回到两人昔日爱巢休息。
女儿窦靖童：我爱你
王菲宣布离婚后，女儿窦靖童则在网上留言说，「疼痛是真实的，但生活还将继续
。PS：我爱你。」王菲与艺人窦唯1999年离婚，当时窦靖童还小，可能已经受到一次伤
害，如今16岁的窦靖童再度面对妈妈与第二任爸爸离婚，在网做上述留言。

x*a2010-12-26 08:12

4 楼

我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
。我想测刺激
前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
reliable的吧。
我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
定量比较（不
知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
请高手指点。

p*f2010-12-26 08:12

5 楼

收到USCIS的receipt

j*n2010-12-26 08:12

6 楼

说十二星座都人如其名某些同学又要有意见了
不过的确么，狮王就是狮王，人如其名

z*a2010-12-26 08:12

7 楼

seems the other way around

R*n2010-12-26 08:12

8 楼

哦，好的，谢谢！
一般多长时间可以收到这个 receipt 呢？

【在 p****f 的大作中提到】

: 收到USCIS的receipt

x*a2010-12-26 08:12

9 楼

能给详细说说么？

b*l2010-12-26 08:12

10 楼

为啥不 elisa 涅？

【在 x*****a 的大作中提到】

: 我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
: endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
: 。我想测刺激
: 前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
: 这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
: reliable的吧。
: 我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
: 定量比较（不
: 知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
: 请高手指点。

w*n2010-12-26 08:12

11 楼

2%哪个方法都不太好.

【在 x*****a 的大作中提到】

: 我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
: endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
: 。我想测刺激
: 前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
: 这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
: reliable的吧。
: 我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
: 定量比较（不
: 知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
: 请高手指点。

p*l2010-12-26 08:12

12 楼

eNOS? 这个细胞内表达的，用flow要intracellular staining,但不是不可以操作，即
便10万细胞也足够了。如果只增加2%，你control要做好，否则很难判断的。
westernblot应该更灵敏一些
另外你可以用confocal，组化染eNOS和细胞核，应该也可以捕捉到阳性信号。
其实你可以qPCR的。

【在 x*****a 的大作中提到】

: 我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
: endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
: 。我想测刺激
: 前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
: 这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
: reliable的吧。
: 我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
: 定量比较（不
: 知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
: 请高手指点。

x*a2010-12-26 08:12

13 楼

confocal那个只能确定是否表达的吧，但是没法量化的比较是否增加。
intracellular staining我以前试过另一个protein，也还能做到。
western是比较band的gray scale的强度？我不太懂western的。
谢谢了啊

【在 p****l 的大作中提到】

: eNOS? 这个细胞内表达的，用flow要intracellular staining,但不是不可以操作，即
: 便10万细胞也足够了。如果只增加2%，你control要做好，否则很难判断的。
: westernblot应该更灵敏一些
: 另外你可以用confocal，组化染eNOS和细胞核，应该也可以捕捉到阳性信号。
: 其实你可以qPCR的。

Z*g2010-12-26 08:12

14 楼

qPCR不是挺合适的吗?2%对于western有点够呛吧.Flow的话,要是你能够再使用一种
marker以区分muscle和endothelial cells,也不错.另外,flow不仅可以知道蛋白的总体
增加量,而且还可以知道有多少细胞增加了该蛋白.

【在 x*****a 的大作中提到】

: 我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
: endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
: 。我想测刺激
: 前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
: 这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
: reliable的吧。
: 我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
: 定量比较（不
: 知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
: 请高手指点。

x*a2010-12-26 08:12

15 楼

最好的情况是直接测nitric oxide的产生量，我用ELISA试过，不行，太低了，虽然有
读数，但是我
觉得不reliable。
退而求其次就是看eNOS的表达。qPCR是看基因的增加的吧，基因的增加不代表蛋白也会
增加，这个没错
吧？所以我偏好直接测蛋白的含量。
我可以用CD31把endothelial cells隔离出来，这个不难；然后在这个sub-population
里再比较
看eNOS的表达是否有变化。我是担心muscle cell在western blot中会带来noise，掩盖
了eNOS
的信号。
“还可以知道有多少细胞增加了该蛋白”，这个，能说说怎么做么？谢谢啊

【在 Z**********g 的大作中提到】

: qPCR不是挺合适的吗?2%对于western有点够呛吧.Flow的话,要是你能够再使用一种
: marker以区分muscle和endothelial cells,也不错.另外,flow不仅可以知道蛋白的总体
: 增加量,而且还可以知道有多少细胞增加了该蛋白.

