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问一下版上的Two-photon高手
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问一下版上的Two-photon高手# Biology - 生物学
w*n
1
最近2个帖子引发的讨论,看了后觉得这样的讨论非常有意义。我想我来谈谈我对team
work的一些想法和相关的经历。
我想,一个刚毕业不久的Phd参加工作,总有一些傲气,觉得自己各方面不错,因为在
做PHD论文的时候,因为学术的独立性,要求PHD自己从头至尾完成一个项目,所以刚到
公司的人,嘴巴上说着我是good team player,但遇到别人想分享你的credit,抢你的
territory,总有一点自我保护意识。这个想法是天生的,只是有些人会非常不明知的
表达出这样情绪,有些人还没有胆量暴露出来,有些人是想等待时机。。。。反正各有
各的想法吧,但过早表露这样的想法的人,一般要遭人整的,除非你老板特喜欢你,或
者你把老板哄得只相信你。
我n年前在国内硕士毕业后找到了一份美国大药厂的工作,当时非常兴奋,但工作2年后
,觉得没啥意识,做啥都是team work, 但最后上领奖台的都是别人。我当时做的是
medical affair and regulatory affair,老板是个Medical director, 因为90年代出
欧美大药厂刚进大陆的时候,没啥研发,很多医生辞职加入外企,大多是市场销售,所
以刚开始几年他做的是市场和销售,后来他几进几出去了欧美国家留学,然后2000年初
摇身回去变成了Medical director了。我跟着他做做医学事务,可是他也老插手市场方
面的东西,所以我也得跟着他做一些medical marketing的support,他们市场部有学经
济的,有学药的,有学管理的,五花八门,因为思考问题不是很专业,所以总来找我们
帮忙。我自己也觉得很有意思,老板支持我做,所以那时年轻的我,没日没夜的帮着做
干。可是干完了,我发现升职加薪一点也轮不到我,即使是我主管的项目,鞍前马后的
跑,做好后最后不知道怎么摇身一变,变成了市场部的项目了。那时我在职场太嫩,也
不知道如何问老板这些,还老觉得自己很能干,老板会看到我的能力和贡献的!这样不
痛不痒的做着,到第二年,有些觉得非常沮丧了。来了个新GM,我们那两个director被
赶走的赶走,被降职的降职。我自己的老板被降职,我开始向一个工作年份比我久的同
事汇报。之后,不要说升职加薪了,连年年参加的全国销售年会也不让我们几个小兵参
加了,我越做越没劲,觉得以往两年的努力都付诸东流了,灰心丧气半年后,我出国读
书了。
来美后读博,觉得非常有成就感,我3年博士一口气发了10几篇灌水paper,拿了所有该
拿的奖,那时觉得自己做的每一件事情就是为自己的CV增加份量,幸运的是,我的牛老
板从来不抢我的credit,只有第一篇文章他是通讯作者,后面统统让我做通讯作者。接
着,我的审稿工作也开始繁忙起来了,为了报到老板的知遇之恩,我2年级开始帮老板
申请funding,老板非常支持,大笔一挥,签字!做完博后后,因为家庭的原因不得不
来industry,第一份工作是非盈利组织,大家人际关系都很好,相处融洽,但也有大锅
饭的倾向,一个全是你做的项目,最后我的犹太老板让加了n个人的名字。。。。。
2年多前我来到现在的公司,发现一些同事有个相关的BS或者MS的学历,但业务能力很
差。大家也知道,工业界的有些常规工作,用不到高科技,即使有点技术性的,长期不
在一线的领导也看不出来质量的差异;甚至有些东西做错了,只要没人仔细查,不会有
人知道,因为大公司本身很多工作就是制造trash,谁看呢。我也发现有些同事长期不用
专业知识,连学校里学的那点东西都忘光了。遇到有点难的,就开始怂恿领导
outsource;还有一招是,喜欢逼走业务能力强的,然后招刚毕业的外国人来做,反正
刚来的人不熟厉害关系。如果这些业务能力差的是新人的老板,新人为了表现自己的能
力,为了H1B,为了申绿卡,非常卖力帮SB老板干;如果这类人是能力差的同事,新人
为了表现team work的精神,不好意思不给这些人搭顺风车。这些人又可以继续混几年
,等到新人醒悟过来,开始不听话了,这类人又有手段开始搞了,手段就是让你不舒服
,打压你,击垮你,让你觉得做着没意思,然后就是跳槽。然后周而复始,这样的戏开
始循环。。。。
我来这家公司同时,有一个Sr director从其他国家调来总部,本来他在那个国家有
direct reports给他做,来这后是individual contributor,跟另外一个业务能力差的
同事一起来劝说我,要求我把我做的一些项目纳入他们的initiative,写上他俩的名字
。 我说,是否纳入要看咱老板的意思啊。今年的项目已经结束了,明年如有类似的项
目,我一定放到你们的initiative里,增加visibility。其实,我这些项目是我老板布
置给我做的,然后所有的deliverable都给他俩用的。隔了一段时间,那个业务差的同
事又来了,让他的一个手下A在我做的基础上,加了一点点简单的分析(大概就一行程
序),然后我把他和他的手下名字都加上了。可到年底总结会的时候,这些deliverable
又变成了业务差的那个同事组里另外一个手下B的presentation了,连我的名字提都没
提。后来我知道,这个同事B还到部门外拿着我的deliverable做了presentation,丝毫
没提这是我的contribution。而且我老板是我们部门另外一个被邀请参加会议的人!!
!天地良性,这些deliverables是我挺着大肚子奋战到生娃的最后一刻完成的,连个
appreciation都没有,真是太欺负姐了吧!
诸如此类狗血的事情很多很多,所以千万别小看这些道貌岸然的白人,他们认为华人怕
事多,不敢speak up! 我就开始'教育'他们,当年我在另外一个药厂的时候,我们的GM
如何教育大家no free ride!我知道他们肯定不爽,可是如果我不说,姐很不爽啊!
我也开始游说老板,要改进process & workflows, 定义好responsibilities & roles
!我也‘教育’老板,每个人要有ownership的意识!我不想侵犯别人的territory,但
也别想占我太多的便宜!
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d*5
3
明朝最多,三国,清,宋,唐次之,晋,春秋战国,元也有。
跑回古代有什么好,出恭没马桶,草纸。吃的又差,晚上没娱乐,去个地方要好久。还
一堆现代人扎堆往古代跑,想改变历史。
写这么多都是书荒闹的,有没穿到未来的书推荐啊。
[发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]
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J*i
4
Does anyone know whether APC or Alexa Fluor 647 work in Two-photon system?
What is the excitation wavelength? I cannot find any information about this.
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M*6
5
谢谢分享。
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x*o
6
未来有没有共产党?

