蛋白在有sds的buffer里面，怎么测浓度？# Biology - 生物学
l*t
1 楼
那个http://www.ustraveldocs.com，如果是我想给父母预约，是用我的名字和email注册，还是用父母的名字和email? 如果是我的，开始时是选“在中国”吗？
谢谢。
谢谢。
h*j
2 楼
求link
l*u
3 楼
大学报名时候我带了两套金庸的书，射雕英雄传和倚天屠龙记。
后来这些书，被一些同学借着看，最后弄不见了，说要赔偿我，最终不了了之。
在大学里，后来又买了金庸和黄易的一些书，不过黄易的书是买盗版的，十块钱一本，
很厚很厚，八九百页的那种，但是呢字体还很小，所以一本书有上百万文字。
除了这些玩意，我还买了很多杂志，读者和青年文摘最多，旧报摊买的。
全班人都知道我喜欢看书，喜欢买书，也知道我喜欢写字。
结果有次，有女同学跑到我们隔壁宿舍来玩，在里面发现一本咸书，女同学说，你们男
生喜欢看黄色小说呀，真坏。
其中一家伙说，我们没看，是隔壁的某某买的，丢在我们这里。
我完全不知情呀，那书也不是我买的，我甚至不知道被这些鸟人给陷害了。大三和一妹
纸关系很好的时候，她和我说起这是，我马上挑了起来，这绝对是诬陷，赤裸裸的诬陷。
只是事情过了很久了，我想找人发飙都不管用，于是显得很无奈的地说，听你说我才知
道这么回事，至于那书，我都诶看过，更加说买过了。
现在突然想起这事来，还是觉得无语。
后来这些书，被一些同学借着看，最后弄不见了，说要赔偿我，最终不了了之。
在大学里，后来又买了金庸和黄易的一些书，不过黄易的书是买盗版的，十块钱一本，
很厚很厚，八九百页的那种，但是呢字体还很小，所以一本书有上百万文字。
除了这些玩意，我还买了很多杂志，读者和青年文摘最多，旧报摊买的。
全班人都知道我喜欢看书，喜欢买书，也知道我喜欢写字。
结果有次，有女同学跑到我们隔壁宿舍来玩，在里面发现一本咸书，女同学说，你们男
生喜欢看黄色小说呀，真坏。
其中一家伙说，我们没看，是隔壁的某某买的，丢在我们这里。
我完全不知情呀，那书也不是我买的，我甚至不知道被这些鸟人给陷害了。大三和一妹
纸关系很好的时候，她和我说起这是，我马上挑了起来，这绝对是诬陷，赤裸裸的诬陷。
只是事情过了很久了，我想找人发飙都不管用，于是显得很无奈的地说，听你说我才知
道这么回事，至于那书，我都诶看过，更加说买过了。
现在突然想起这事来，还是觉得无语。
s*y
4 楼
如果不dialyze的话，有别的方法吗？
查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
assay。
有别的办法吗？
测浓度做定量的WB。
谢谢。
查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
assay。
有别的办法吗？
测浓度做定量的WB。
谢谢。
a*n
5 楼
随便，没有人管那么多。
【在 l**t 的大作中提到】
: 那个http://www.ustraveldocs.com，如果是我想给父母预约，是用我的名字和email注册，还是用父母的名字和email? 如果是我的，开始时是选“在中国”吗？
: 谢谢。
【在 l**t 的大作中提到】
: 那个http://www.ustraveldocs.com，如果是我想给父母预约，是用我的名字和email注册，还是用父母的名字和email? 如果是我的，开始时是选“在中国”吗？
: 谢谢。
j*n
6 楼
v.have8.com
s*y
7 楼
跑胶啊！
同时跑一个standard control with a series of dilution 啊！
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
: 查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
: assay。
: 有别的办法吗？
: 测浓度做定量的WB。
: 谢谢。
同时跑一个standard control with a series of dilution 啊！
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
: 查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
: assay。
: 有别的办法吗？
: 测浓度做定量的WB。
: 谢谢。
h*z
8 楼
用什么email无所谓，但是姓名等信息填写签证申请人的！最终的确认页会发送到你注
册的email里。另外，申请人在中国，location就选中国,和你在不在中国无关。
册的email里。另外，申请人在中国，location就选中国,和你在不在中国无关。
u*a
9 楼
我从不在线看,都是下载.忍受不了视频网站的二次编码.
这个有xunlei快传可以下
这个有xunlei快传可以下
o*r
10 楼
or try dot blot on WB membrane, then stain w/ coomassie blue, then compare w
/ control.
【在 s******y 的大作中提到】
: 跑胶啊！
: 同时跑一个standard control with a series of dilution 啊！
/ control.