Z*g2010-12-26 08:12

16 楼

Flow的基本功能不就是细胞计数吗?比如你把10万个细胞上机,根据机器检测的每个细胞
荧光信号,就可以得到阳性(eNOS增加)和阴性(eNOS不变)细胞的数量或百分比了.当
然如果你的endothelial细胞很均一,可能所有细胞的eNOS都增加了.至于eNOS总体含量
的变化,估计就是比较处理前后两组细胞的总体荧光平均值吧.

population

【在 x*****a 的大作中提到】

: 最好的情况是直接测nitric oxide的产生量，我用ELISA试过，不行，太低了，虽然有
: 读数，但是我
: 觉得不reliable。
: 退而求其次就是看eNOS的表达。qPCR是看基因的增加的吧，基因的增加不代表蛋白也会
: 增加，这个没错
: 吧？所以我偏好直接测蛋白的含量。
: 我可以用CD31把endothelial cells隔离出来，这个不难；然后在这个sub-population
: 里再比较
: 看eNOS的表达是否有变化。我是担心muscle cell在western blot中会带来noise，掩盖
: 了eNOS

p*l2010-12-26 08:12

17 楼

测NO用Invitrogen的kit
测蛋白采用ELISA呢
qPCR可以作为fig用的，如果你想看处理前后这个gene表达的变化，或者不同细胞之间
比较
你既然可以CD31去定义内皮细胞，那么就sort出来，再western blot就不会有muscle
cell干扰了

population

【在 x*****a 的大作中提到】

: 最好的情况是直接测nitric oxide的产生量，我用ELISA试过，不行，太低了，虽然有
: 读数，但是我
: 觉得不reliable。
: 退而求其次就是看eNOS的表达。qPCR是看基因的增加的吧，基因的增加不代表蛋白也会
: 增加，这个没错
: 吧？所以我偏好直接测蛋白的含量。
: 我可以用CD31把endothelial cells隔离出来，这个不难；然后在这个sub-population
: 里再比较
: 看eNOS的表达是否有变化。我是担心muscle cell在western blot中会带来noise，掩盖
: 了eNOS

p*l2010-12-26 08:12

18 楼

细胞内染色，2%，而且他不太确定阳性信号有多强，不一定可以得到很可靠的结果的
处理过程中会有损失的，最后上机的不足10万，这个数量不是问题
200个细胞flow也足够

【在 Z**********g 的大作中提到】

: Flow的基本功能不就是细胞计数吗?比如你把10万个细胞上机,根据机器检测的每个细胞
: 荧光信号,就可以得到阳性(eNOS增加)和阴性(eNOS不变)细胞的数量或百分比了.当
: 然如果你的endothelial细胞很均一,可能所有细胞的eNOS都增加了.至于eNOS总体含量
: 的变化,估计就是比较处理前后两组细胞的总体荧光平均值吧.
:
: population

w*l2010-12-26 08:12

19 楼

2%啥也看不出来啊，上样都有10%的误差

【在 x*****a 的大作中提到】

: 我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
: endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
: 。我想测刺激
: 前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
: 这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
: reliable的吧。
: 我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
: 定量比较（不
: 知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
: 请高手指点。

w*l2010-12-26 08:12

20 楼

不管那种方法，都要有好的antibody
western最好做，可以先试一下,一目了然，先优化一下antibody的dilution
western检测不出来，试试regular fluorescent microscopy看一下，确认一下
antibody
work,work了做flow比confocal容易
ELISA或者MSD如果有卖的kit可以直接买来试，
要没有需要自己coat plate的话，那就最后试吧，因为需要一对好的antibody,
优化起来最麻烦

population

【在 x*****a 的大作中提到】

: 最好的情况是直接测nitric oxide的产生量，我用ELISA试过，不行，太低了，虽然有
: 读数，但是我
: 觉得不reliable。
: 退而求其次就是看eNOS的表达。qPCR是看基因的增加的吧，基因的增加不代表蛋白也会
: 增加，这个没错
: 吧？所以我偏好直接测蛋白的含量。
: 我可以用CD31把endothelial cells隔离出来，这个不难；然后在这个sub-population
: 里再比较
: 看eNOS的表达是否有变化。我是担心muscle cell在western blot中会带来noise，掩盖
: 了eNOS

