Y*u
2 楼
燕国公张问神会和尚: 你平日讲无念法, 并勤勉人们修习这种方法, 可我还是不知道无
念法是有还是无.
会答: 既不能说是有, 也不能说是无.
张问: 为什么呢?
会答: 有无是世俗的概念, 所以都不是.
张问: 那应该把它叫做什么呢?
会答: 不叫做什么.
张问: 要是这样, 那可怎么办呢?
会答: 也不怎么办, 无念是不可说的. 现在只所以说它, 是因为要回答问题的缘故.如
果不是回答问题, 就根本不用说. 好比明亮的镜子,如果不对着某个东西, 镜子里就不
会映出某个物像, 现在说镜子里有物像, 就是因为它对着某个东西.
张说: 如果镜子不对着某个物体, 那它是否还照射呢?
会答: 现在所说的照射, 不管镜子是否对着什么, 都是存在的.
张问: 既没有形象, 又不能言说, 一切有无也不能成立, 这个照射又是怎样的照射呢?
会答: 现在所说的照射, 是因为镜子明亮, 所以才有了照射的性质. 众生的心本来清静
, 有自然的智慧之光, 所以可以照射广大的世界.
张问: 既然如此, 应该如何做呢?
会答: 只要看见无.
张问: 既然是无, 那能看见什么呢?
会答: 虽然能看见, 但是那个被看见的东西不叫做什么. (虽见, 不唤做是物)
张问: 既然不叫做什么, 那怎么能说是看见呢?
会答: 看见没有事物, 那就是真实的见, 永恒的见. (见无物, 既是真见)
念法是有还是无.
会答: 既不能说是有, 也不能说是无.
张问: 为什么呢?
会答: 有无是世俗的概念, 所以都不是.
张问: 那应该把它叫做什么呢?
会答: 不叫做什么.
张问: 要是这样, 那可怎么办呢?
会答: 也不怎么办, 无念是不可说的. 现在只所以说它, 是因为要回答问题的缘故.如
果不是回答问题, 就根本不用说. 好比明亮的镜子,如果不对着某个东西, 镜子里就不
会映出某个物像, 现在说镜子里有物像, 就是因为它对着某个东西.
张说: 如果镜子不对着某个物体, 那它是否还照射呢?
会答: 现在所说的照射, 不管镜子是否对着什么, 都是存在的.
张问: 既没有形象, 又不能言说, 一切有无也不能成立, 这个照射又是怎样的照射呢?
会答: 现在所说的照射, 是因为镜子明亮, 所以才有了照射的性质. 众生的心本来清静
, 有自然的智慧之光, 所以可以照射广大的世界.
张问: 既然如此, 应该如何做呢?
会答: 只要看见无.
张问: 既然是无, 那能看见什么呢?
会答: 虽然能看见, 但是那个被看见的东西不叫做什么. (虽见, 不唤做是物)
张问: 既然不叫做什么, 那怎么能说是看见呢?
会答: 看见没有事物, 那就是真实的见, 永恒的见. (见无物, 既是真见)
m*2
3 楼
我用humerus section做in situ hybridization的时候,用 RNA hybridization
incubation 过夜70度,发现tissue结构收缩,如附件所示,图示是我已经完成整个in
situ的结果,事实上我在incubation以后就已经发现tissue结构收缩了.
我问了一些人说需要在fixation的时候做decalcification,我做了decalcification,结
果in situ 的时候tissue还是会收缩,事实上看起来更严重.
我不知道这究竟问题出在什么地方,看起来像是tissue attach不牢固,导致容易变形.请
问有什么方法可以使tissue attach牢固么?
我是根据下面的步骤做的:
1. cut the arms and legs
2. 4% PFA (pH 7.1-7.4) overnight at 4C.
3. PBS three times for 5 minutes
4. 14% EDTA for decal 3 days.
5. wash with PBS
6. store in 70% ETOH
Then dehydration with increased ethanol,embedding, section and dry overnight
at 42C
或者我可以降低 in situ incubation 温度么?
请有经验的同学能提供些帮助或者protocol么?
