s*o
2 楼
【 以下文字转载自 Actuary 讨论区 】
发信人: spectdoo (doo), 信区: Actuary
标 题: 请问大家：关于h1b prevailing wage
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 24 16:01:16 2015, 美东)
SOA五个考试，四年经验的硕士，h1b transfer律师说prevailing wage level 2是104k
(title是actuary)，很惭愧差一点没达到，请问大家换工作的时候，查prevaling wage
也是用的actuary title么，level 1我这种情况会被拒么？大家是怎么操作的，万分感
谢!!
发信人: spectdoo (doo), 信区: Actuary
标 题: 请问大家：关于h1b prevailing wage
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 24 16:01:16 2015, 美东)
SOA五个考试，四年经验的硕士，h1b transfer律师说prevailing wage level 2是104k
(title是actuary)，很惭愧差一点没达到，请问大家换工作的时候，查prevaling wage
也是用的actuary title么，level 1我这种情况会被拒么？大家是怎么操作的，万分感
谢!!
L*n
3 楼
白羊女（敢爱敢恨）、金牛女（温和忠诚）、双子女（善变开朗）、巨蟹女（温和体贴
）、狮子女（热情自信）、处女女（细心完美）、天秤女（正直高雅）、天蝎女（神秘
诱惑）、射手女（可爱活泼）、摩羯女（忠贞可靠）、水瓶女（友善理智）、双鱼女（
浪漫唯美）
）、狮子女（热情自信）、处女女（细心完美）、天秤女（正直高雅）、天蝎女（神秘
诱惑）、射手女（可爱活泼）、摩羯女（忠贞可靠）、水瓶女（友善理智）、双鱼女（
浪漫唯美）
x*8
4 楼
所以您要是要价25刀， 俺就折腾不起了。
有合适的出价。 站内PM 咱们paypal 交割。
有合适的出价。 站内PM 咱们paypal 交割。
h*n
5 楼
我们有个KO老鼠, 把一个gene的exon 5 切掉, 引起frame shift(exon 6开始不远的地
方出现stop codon), 结果homozygous KO胚胎致死; 而同样这个gene, 把exon 4切掉
引起frame shift(exon 5开始不远的地方出现stop codon), homozygous KO胚胎一点问
题都没有, 老鼠长得很好.
各位觉得会是啥问题呢?
谢谢
方出现stop codon), 结果homozygous KO胚胎致死; 而同样这个gene, 把exon 4切掉
引起frame shift(exon 5开始不远的地方出现stop codon), homozygous KO胚胎一点问
题都没有, 老鼠长得很好.
各位觉得会是啥问题呢?
谢谢
p*y
6 楼
可以
【在 N**********d 的大作中提到】
: rt
【在 N**********d 的大作中提到】
: rt
H*y
7 楼
太阳月亮金星，让我看哪个呢？
白羊女（敢爱敢恨）、金牛女（温和忠诚）、双子女（善变开朗）、巨蟹女（温和体贴
）、狮子女（热情自信）、处女女（细心完美）、天秤女（正直高雅）、天蝎女（神秘
诱惑）、射手女（可爱活泼）、摩羯女（忠贞可靠）、水瓶女（友善理智）、双鱼女（
浪漫唯美）
【在 L*********n 的大作中提到】
: 白羊女（敢爱敢恨）、金牛女（温和忠诚）、双子女（善变开朗）、巨蟹女（温和体贴
: ）、狮子女（热情自信）、处女女（细心完美）、天秤女（正直高雅）、天蝎女（神秘
: 诱惑）、射手女（可爱活泼）、摩羯女（忠贞可靠）、水瓶女（友善理智）、双鱼女（
: 浪漫唯美）
白羊女（敢爱敢恨）、金牛女（温和忠诚）、双子女（善变开朗）、巨蟹女（温和体贴
）、狮子女（热情自信）、处女女（细心完美）、天秤女（正直高雅）、天蝎女（神秘
诱惑）、射手女（可爱活泼）、摩羯女（忠贞可靠）、水瓶女（友善理智）、双鱼女（
浪漫唯美）
【在 L*********n 的大作中提到】
: 白羊女（敢爱敢恨）、金牛女（温和忠诚）、双子女（善变开朗）、巨蟹女（温和体贴
: ）、狮子女（热情自信）、处女女（细心完美）、天秤女（正直高雅）、天蝎女（神秘
: 诱惑）、射手女（可爱活泼）、摩羯女（忠贞可靠）、水瓶女（友善理智）、双鱼女（
: 浪漫唯美）
c*d
8 楼
那还折腾啥呀，直接买个staples 25 off 75
y*8
9 楼
which is the first coding exon? Is there any conserved domain before exon 6
or 5?
or 5?