t*d2010-12-26 08:12

21 楼

如果增加只是2%，还是不要费事了。早放手早解脱。

【在 x*****a 的大作中提到】

: 我想测一个muscle/endothelial cell的体系中nitric oxide synthase的表达（只有
: endothelial表达）。细胞数量很少，大约10万，所以synthase的表达估计信号也很弱
: 。我想测刺激
: 前和刺激后的synthase的表达是否有变化，我估计就算有也非常小。
: 这种情况下，是不是用flow会更好一点？比如如果增加只是2%，flow的结果会比较
: reliable的吧。
: 我不是很熟western。但是我觉得western对于蛋白表达量要比较高才能看到，而且不能
: 定量比较（不
: 知道对不对？），尤其是量差很小的时候，容易被noise掩盖。
: 请高手指点。

x*a2010-12-26 08:12

22 楼

用western blot，测的是全部population的蛋白含量。但是如果每个细胞的蛋白含量不
一致，特别是刺激前后的变化不一致（这非常可能的吧），那我用flow测每个细胞的变
化，然后做统计处理，这样更能接近真实情况的吧。
sort的话，会损失很多细胞的吧。
而且我主要是觉得muscle cells会产生干扰，也许很低，也许很高；如果用flow，可以
很容易看出是否有干扰，以及干扰到什么程度。
不知道我的思路，对么？

w*l2010-12-26 08:12

23 楼

你要是有能做flow的antibody就做flow呗
做western,load equal volume,不要load equal amount of protein.
有好antibody的情况下，当然prefer flow,不过flow比western更挑antibodys
sort完全没必要，直接gateCD 31+ popluation就行了

【在 x*****a 的大作中提到】

: 用western blot，测的是全部population的蛋白含量。但是如果每个细胞的蛋白含量不
: 一致，特别是刺激前后的变化不一致（这非常可能的吧），那我用flow测每个细胞的变
: 化，然后做统计处理，这样更能接近真实情况的吧。
: sort的话，会损失很多细胞的吧。
: 而且我主要是觉得muscle cells会产生干扰，也许很低，也许很高；如果用flow，可以
: 很容易看出是否有干扰，以及干扰到什么程度。
: 不知道我的思路，对么？

D*a2010-12-26 08:12

24 楼

你咋知道是2%的？就算是2%，就能解释你的现象么？

c*r2010-12-26 08:12

25 楼

真的是2%？？？
还是算了吧，绝大多数生物实验的误差都远大于2%

m*12010-12-26 08:12

26 楼

顺便问一下:
测定一个细胞内蛋白的磷酸化, flow和western哪个更加准确?
一般两者定量结果一致性如何?
我看临床诊断好像偏爱flow? 为什么? 容易定量?
flow和western的precision(%CV)一般由多大? 10%?
谢谢

c*r2010-12-26 08:12

27 楼

western定性还可以，定量很扯的。

【在 m*******1 的大作中提到】

: 顺便问一下:
: 测定一个细胞内蛋白的磷酸化, flow和western哪个更加准确?
: 一般两者定量结果一致性如何?
: 我看临床诊断好像偏爱flow? 为什么? 容易定量?
: flow和western的precision(%CV)一般由多大? 10%?
: 谢谢

w*l2010-12-26 08:12

28 楼

western is only semi-quantitative, you have to have standard to be
quantitative.
For flow, you could use beads.

【在 m*******1 的大作中提到】

: 顺便问一下:
: 测定一个细胞内蛋白的磷酸化, flow和western哪个更加准确?
: 一般两者定量结果一致性如何?
: 我看临床诊断好像偏爱flow? 为什么? 容易定量?
: flow和western的precision(%CV)一般由多大? 10%?
: 谢谢

y*82010-12-26 08:12

29 楼

the cost of FACS could be 10 times higher than WB or IHC.

x*a2010-12-26 08:12

30 楼

2%只是我的预测，我也不知道多少，但是我预估不会很大。
如果我用flow，正如前边一个朋友说的，一个sample里面成千上万的细胞，这么大的
sample space，即便是很小的difference也能显现出来；用western，要是就n=3，那就
瞎了，n=1万，也不现实啊。