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请教在IPTG induction了以后怎么检测蛋白最好？

请教在IPTG induction了以后怎么检测蛋白最好？# Biology - 生物学

t*o2011-04-12 07:04

1 楼

在这个公司实习有一段了，钱给的很少也就认了。自从听说我要找工作后，给我派了一
个project，要求总在变，还说我做的慢。现在说要做成产品级的，director说要24小
时投入那种，两个月可能完成。faint，我要都投入这个，别的公司根本没法找了，关
键它还不明确说招不招人。我要正规应聘也就做个题面试一下完了，现在整这么难个任
务。
别人实习都是为了让找工作方便，我找了个实习，找工作反而更难了，什么事儿啊

c*g2011-04-12 07:04

2 楼

在单位一个组做了大半年，老板很tough，对我的工作总是指指点点，每次我都虚心改
正可还是经常被他叫去。于是换了个组，做了两个月了，感觉还行，老板人也不错。刚
刚还在庆幸掏出了魔掌，昨天被通知前老板要和我做annual review. 我的天啊。。。
如果他给我个差评我会不会丢工作啊！如果给我个差评我不服，应该怎么做？

v*a2011-04-12 07:04

3 楼

是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
煮沸3分钟即可上样跑胶？
谢谢！

l*e2011-04-12 07:04

4 楼

director才不会管你能不能找到工作呢。就如同你也不会管director的project到底能
不能做成产品。所以你做好自己的事就行了，让director烦自己的去吧。

【在 t******o 的大作中提到】

: 在这个公司实习有一段了，钱给的很少也就认了。自从听说我要找工作后，给我派了一
: 个project，要求总在变，还说我做的慢。现在说要做成产品级的，director说要24小
: 时投入那种，两个月可能完成。faint，我要都投入这个，别的公司根本没法找了，关
: 键它还不明确说招不招人。我要正规应聘也就做个题面试一下完了，现在整这么难个任
: 务。
: 别人实习都是为了让找工作方便，我找了个实习，找工作反而更难了，什么事儿啊

t*n2011-04-12 07:04

5 楼

你不是已经换组了吗？前老板只是例行公事。没什么担心的，干好现在的就行。

【在 c********g 的大作中提到】

: 在单位一个组做了大半年，老板很tough，对我的工作总是指指点点，每次我都虚心改
: 正可还是经常被他叫去。于是换了个组，做了两个月了，感觉还行，老板人也不错。刚
: 刚还在庆幸掏出了魔掌，昨天被通知前老板要和我做annual review. 我的天啊。。。
: 如果他给我个差评我会不会丢工作啊！如果给我个差评我不服，应该怎么做？

m*z2011-04-12 07:04

6 楼

yes. i usually boil for 10min

【在 v***a 的大作中提到】

: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！

t*o2011-04-12 07:04

7 楼

还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
到”

【在 l********e 的大作中提到】

: director才不会管你能不能找到工作呢。就如同你也不会管director的project到底能
: 不能做成产品。所以你做好自己的事就行了，让director烦自己的去吧。

M*s2011-04-12 07:04

8 楼

你要大大感谢他的批评和帮助，听听他咋说？你大量点

g*r2011-04-12 07:04

9 楼

可以，但是这只对表达量不很低的蛋白有效

【在 v***a 的大作中提到】

: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！

a*k2011-04-12 07:04

10 楼

你干吗告诉他们你要找工作呢

【在 t******o 的大作中提到】

: 还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
: 到”

c*g2011-04-12 07:04

11 楼

是不是他怎么抹黑我都听着，底线是只要做后评定不是fail我就行啊？？？
他的评定对我现在的工作有什么影响啊？

【在 M********s 的大作中提到】

: 你要大大感谢他的批评和帮助，听听他咋说？你大量点

v*a2011-04-12 07:04

12 楼

谢谢。SDS Sample Buffer你是用4X的吗？

【在 m**z 的大作中提到】

: yes. i usually boil for 10min

t*o2011-04-12 07:04

13 楼

本来想试试能不能留下来啊

【在 a*****k 的大作中提到】

: 你干吗告诉他们你要找工作呢

t*n2011-04-12 07:04

14 楼

他不是你的直接老板，说的话只有参考作用。再说他也没必要为难你。除非你实在是太
差了。那只能准备简历了。

【在 c********g 的大作中提到】

: 是不是他怎么抹黑我都听着，底线是只要做后评定不是fail我就行啊？？？
: 他的评定对我现在的工作有什么影响啊？

v*a2011-04-12 07:04

15 楼

我还不知道这个蛋白表达量多不多，所以先试试。如果低的话，怎么做比较好？
多谢！

【在 g*********r 的大作中提到】

: 可以，但是这只对表达量不很低的蛋白有效

l*e2011-04-12 07:04

16 楼

碰到这么嫩的一个director已经不错了。

【在 t******o 的大作中提到】

: 还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
: 到”

c*y2011-04-12 07:04

17 楼

我用2x的

【在 v***a 的大作中提到】

: 谢谢。SDS Sample Buffer你是用4X的吗？

s*u2011-04-12 07:04

18 楼

看看能不呢个留在现在的公司呢？比如不同的组。你在公司内部很有优势。直接打电话
跟可能招人的人聊聊，反正也不怕。

e*s2011-04-12 07:04

19 楼

起码不建议这么做。

【在 v***a 的大作中提到】

: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！

b*y2011-04-12 07:04

20 楼

这个director真够闲得

【在 t******o 的大作中提到】

: 还天天打击我，“这个其实很简单，但让你做，你要做三个月”“你现在找别的也找不
: 到”

W*a2011-04-12 07:04

21 楼

western against the tag

【在 v***a 的大作中提到】

: 是不是可以直接把有bacteria的LB进行离心，然后往pellet里加SDS Sample Buffer后
: 煮沸3分钟即可上样跑胶？
: 谢谢！

v*a2011-04-12 07:04

22 楼

多谢提醒。开始只想到了用Coomassie gel。

【在 W*******a 的大作中提到】

: western against the tag

c*r2011-04-12 07:04

23 楼

一定要跑一个没有IPTG诱导的对照

s*n2011-04-12 07:04

24 楼

我建议你还可以保留一部分样品，做supernatant和precipitation的比较，可以看出是
否是soluble expression。

W*a2011-04-12 07:04

25 楼

few recombinant proteins can be induced to the level that you can
see a difference between control and IPTG with protein stain

【在 v***a 的大作中提到】

: 多谢提醒。开始只想到了用Coomassie gel。

z*o2011-04-12 07:04

26 楼

量大的话这个足够了，记得样品煮完了vortex一下，要不上不了样的

【在 v***a 的大作中提到】

: 多谢提醒。开始只想到了用Coomassie gel。

n*w2011-04-12 07:04

27 楼

我都不离心，直接20ul菌夜+20ul 2x sample buffer,煮沸5分钟，side by side跑胶。
然后GelCode染。