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请教在IPTG induction了以后怎么检测蛋白最好？
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请教在IPTG induction了以后怎么检测蛋白最好？# Biology - 生物学
t*o
1 楼
在这个公司实习有一段了，钱给的很少也就认了。自从听说我要找工作后，给我派了一
个project，要求总在变，还说我做的慢。现在说要做成产品级的，director说要24小
时投入那种，两个月可能完成。faint，我要都投入这个，别的公司根本没法找了，关
键它还不明确说招不招人。我要正规应聘也就做个题面试一下完了，现在整这么难个任
务。
别人实习都是为了让找工作方便，我找了个实习，找工作反而更难了，什么事儿啊
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c*g
2 楼
在单位一个组做了大半年，老板很tough，对我的工作总是指指点点，每次我都虚心改
正可还是经常被他叫去。于是换了个组，做了两个月了，感觉还行，老板人也不错。刚
刚还在庆幸掏出了魔掌，昨天被通知前老板要和我做annual review. 我的天啊。。。
如果他给我个差评我会不会丢工作啊！如果给我个差评我不服，应该怎么做？
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v*a
3 楼
是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
煮沸3分钟即可上样跑胶？
谢谢！
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l*e
4 楼
director才不会管你能不能找到工作呢。就如同你也不会管director的project到底能
不能做成产品。所以你做好自己的事就行了，让director烦自己的去吧。

【在 t******o 的大作中提到】
: 在这个公司实习有一段了，钱给的很少也就认了。自从听说我要找工作后，给我派了一
: 个project，要求总在变，还说我做的慢。现在说要做成产品级的，director说要24小
: 时投入那种，两个月可能完成。faint，我要都投入这个，别的公司根本没法找了，关
: 键它还不明确说招不招人。我要正规应聘也就做个题面试一下完了，现在整这么难个任
: 务。
: 别人实习都是为了让找工作方便，我找了个实习，找工作反而更难了，什么事儿啊
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t*n
5 楼
你不是已经换组了吗？前老板只是例行公事。没什么担心的，干好现在的就行。

【在 c********g 的大作中提到】
: 在单位一个组做了大半年，老板很tough，对我的工作总是指指点点，每次我都虚心改
: 正可还是经常被他叫去。于是换了个组，做了两个月了，感觉还行，老板人也不错。刚
: 刚还在庆幸掏出了魔掌，昨天被通知前老板要和我做annual review. 我的天啊。。。
: 如果他给我个差评我会不会丢工作啊！如果给我个差评我不服，应该怎么做？
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m*z
6 楼
yes. i usually boil for 10min

【在 v***a 的大作中提到】
: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！
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t*o
7 楼
还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
到”

【在 l********e 的大作中提到】
: director才不会管你能不能找到工作呢。就如同你也不会管director的project到底能
: 不能做成产品。所以你做好自己的事就行了，让director烦自己的去吧。
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M*s
8 楼
你要大大感谢他的批评和帮助，听听他咋说？你大量点
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g*r
9 楼
可以，但是这只对表达量不很低的蛋白有效

【在 v***a 的大作中提到】
: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！
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a*k
10 楼
你干吗告诉他们你要找工作呢

【在 t******o 的大作中提到】
: 还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
: 到”
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c*g
11 楼
是不是他怎么抹黑我都听着，底线是只要做后评定不是fail我 就行啊？？？
他的评定对我现在的工作有什么影响啊？

【在 M********s 的大作中提到】
: 你要大大感谢他的批评和帮助，听听他咋说？你大量点
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v*a
12 楼
谢谢。SDS Sample Buffer你是用4X的吗？

【在 m**z 的大作中提到】
: yes. i usually boil for 10min
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t*o
13 楼
本来想试试能不能留下来啊

【在 a*****k 的大作中提到】
: 你干吗告诉他们你要找工作呢
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t*n
14 楼
他不是你的直接老板，说的话只有参考作用。再说他也没必要为难你。除非你实在是太
差了。那只能准备简历了。

【在 c********g 的大作中提到】
: 是不是他怎么抹黑我都听着，底线是只要做后评定不是fail我 就行啊？？？
: 他的评定对我现在的工作有什么影响啊？
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v*a
15 楼
我还不知道这个蛋白表达量多不多，所以先试试。如果低的话，怎么做比较好？
多谢！

【在 g*********r 的大作中提到】
: 可以，但是这只对表达量不很低的蛋白有效
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l*e
16 楼
碰到这么嫩的一个director已经不错了。

【在 t******o 的大作中提到】
: 还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
: 到”
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c*y
17 楼
我用2x的

【在 v***a 的大作中提到】
: 谢谢。SDS Sample Buffer你是用4X的吗？
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s*u
18 楼
看看能不呢个留在现在的公司呢？比如不同的组。你在公司内部很有优势。直接打电话
跟可能招人的人聊聊，反正也不怕。
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e*s
19 楼
起码不建议这么做。

【在 v***a 的大作中提到】
: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！
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b*y
20 楼
这个director真够闲得

【在 t******o 的大作中提到】
: 还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
: 到”
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W*a
21 楼
western against the tag

【在 v***a 的大作中提到】
: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！
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v*a
22 楼
多谢提醒。开始只想到了用Coomassie gel。

【在 W*******a 的大作中提到】
: western against the tag
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c*r
23 楼
一定要跑一个没有IPTG诱导的对照
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s*n
24 楼
我建议你还可以保留一部分样品，做supernatant和precipitation的比较，可以看出是
否是soluble expression。
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W*a
25 楼
few recombinant proteins can be induced to the level that you can
see a difference between control and IPTG with protein stain

【在 v***a 的大作中提到】
: 多谢提醒。开始只想到了用Coomassie gel。
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z*o
26 楼
量大的话这个足够了，记得样品煮完了vortex一下，要不上不了样的

【在 v***a 的大作中提到】
: 多谢提醒。开始只想到了用Coomassie gel。
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n*w
27 楼
我都不离心，直接20ul菌夜+20ul 2x sample buffer,煮沸5分钟，side by side跑胶。
然后GelCode染。
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