谢谢!
incubation 过夜70度,发现tissue结构收缩,如附件所示,图示是我已经完成整个in
situ的结果,事实上我在incubation以后就已经发现tissue结构收缩了.
我问了一些人说需要在fixation的时候做decalcification,我做了decalcification,结
果in situ 的时候tissue还是会收缩,事实上看起来更严重.
我不知道这究竟问题出在什么地方,看起来像是tissue attach不牢固,导致容易变形.请
问有什么方法可以使tissue attach牢固么?
我是根据下面的步骤做的:
1. cut the arms and legs
2. 4% PFA (pH 7.1-7.4) overnight at 4C.
3. PBS three times for 5 minutes
4. 14% EDTA for decal 3 days.
5. wash with PBS
6. store in 70% ETOH
Then dehydration with increased ethanol,embedding, section and dry overnight
at 42C
或者我可以降低 in situ incubation 温度么?
请有经验的同学能提供些帮助或者protocol么?
谢谢!
G*e
4 楼
可以把显示器放在他背后，在他前面放面镜子就行了。
不过这个年纪对这些是应该都应付自如了，你就不用跟着操心了。
不过这个年纪对这些是应该都应付自如了，你就不用跟着操心了。
s*h
5 楼
见见之时，见非是见。见犹离见，见不能及。
l*s
6 楼
try to dissect cartilage alone, also try 55 degrees (for both in situ and
wash)
【在 m**********2 的大作中提到】
: 我用humerus section做in situ hybridization的时候,用 RNA hybridization
: incubation 过夜70度,发现tissue结构收缩,如附件所示,图示是我已经完成整个in
: situ的结果,事实上我在incubation以后就已经发现tissue结构收缩了.
: 我问了一些人说需要在fixation的时候做decalcification,我做了decalcification,结
: 果in situ 的时候tissue还是会收缩,事实上看起来更严重.
: 我不知道这究竟问题出在什么地方,看起来像是tissue attach不牢固,导致容易变形.请
: 问有什么方法可以使tissue attach牢固么?
: 我是根据下面的步骤做的:
: 1. cut the arms and legs
: 2. 4% PFA (pH 7.1-7.4) overnight at 4C.
wash)
【在 m**********2 的大作中提到】
: 我用humerus section做in situ hybridization的时候,用 RNA hybridization
: incubation 过夜70度,发现tissue结构收缩,如附件所示,图示是我已经完成整个in
: situ的结果,事实上我在incubation以后就已经发现tissue结构收缩了.
: 我问了一些人说需要在fixation的时候做decalcification,我做了decalcification,结
: 果in situ 的时候tissue还是会收缩,事实上看起来更严重.
: 我不知道这究竟问题出在什么地方,看起来像是tissue attach不牢固,导致容易变形.请
: 问有什么方法可以使tissue attach牢固么?
: 我是根据下面的步骤做的:
: 1. cut the arms and legs
: 2. 4% PFA (pH 7.1-7.4) overnight at 4C.
m*y
7 楼
呃，人的反面比较不怕辐射?!