N*d
10 楼
怎么合并呢？
谢谢
【在 p******y 的大作中提到】
: 可以
谢谢
【在 p******y 的大作中提到】
: 可以
L*n
11 楼
都看看
k*a
12 楼
10?
D*a
13 楼
胚胎咋死的？
y*x
14 楼
co-ask
【在 N**********d 的大作中提到】
: 怎么合并呢？
: 谢谢
【在 N**********d 的大作中提到】
: 怎么合并呢？
: 谢谢
o*i
15 楼
最简单的解释是
有gene的alternative的splice form 里面没有exon4 功能照常
或者你们的exon4的那个construct设计错了
【在 h********n 的大作中提到】
: 我们有个KO老鼠, 把一个gene的exon 5 切掉, 引起frame shift(exon 6开始不远的地
: 方出现stop codon), 结果homozygous KO胚胎致死; 而同样这个gene, 把exon 4切掉
: 引起frame shift(exon 5开始不远的地方出现stop codon), homozygous KO胚胎一点问
: 题都没有, 老鼠长得很好.
: 各位觉得会是啥问题呢?
: 谢谢
有gene的alternative的splice form 里面没有exon4 功能照常
或者你们的exon4的那个construct设计错了
【在 h********n 的大作中提到】
: 我们有个KO老鼠, 把一个gene的exon 5 切掉, 引起frame shift(exon 6开始不远的地
: 方出现stop codon), 结果homozygous KO胚胎致死; 而同样这个gene, 把exon 4切掉
: 引起frame shift(exon 5开始不远的地方出现stop codon), homozygous KO胚胎一点问
: 题都没有, 老鼠长得很好.
: 各位觉得会是啥问题呢?
: 谢谢
N*d
16 楼
顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 怎么合并呢？
: 谢谢
【在 N**********d 的大作中提到】
: 怎么合并呢？
: 谢谢
h*n
17 楼
exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
alternatice splice, 怎么验证?
【在 o**i 的大作中提到】
: 最简单的解释是
: 有gene的alternative的splice form 里面没有exon4 功能照常
: 或者你们的exon4的那个construct设计错了
alternatice splice, 怎么验证?
【在 o**i 的大作中提到】
: 最简单的解释是
: 有gene的alternative的splice form 里面没有exon4 功能照常
: 或者你们的exon4的那个construct设计错了
N*d
18 楼
顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 顶
n*8
19 楼
neomorphic?
N*d
20 楼
自顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 顶
m*p
21 楼
Dominant negative isoform from the fist KO?
N*d
22 楼
再顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 自顶
【在 N**********d 的大作中提到】
: 自顶
Z*g
23 楼
可能是该基因通过alternatice splice产生至少两种mRAN,一种mRNA包含exon4,其编码
蛋白不是发育必需;另一种mRNA包含exon5,其编码蛋白为胚胎发育必需.所以确认一下该
基因可能的alternatice splice.
蛋白不是发育必需;另一种mRNA包含exon5,其编码蛋白为胚胎发育必需.所以确认一下该
基因可能的alternatice splice.
p*t
24 楼
这个你要自己打电话问FIA/BOA
【在 N**********d 的大作中提到】
: rt
【在 N**********d 的大作中提到】
: rt
m*o
25 楼
做没做western Blot看看到底蛋白表达还有没有，这两种不同knockout的的老鼠之间仔
细比较有没有多出来什么条带。
细比较有没有多出来什么条带。
s*r
26 楼
不如先RT，western看看还有没有转录和表达。
exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
alternatice splice, 怎么验证?
【在 h********n 的大作中提到】
: exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
: alternatice splice, 怎么验证?
exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
alternatice splice, 怎么验证?
【在 h********n 的大作中提到】
: exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
: alternatice splice, 怎么验证?
D*g
27 楼
与下游的gene远不远，会不会切掉EXON5同时把下游的gene的promoter切掉了？
【在 h********n 的大作中提到】
: 我们有个KO老鼠, 把一个gene的exon 5 切掉, 引起frame shift(exon 6开始不远的地
: 方出现stop codon), 结果homozygous KO胚胎致死; 而同样这个gene, 把exon 4切掉
: 引起frame shift(exon 5开始不远的地方出现stop codon), homozygous KO胚胎一点问
: 题都没有, 老鼠长得很好.
: 各位觉得会是啥问题呢?