【在 d*******5 的大作中提到】
: 明朝最多,三国,清,宋,唐次之,晋,春秋战国,元也有。
: 跑回古代有什么好,出恭没马桶,草纸。吃的又差,晚上没娱乐,去个地方要好久。还
: 一堆现代人扎堆往古代跑,想改变历史。
: 写这么多都是书荒闹的,有没穿到未来的书推荐啊。
: [发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]

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g*e
7
一般来说都是excitation x 2 吧,看上去很玄
试过google invitrogen spectra viewer了嘛?

this.

【在 J*****i 的大作中提到】
: Does anyone know whether APC or Alexa Fluor 647 work in Two-photon system?
: What is the excitation wavelength? I cannot find any information about this.

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c*z
8
您真是。。。
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t*o
9
穿回古代才好作弊啊
一个什么都不是的索南回到古代就无所不能
文豪发明家哲人革命家,想当什么当什么
想泡谁泡谁
多爽
[在 dashu2005 (dashu) 的大作中提到:]
:明朝最多,三国,清,宋,唐次之,晋,春秋战国,元也有。
:跑回古代有什么好,出恭没马桶,草纸。吃的又差,晚上没娱乐,去个地方要好久。
还一堆现代人扎堆往古代跑,想改变历史。
:...........
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i*g
10
嗯, 没用过这个波段的,最多只试过YFP

【在 g*****e 的大作中提到】
: 一般来说都是excitation x 2 吧,看上去很玄
: 试过google invitrogen spectra viewer了嘛?
:
: this.