【在 G******e 的大作中提到】
: 可以把显示器放在他背后，在他前面放面镜子就行了。
: 不过这个年纪对这些是应该都应付自如了，你就不用跟着操心了。
【在 G******e 的大作中提到】
: 可以把显示器放在他背后，在他前面放面镜子就行了。
: 不过这个年纪对这些是应该都应付自如了，你就不用跟着操心了。
z*n
8 楼
大慧。若覆彼真识，种种不实诸虚妄灭，则一切根识灭。是名相灭。
大慧。相续灭者。相续所因灭，则相续灭。所从灭，及所缘灭，则相续灭。大慧。所以
者何。是其所依故。依者谓无始妄想薰。缘者，谓自心见等识境妄想。大慧。譬如泥团
微尘。非异非不异。金庄严具，亦复如是。大慧。若泥团微尘异者，非彼所成。而实彼
成。是故不异。若不异者，则泥团微尘，应无分别。如是大慧。转识藏识真相若异者，
藏识非因。若不异者，转识灭，藏识亦应灭。而自真相实不灭。是故大慧。非自真相识
灭。但业相灭。若自真相识灭者，藏识则灭。大慧。藏识灭者，不异外道断见论议。
如何恢复真识
佛又说：“如果要恢复本来真识的自相（如来藏识的真相）。只要先消除能接受习气熏
染的虚妄分别事识的作用，那一切身心的根识自然消除，这样就是灭了识相。”
（故知要不着相，首先就须消灭分别事识的作用，也就是说：首先须灭掉思惟分别的意
识，这正是其他经典所谓的“空此一念”的道理。但勿误解没有了分别意识，就等于木
石的无知，须知分别意识，只是由真识转相的第八阿赖耶识中间的一种作用。分别意识
灭了，才能见得到如来藏包含宇宙万有之机的真面目。下文就是佛对“识灭”作进一步
的指示。）
佛又说：“只要把生起相续作用的生因消灭了就可以啦。因为把所以生起相续作用的‘
因’灭了，自‘因’相继而生的‘缘’也就自然消灭，那么，相续的作用也自然无法存
在。这里所说的相续的因和缘又是什么呢？所谓‘因’者，乃是基于现量而显的现识转
相作用，它依于无始以来的妄想熏染习气而生。所谓缘呢？就是依他而起，从心识中，
引起见分分别的境界。譬如泥团和微尘，泥团不一定就算是微尘，微尘累积才构成了泥
团。如果说它是两物，但泥团其实就是微尘累积而成。如果说它是一物，但它们却是两
个形体。所以泥团与微尘本质上虽然相同，现象上却有差别。又譬如金了做成了任何器
皿，器皿的作用性质不同，而并不失去金子原来的性能。由这个譬喻，你可以了解现识
所起的现量境，一转而引起分别事识等的作用，都是如来藏识（阿赖耶识）真相转变的
转识所形成的。如果如来藏识和转识等的形成作用，根本是两回事，那么，就不应该认
为如来藏识就是转识等的因子。如果认为不是相异的，那么转识等所形成作用的现象灭
了时，如来藏识也就跟着灭了。事实上，转识之间，有变化坏灭的迹象，但如来藏识的
自相，却是不灭的。要知道所谓诸识灭者，不是如来藏识的自相消灭了，只是转识业相
的流注现象灭了。如果如来藏识自相也会灭的话，那么如来藏也便是有生灭的了。果真
是如此，那就等于 外道们的断见理论了。”
（上述佛所讲的唯识法相的话，是说明凡夫众生心识的现状，都是从如来藏识的业力流
注为因。由无始时来的我执和法尘的遍计所执，和现行的业力互相辗转熏习，生起人我
的八种心认现象的作用，所以名为八识。如果能够灭掉一切诸识的妄缘熏习，不起遍计
所执和依他而起的作用，就能顿断业识妄想之流，转识成智，得到真如性净的如来境界
。但灭除业识之流，并非如世间的断灭见解，灭了就是什么都没有了。灭是灭了一切业
识之流的流注相，转了幻有妄想种子的熏习，而圆成净智的光明。所谓无生与不生也就
是这个道理。过去未来现在三世时间所具的种性，和无边虚空的种性，都如换旧更新，
由此转了污染熏习的业力而成为净智，阿赖耶识转为真如，乃是即此用，离此用。离此
用，即此用。但依体而立义，便说为毕竟空，因为真 如自相，的确已经空了一切业识
流注之相。唯依用而立义，便说为胜义有，因为真如的体相本身不生不灭，常乐我净的
。奈何学者都由这个道理而兴起理念上的争端，实在是没有圆融贯通吾佛一大藏教全体