: 谢谢
【在 h********n 的大作中提到】
: 我们有个KO老鼠, 把一个gene的exon 5 切掉, 引起frame shift(exon 6开始不远的地
: 方出现stop codon), 结果homozygous KO胚胎致死; 而同样这个gene, 把exon 4切掉
: 引起frame shift(exon 5开始不远的地方出现stop codon), homozygous KO胚胎一点问
: 题都没有, 老鼠长得很好.
: 各位觉得会是啥问题呢?
: 谢谢
h*n
28 楼
没有能识别exon 1-3的抗体.
【在 m***o 的大作中提到】
: 做没做western Blot看看到底蛋白表达还有没有，这两种不同knockout的的老鼠之间仔
: 细比较有没有多出来什么条带。
【在 m***o 的大作中提到】
: 做没做western Blot看看到底蛋白表达还有没有，这两种不同knockout的的老鼠之间仔
: 细比较有没有多出来什么条带。
h*n
29 楼
恩, 我准备做RT看看含有exon 1-3的mRNA 是否存在.
【在 s******r 的大作中提到】
: 不如先RT，western看看还有没有转录和表达。
:
: exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
: alternatice splice, 怎么验证?
【在 s******r 的大作中提到】
: 不如先RT，western看看还有没有转录和表达。
:
: exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
: alternatice splice, 怎么验证?
h*n
30 楼
怎么确认可能的alternative splicing? RT-PCR以后测序吗?
【在 Z**********g 的大作中提到】
: 可能是该基因通过alternatice splice产生至少两种mRAN,一种mRNA包含exon4,其编码
: 蛋白不是发育必需;另一种mRNA包含exon5,其编码蛋白为胚胎发育必需.所以确认一下该
: 基因可能的alternatice splice.
【在 Z**********g 的大作中提到】
: 可能是该基因通过alternatice splice产生至少两种mRAN,一种mRNA包含exon4,其编码
: 蛋白不是发育必需;另一种mRNA包含exon5,其编码蛋白为胚胎发育必需.所以确认一下该
: 基因可能的alternatice splice.
y*8
31 楼
Have you tried to get the hets of Del E4/Del E5?
y*8
32 楼
If P32 is not a problem, Northern should be better.
【在 h********n 的大作中提到】
: 怎么确认可能的alternative splicing? RT-PCR以后测序吗?
【在 h********n 的大作中提到】
: 怎么确认可能的alternative splicing? RT-PCR以后测序吗?
s*y
33 楼
对，RT 之后测个序
【在 s******r 的大作中提到】
: 不如先RT，western看看还有没有转录和表达。
:
: exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
: alternatice splice, 怎么验证?
【在 s******r 的大作中提到】
: 不如先RT，western看看还有没有转录和表达。
:
: exon 4 deletion应该没错, 两个实验室验证了.
: alternatice splice, 怎么验证?
i*n
34 楼
做RT-PCR ? 看产物有多少个？ 5‘ RACE， 看transcription 起点？
h*n
35 楼
yes, it is viable.
【在 y******8 的大作中提到】
: Have you tried to get the hets of Del E4/Del E5?
【在 y******8 的大作中提到】
: Have you tried to get the hets of Del E4/Del E5?
h*n
36 楼
P32 is not problem, 娃已经两岁多了.....
【在 y******8 的大作中提到】
: If P32 is not a problem, Northern should be better.
【在 y******8 的大作中提到】
: If P32 is not a problem, Northern should be better.
y*8
37 楼
Then, dominant negative form is less likely.
Northern or RTPCR-sequencing should work.
【在 h********n 的大作中提到】
: yes, it is viable.
Northern or RTPCR-sequencing should work.
【在 h********n 的大作中提到】
: yes, it is viable.
h*n
38 楼
thank you.
【在 y******8 的大作中提到】
: Then, dominant negative form is less likely.
: Northern or RTPCR-sequencing should work.
【在 y******8 的大作中提到】
: Then, dominant negative form is less likely.
: Northern or RTPCR-sequencing should work.
i*g
39 楼
我第一反应也是alternative splicing and exon6 required
RT-sequencing.
问题是，如果这种isoform只是发育某个阶段表达，说不定简单RT 找不到
还有个解释是，exon5 对应的domain是毒性的，平时是masked,,, 下面不用我多说了
RT-sequencing.
问题是，如果这种isoform只是发育某个阶段表达，说不定简单RT 找不到
还有个解释是，exon5 对应的domain是毒性的，平时是masked,,, 下面不用我多说了
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