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有没有做Northern blot 出现很多信号在18S 28S上的
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有没有做Northern blot 出现很多信号在18S 28S上的# Biology - 生物学
c*r
1
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rebrov (Robbie) 于 (Thu Nov 10 12:37:36 2011, 美东) 提到:
RT
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keaiduoduo (每天可爱多一些) 于 (Thu Nov 10 12:49:38 2011, 美东) 提到:
之前

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aasmile (红颜弹指老,刹那芳华) 于 (Thu Nov 10 12:58:53 2011, 美东) 提到:
475体检是专门的吗?我的意思是如果我近期内做过普通体检,算吗?
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keaiduoduo (每天可爱多一些) 于 (Thu Nov 10 13:10:44 2011, 美东) 提到:
485有专门的医生,可以去uscis网上找list。体检报告是专门的Form,叫693,需要是sealed。
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rebrov (Robbie) 于 (Thu Nov 10 13:15:35 2011, 美东) 提到:
我是主申请人 LD在外州 , LD12月底才能回来
请问LD应该在当地体检还是必须回来和我在同一个医生那体检。。
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keaiduoduo (每天可爱多一些) 于 (Thu Nov 10 13:17:26 2011, 美东) 提到:
不用同一个医生,只要都是认可的医生就行。
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rebrov (Robbie) 于 (Thu Nov 10 13:26:14 2011, 美东) 提到:
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费用是什么情况 是最好找个自己保险cover的? 还是压根就没有或minimum体检费用?
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keaiduoduo (每天可爱多一些) 于 (Thu Nov 10 13:35:34 2011, 美东) 提到:
我知道的保险都不cover体检费用,但很多可以cover打针的费用。需要去自己的家庭医生那里打了针,再把记录给绿卡体检医生。我们的费用是公司报销的。
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dealtoday (dealtoday) 于 (Fri Nov 11 23:38:47 2011, 美东) 提到:
医生那里打了针,再把记录给绿卡体检医生。我们的费用是公司报销的。
请问需要等到体检结果出来才能递交485么?如果是的,体检结果一般要多久出来?
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keaiduoduo (每天可爱多一些) 于 (Fri Nov 11 23:48:40 2011, 美东) 提到:
最好等体检结果拿到再递485,不然之后会被RFE。我的体检报告3天之后拿到的,我用
的那个医生是公认的速度快收费低。如果你在湾区,可以介绍给你。
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dealtoday (dealtoday) 于 (Sat Nov 12 00:11:35 2011, 美东) 提到:
那太好了,我在湾区,能推荐我你的医生么?
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z*n
2
你做豆腐脑用的啥凝固剂
岳母要做豆腐脑,说在超市没看到有卖的,多谢咧
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e*p
3
做Northern blot, 看到清楚的目的条带,
但18S 28S位置上的有很强信号,查了PROBE并无太大同源性,PROBE 1400BP大小,用的
20ugTOTAL RNA
重复做了还是这样,有没有遇到这样的情况。有什么好办法?
多谢各位大虾 。。
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f*g
4
内酯。

【在 z*********n 的大作中提到】
: 你做豆腐脑用的啥凝固剂
: 岳母要做豆腐脑,说在超市没看到有卖的,多谢咧

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h*u
5
可能是探针没纯化好。
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l*g
6
中国店有买的,你好好找找。

【在 z*********n 的大作中提到】
: 你做豆腐脑用的啥凝固剂
: 岳母要做豆腐脑,说在超市没看到有卖的,多谢咧

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e*p
7
那一般用什么纯化探针的
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z*n
8
是吗,回头仔细找找

【在 l********g 的大作中提到】
: 中国店有买的,你好好找找。
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h*u
9
一种柱子,从公司买的。如果你的基因有homologue, 或者多个isoform. 也有可能出现
这种情况。
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l*h
10
english name pls! thanks!

【在 f******g 的大作中提到】
: 内酯。
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n*e
11
可以用kit把大部分rRNA去除。看看能不能增强信号。
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g*e
12
南加的中国店只有熟石膏粉。但是内酯豆腐口感更好。
鱼缸、小番茄都是用内酯,全称“葡萄糖酸内酯”Glucono delta-lactone.国内容易买
到。这边在网上能找到,问问鱼缸。

【在 z*********n 的大作中提到】
: 是吗,回头仔细找找
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e*p
13
谢谢 我看看mRNA enrichment
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z*n
14
哦,熟石膏粉在大约哪个section卖?

【在 g***e 的大作中提到】
: 南加的中国店只有熟石膏粉。但是内酯豆腐口感更好。
: 鱼缸、小番茄都是用内酯,全称“葡萄糖酸内酯”Glucono delta-lactone.国内容易买
: 到。这边在网上能找到,问问鱼缸。

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c*y
15
我也出现过这种情况
别人这么给我解释的,
如果你是用PCR产物做的探针,PCR的模板来自基因组的话,可能就会把一些28s 18s 基
因片段非特异扩增下来,然后被标记,而28 18RNA的量很大,所有会有信号
解决办法:
1, 使用来自质粒酶切的片段标探针
2,PCR纯化探针后,稀释1000做模板,换另一对内部引物继续PCR,纯化
3,合成oligo片段
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g*e
16
不记得。估计在酵母,或是淀粉一带。

【在 z*********n 的大作中提到】
: 哦,熟石膏粉在大约哪个section卖?
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w*z
17
也碰到过这个问题。
用质粒做模板标记探针,针对同一基因做了2条探针,其中一条探针blot后只有特异条
带,但另一条除了特异条带外,18 28S也都有。总RNA和mRNA都试过,结果相似。
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d*u
19
这个如果是直接用PCR产物标记作探针挺常见。我们是把扩增片段克隆到pGEM-T里面,
用酶切产物作探针,基本解决问题。
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e*p
21
DADIAYOU 我问一下质粒酶切后还做用P32 DCTP做PCR 吧
cheerfly 割胶回收后PCR产物做探针,PCR的模板是CDNA,用OLIGODT 反转录的话,为
什么还会28 18S 污染呢?
WWWWLZ质粒做模板还是会有这种现象,你的建议是什么呢?还是探针位点问题?
非常感谢!
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g*o
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个懒人!你就买这个吧,sima00买过的,另外两个没人有实际经验
http://www.importhome.com/Coagulant2.html
要不我周末的时候带给你点

【在 z*********n 的大作中提到】
: 你给总结下阿
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d*u
23
质粒酶切后a-P32 CTP+Klenow标记
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c*y
24
模板是cDNA,
1,cDNA合成之前是否用Dnase I 消化
2,RNA降解途径或者RNA processing过程中会出现polyA加尾现象,我了解的至少植物
叶绿体的RNA的存在这种现象,刚google下,似乎哺乳动物也存在这种异常的加尾,用
oligodT反转录有可能会产生rRNA的cDNA
3 质粒做模板
miniprep的时候是否有痕量的大肠杆菌的基因组污染?
建议放弃PCR做模板,
酶切质粒,或者合成oligo探针
1,2,3的解释也仅仅是个人猜测了

【在 e****p 的大作中提到】
: DADIAYOU 我问一下质粒酶切后还做用P32 DCTP做PCR 吧
: cheerfly 割胶回收后PCR产物做探针,PCR的模板是CDNA,用OLIGODT 反转录的话,为
: 什么还会28 18S 污染呢?
: WWWWLZ质粒做模板还是会有这种现象,你的建议是什么呢?还是探针位点问题?
: 非常感谢!

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e*p
25
我去查查PROTOCOL, 非常感谢大家
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