的宗旨。如果真能证到“善能分别一切法，于第一义而不动”境界，自当释疑息诤了。
）
大慧。相续灭者。相续所因灭，则相续灭。所从灭，及所缘灭，则相续灭。大慧。所以
者何。是其所依故。依者谓无始妄想薰。缘者，谓自心见等识境妄想。大慧。譬如泥团
微尘。非异非不异。金庄严具，亦复如是。大慧。若泥团微尘异者，非彼所成。而实彼
成。是故不异。若不异者，则泥团微尘，应无分别。如是大慧。转识藏识真相若异者，
藏识非因。若不异者，转识灭，藏识亦应灭。而自真相实不灭。是故大慧。非自真相识
灭。但业相灭。若自真相识灭者，藏识则灭。大慧。藏识灭者，不异外道断见论议。
如何恢复真识
佛又说：“如果要恢复本来真识的自相（如来藏识的真相）。只要先消除能接受习气熏
染的虚妄分别事识的作用，那一切身心的根识自然消除，这样就是灭了识相。”
（故知要不着相，首先就须消灭分别事识的作用，也就是说：首先须灭掉思惟分别的意
识，这正是其他经典所谓的“空此一念”的道理。但勿误解没有了分别意识，就等于木
石的无知，须知分别意识，只是由真识转相的第八阿赖耶识中间的一种作用。分别意识
灭了，才能见得到如来藏包含宇宙万有之机的真面目。下文就是佛对“识灭”作进一步
的指示。）
佛又说：“只要把生起相续作用的生因消灭了就可以啦。因为把所以生起相续作用的‘
因’灭了，自‘因’相继而生的‘缘’也就自然消灭，那么，相续的作用也自然无法存
在。这里所说的相续的因和缘又是什么呢？所谓‘因’者，乃是基于现量而显的现识转
相作用，它依于无始以来的妄想熏染习气而生。所谓缘呢？就是依他而起，从心识中，
引起见分分别的境界。譬如泥团和微尘，泥团不一定就算是微尘，微尘累积才构成了泥
团。如果说它是两物，但泥团其实就是微尘累积而成。如果说它是一物，但它们却是两
个形体。所以泥团与微尘本质上虽然相同，现象上却有差别。又譬如金了做成了任何器
皿，器皿的作用性质不同，而并不失去金子原来的性能。由这个譬喻，你可以了解现识
所起的现量境，一转而引起分别事识等的作用，都是如来藏识（阿赖耶识）真相转变的
转识所形成的。如果如来藏识和转识等的形成作用，根本是两回事，那么，就不应该认
为如来藏识就是转识等的因子。如果认为不是相异的，那么转识等所形成作用的现象灭
了时，如来藏识也就跟着灭了。事实上，转识之间，有变化坏灭的迹象，但如来藏识的
自相，却是不灭的。要知道所谓诸识灭者，不是如来藏识的自相消灭了，只是转识业相
的流注现象灭了。如果如来藏识自相也会灭的话，那么如来藏也便是有生灭的了。果真
是如此，那就等于 外道们的断见理论了。”
（上述佛所讲的唯识法相的话，是说明凡夫众生心识的现状，都是从如来藏识的业力流
注为因。由无始时来的我执和法尘的遍计所执，和现行的业力互相辗转熏习，生起人我
的八种心认现象的作用，所以名为八识。如果能够灭掉一切诸识的妄缘熏习，不起遍计
所执和依他而起的作用，就能顿断业识妄想之流，转识成智，得到真如性净的如来境界
。但灭除业识之流，并非如世间的断灭见解，灭了就是什么都没有了。灭是灭了一切业
识之流的流注相，转了幻有妄想种子的熏习，而圆成净智的光明。所谓无生与不生也就
是这个道理。过去未来现在三世时间所具的种性，和无边虚空的种性，都如换旧更新，
由此转了污染熏习的业力而成为净智，阿赖耶识转为真如，乃是即此用，离此用。离此
用，即此用。但依体而立义，便说为毕竟空，因为真 如自相，的确已经空了一切业识
流注之相。唯依用而立义，便说为胜义有，因为真如的体相本身不生不灭，常乐我净的
。奈何学者都由这个道理而兴起理念上的争端，实在是没有圆融贯通吾佛一大藏教全体
的宗旨。如果真能证到“善能分别一切法，于第一义而不动”境界，自当释疑息诤了。
）
m*2
9 楼
This is E15.5 bone tissue. It's difficult to dissect cartilage alone.