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c*g
11
你那点东西,我估计这个版上大多数人碰
都懒得去碰。
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k*5
12
说的好像能随便写现代文,写不了几段就被和谐了
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s*j
13
just go through the wavelength range of your pulse laser by 10nm step,
then you will know which is best.
two photon excitation spectral curve is normally very broad, the
excitation "peak" doesn't mean much here.

this.

【在 J*****i 的大作中提到】
: Does anyone know whether APC or Alexa Fluor 647 work in Two-photon system?
: What is the excitation wavelength? I cannot find any information about this.

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A*s
14
Wow! are you a troll?
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l*e
15
未来一切未知,不好写。古代设定都很确定,有什么人,科技什么水平。
穿越到未来你就是傻子,不吓尿就不错了。回到古代你就是前知五百年后知五百年的超
人。
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s*j
16
normally is one photon excitation x 2 - 30~50nm

【在 g*****e 的大作中提到】
: 一般来说都是excitation x 2 吧,看上去很玄
: 试过google invitrogen spectra viewer了嘛?
:
: this.

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k*o
17
哎。忍不住说几句。
大家谁没有经历过被人抢credit的事情。team work是非常重要,但是如果因为team/
company的工作环境不好或者skill set不match被别人抢credit,能让同事意识到自己
的value同时保护自己的credit也同样重要。
但是你完全不知道大家批评你的不是你该不该要credit,而是应该怎么样保护/要自己的
credit。这恰恰是你IQ的问题所在和大家好心希望你以后能改进的。你入职这么短因为
一点小事居功直接向manager要加工资是最最拙劣的方法。 当初如果你还想继续呆在这
个公司,就应该更多想想怎么能和同事manager沟通让大家都认可你的贡献而给你
credit而不是自己去生要,这也是职场上的重要技能。有的牛人性格天生好,左右逢源
没办法。但是像楼主这样的应该在工作中积累起相处的方法的。。。反之,如果当初你
就想走,就直接什么都别说直接找下家更match你的地方就是了,干嘛无事生非。。。
你却恰恰做了个让人无语的做法,还振振有词。
总之,大家都经历过你类似的经历,只是想告诉你该怎么正确处理罢了。
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J*i
18
为什么Alexa Fluor 488 和 594 的excitation都是800nm左右呢? 不符合X2-30~50啊

【在 s*****j 的大作中提到】
: normally is one photon excitation x 2 - 30~50nm
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l*e
19
我已经把发言删除了,请大家针对楼主的内容讨论,谢谢!
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s*j
20
800nm 是因为在激光强度在此波长最强.
不同实验室报告的波长完全不同. 就GFP来说, 800nm-980nm的我都见过. 最简单的办
法就是一个个的试, 找到最佳的波长用就得了.
这片文章你可能感兴趣.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12423261

【在 J*****i 的大作中提到】
: 为什么Alexa Fluor 488 和 594 的excitation都是800nm左右呢? 不符合X2-30~50啊
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c*g
21
LZ MM躺着中枪。。。

己的

【在 k****o 的大作中提到】
: 哎。忍不住说几句。
: 大家谁没有经历过被人抢credit的事情。team work是非常重要,但是如果因为team/
: company的工作环境不好或者skill set不match被别人抢credit,能让同事意识到自己
: 的value同时保护自己的credit也同样重要。
: 但是你完全不知道大家批评你的不是你该不该要credit,而是应该怎么样保护/要自己的
: credit。这恰恰是你IQ的问题所在和大家好心希望你以后能改进的。你入职这么短因为
: 一点小事居功直接向manager要加工资是最最拙劣的方法。 当初如果你还想继续呆在这
: 个公司,就应该更多想想怎么能和同事manager沟通让大家都认可你的贡献而给你
: credit而不是自己去生要,这也是职场上的重要技能。有的牛人性格天生好,左右逢源
: 没办法。但是像楼主这样的应该在工作中积累起相处的方法的。。。反之,如果当初你

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J*i
22
Thank you for the paper and information!
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k*o
23
sorry了。原回复已经改了,呵呵。

【在 c****g 的大作中提到】
: LZ MM躺着中枪。。。
:
: 己的

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w*y
24
没有通用的公式,都要用自己的机器试,不过依我的经验不同机器相差20-30 nm很正常
,像上边说一样的GFP不同机器差别800-980 nm,这么夸张倒是头一次听说。
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s*j
25
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2818.2005.01437.x/abstract
fig 1(a), 对照相应波长的激光强度和modelock的好坏. 同一个机器上800nm-980nm都
是可以接受的. 不要说不同的机器了.