I will try the lower temperature first. Thank your suggestion.
Actually, I found the mineral zones in the middle attach firmly after
decalcification, while chondrocytes and hypertrophic chondrocytes are easier
to detach after in situ incubation compared to no decalcification tissues.
The pic is no decalcification tissues.
【在 l**s 的大作中提到】
: try to dissect cartilage alone, also try 55 degrees (for both in situ and
: wash)
I will try the lower temperature first. Thank your suggestion.
Actually, I found the mineral zones in the middle attach firmly after
decalcification, while chondrocytes and hypertrophic chondrocytes are easier
to detach after in situ incubation compared to no decalcification tissues.
The pic is no decalcification tissues.
【在 l**s 的大作中提到】
: try to dissect cartilage alone, also try 55 degrees (for both in situ and
: wash)
G*e
10 楼
眼不见，心不烦
【在 m****y 的大作中提到】
: 呃，人的反面比较不怕辐射?!
【在 m****y 的大作中提到】
: 呃，人的反面比较不怕辐射?!
l*s
11 楼
I got the same problem before. I found 55 degrees helps. Also, during your
experiment, aviod using PBT, just use PBS.
easier
【在 m**********2 的大作中提到】
: This is E15.5 bone tissue. It's difficult to dissect cartilage alone.
: I will try the lower temperature first. Thank your suggestion.
: Actually, I found the mineral zones in the middle attach firmly after
: decalcification, while chondrocytes and hypertrophic chondrocytes are easier
: to detach after in situ incubation compared to no decalcification tissues.
: The pic is no decalcification tissues.
experiment, aviod using PBT, just use PBS.
easier
【在 m**********2 的大作中提到】
: This is E15.5 bone tissue. It's difficult to dissect cartilage alone.
: I will try the lower temperature first. Thank your suggestion.
: Actually, I found the mineral zones in the middle attach firmly after
: decalcification, while chondrocytes and hypertrophic chondrocytes are easier
: to detach after in situ incubation compared to no decalcification tissues.
: The pic is no decalcification tissues.
c*u
12 楼
打回去重挖。整个有点儿新意的。
【在 o******r 的大作中提到】
: 他还说不用复制粘贴，也不用五笔（虽然他会）
: 不知电脑对2岁的娃辐射大么？
【在 o******r 的大作中提到】
: 他还说不用复制粘贴，也不用五笔（虽然他会）
: 不知电脑对2岁的娃辐射大么？
m*y
13 楼
可不，尤其多看字的反面有利于另半个大脑的发育。---哈哈RUN
【在 G******e 的大作中提到】
: 眼不见，心不烦
【在 G******e 的大作中提到】
: 眼不见，心不烦
t*f
14 楼
放两个成角度的镜子
就折成正的了
【在 G******e 的大作中提到】
: 可以把显示器放在他背后，在他前面放面镜子就行了。
: 不过这个年纪对这些是应该都应付自如了，你就不用跟着操心了。
就折成正的了
【在 G******e 的大作中提到】
: 可以把显示器放在他背后，在他前面放面镜子就行了。
: 不过这个年纪对这些是应该都应付自如了，你就不用跟着操心了。
b*g
15 楼
笨。另找一台电脑连个局域网，remote 到原先那台电脑上不就成了？
【在 t**f 的大作中提到】
: 放两个成角度的镜子
: 就折成正的了
【在 t**f 的大作中提到】
: 放两个成角度的镜子
: 就折成正的了
t*f
16 楼
就没辐射了？
【在 b**g 的大作中提到】
: 笨。另找一台电脑连个局域网，remote 到原先那台电脑上不就成了？
【在 b**g 的大作中提到】
: 笨。另找一台电脑连个局域网，remote 到原先那台电脑上不就成了？
b*g
17 楼
原来那台电脑的辐射不就没了？多显然的事
【在 t**f 的大作中提到】
: 就没辐射了？
【在 t**f 的大作中提到】
: 就没辐射了？
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