【在 w********y 的大作中提到】
: 没有通用的公式,都要用自己的机器试,不过依我的经验不同机器相差20-30 nm很正常
: ,像上边说一样的GFP不同机器差别800-980 nm,这么夸张倒是头一次听说。

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w*y
26
这就有点儿咬文嚼字了,一般应用说的都是最佳或者最有效的excitation,大概有20-
30 nm的偏差,也就是光谱中的peak大概也就那么宽,非要用其他波长,把激光强度开
大当然可以,实际实验中谁会这么用,除非有特殊考虑需要回避那个最佳值。

【在 s*****j 的大作中提到】
: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2818.2005.01437.x/abstract
: fig 1(a), 对照相应波长的激光强度和modelock的好坏. 同一个机器上800nm-980nm都
: 是可以接受的. 不要说不同的机器了.

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p*r
27

594*2=1200, not in range for a normal Ti-sapphire laser. So people use a
side
excitation lobe.

【在 J*****i 的大作中提到】
: 为什么Alexa Fluor 488 和 594 的excitation都是800nm左右呢? 不符合X2-30~50啊
avatar
p*r
28

Well, laser has different peak power at different wavelengths. So both need
to be
taken into consideration.

【在 w********y 的大作中提到】
: 这就有点儿咬文嚼字了,一般应用说的都是最佳或者最有效的excitation,大概有20-
: 30 nm的偏差,也就是光谱中的peak大概也就那么宽,非要用其他波长,把激光强度开
: 大当然可以,实际实验中谁会这么用,除非有特殊考虑需要回避那个最佳值。

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p*l
29
我这个做光学的来说说吧。Ti:Sapphire激光是人手工一个个镜子搭起来的,最后的性
能也是完全考手调优化的,可以说天下没有两个一样的Ti:Sapphire。
Ti:Sapphire激光的输出,只要环境温度湿度一变,就可能变,每次关上再打开,也可
能不一样,所以不可能给用户一个很精确不变的波长定位。配给two photon上的自动调
波长的控制,基本只是给你个估计的波长,和实际差个20 30 nm一点都不奇怪。
真正拿Ti:Sapphire做光学的,如果对输出波长脉冲形状有严格要求,都是弄光谱仪一
直测着,一不对劲就去调里面的镜子,经常一大半时间花在和Ti:Sapphire搏斗上去了
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a*y
30
呵呵,先问一下为什么要用647nm 的dye?如果不是必须,其他的选择有很多。
如果非要用647,双光子也不是不可能的,只是常用的Ti:sapphire就可能不太好的,
因为这个石头的波长只能是660~1040;而且两端波长的带宽和输出都是很差,几乎不可
能用于成像;你需要做的是换用其他的光源,例如1064nm固定波长的飞秒激光器(不过
这个波段有些麻烦,人眼看不到),应该可以work;
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y*u
31
这个对。我们这儿管2p的物理出身,就是这么讲的。我开始新实验时一般都是20-30nm
一点一点的试。

【在 p*l 的大作中提到】
: 我这个做光学的来说说吧。Ti:Sapphire激光是人手工一个个镜子搭起来的,最后的性
: 能也是完全考手调优化的,可以说天下没有两个一样的Ti:Sapphire。
: Ti:Sapphire激光的输出,只要环境温度湿度一变,就可能变,每次关上再打开,也可
: 能不一样,所以不可能给用户一个很精确不变的波长定位。配给two photon上的自动调
: 波长的控制,基本只是给你个估计的波长,和实际差个20 30 nm一点都不奇怪。
: 真正拿Ti:Sapphire做光学的,如果对输出波长脉冲形状有严格要求,都是弄光谱仪一
: 直测着,一不对劲就去调里面的镜子,经常一大半时间花在和Ti:Sapphire搏斗上去了
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