【在 s******y 的大作中提到】
: 跑胶啊！
: 同时跑一个standard control with a series of dilution 啊！
t*s
11 楼
如果给父母两个人预约，怎么能在一个帐号里面完成？
【在 h***z 的大作中提到】
: 用什么email无所谓，但是姓名等信息填写签证申请人的！最终的确认页会发送到你注
: 册的email里。另外，申请人在中国，location就选中国,和你在不在中国无关。
【在 h***z 的大作中提到】
: 用什么email无所谓，但是姓名等信息填写签证申请人的！最终的确认页会发送到你注
: 册的email里。另外，申请人在中国，location就选中国,和你在不在中国无关。
d*a
12 楼
我都是用IPAD连接到电视机上面看的，那才爽
y*8
13 楼
If only SDS and salts, measure the OD 280. Make sure using the same buffer
as blank. A rough way.
as blank. A rough way.
x*u
14 楼
先注册一个人的信息。然后可以添加随行人员，这时候把另外一个人加上。
【在 t*s 的大作中提到】
: 如果给父母两个人预约，怎么能在一个帐号里面完成？
【在 t*s 的大作中提到】
: 如果给父母两个人预约，怎么能在一个帐号里面完成？
l*a
16 楼
detergent compatible BCA assay?不知道对于SDS浓度比较高的情况work不work。
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
: 查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
: assay。
: 有别的办法吗？
: 测浓度做定量的WB。
: 谢谢。
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
: 查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
: assay。
: 有别的办法吗？
: 测浓度做定量的WB。
: 谢谢。
h*o
17 楼
Biorad Protein assay, compatible with 0.1% SDS.
W*C
18 楼
也可以ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ 去掉干扰。 当然这一步也会损失一
些蛋白（可以控制在２０％内， 本来蛋白测浓度也不准）， 如果测相对值， 都损
失也就无所谓了， 需要精确的活， 做一个ｃｏｎｔｒｏｌ看损失了多少。
western最多半定量， 不信你跑两个差１０％的样品， 根本看不出区别。。。
些蛋白（可以控制在２０％内， 本来蛋白测浓度也不准）， 如果测相对值， 都损
失也就无所谓了， 需要精确的活， 做一个ｃｏｎｔｒｏｌ看损失了多少。
western最多半定量， 不信你跑两个差１０％的样品， 根本看不出区别。。。
s*y
19 楼
这个很不准的，因为detergent 会干扰读数的
【在 y******8 的大作中提到】
: If only SDS and salts, measure the OD 280. Make sure using the same buffer
: as blank. A rough way.
【在 y******8 的大作中提到】
: If only SDS and salts, measure the OD 280. Make sure using the same buffer
: as blank. A rough way.
s*s
20 楼
嗯，这个是标准。用过所谓的sds-compatible kit, 叫啥RC-DC一类的，
ms第一步就是TCA precipitation
【在 W****C 的大作中提到】
: 也可以ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ 去掉干扰。 当然这一步也会损失一
: 些蛋白（可以控制在２０％内， 本来蛋白测浓度也不准）， 如果测相对值， 都损
: 失也就无所谓了， 需要精确的活， 做一个ｃｏｎｔｒｏｌ看损失了多少。
: western最多半定量， 不信你跑两个差１０％的样品， 根本看不出区别。。。
ms第一步就是TCA precipitation
【在 W****C 的大作中提到】
: 也可以ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ 去掉干扰。 当然这一步也会损失一
: 些蛋白（可以控制在２０％内， 本来蛋白测浓度也不准）， 如果测相对值， 都损
: 失也就无所谓了， 需要精确的活， 做一个ｃｏｎｔｒｏｌ看损失了多少。
: western最多半定量， 不信你跑两个差１０％的样品， 根本看不出区别。。。
s*y
21 楼
啊？那这个kit岂不是耍赖皮么？都把蛋白沉淀了重新溶解，那还算什么
sds-compatible？
【在 s******s 的大作中提到】
: 嗯，这个是标准。用过所谓的sds-compatible kit, 叫啥RC-DC一类的，
: ms第一步就是TCA precipitation
sds-compatible？
【在 s******s 的大作中提到】
: 嗯，这个是标准。用过所谓的sds-compatible kit, 叫啥RC-DC一类的，
: ms第一步就是TCA precipitation
A*d
22 楼
倒是准确，不过工作量大了点。
不能就bradford,用含sds的buffer作blank吗？
【在 s******y 的大作中提到】
: 跑胶啊！
: 同时跑一个standard control with a series of dilution 啊！
不能就bradford,用含sds的buffer作blank吗？
【在 s******y 的大作中提到】
: 跑胶啊！
: 同时跑一个standard control with a series of dilution 啊！
s*y
23 楼
工作量不大啊！不就是跑个胶染个色么。最多５个小时就更搞定。
bradford也必须做标准曲线的。
大部分市面上卖的bradford kit 不能用在超过0.1% SDS的场合
【在 A******d 的大作中提到】
: 倒是准确，不过工作量大了点。
: 不能就bradford,用含sds的buffer作blank吗？
bradford也必须做标准曲线的。
大部分市面上卖的bradford kit 不能用在超过0.1% SDS的场合
【在 A******d 的大作中提到】
: 倒是准确，不过工作量大了点。
: 不能就bradford,用含sds的buffer作blank吗？
y*8
24 楼
如果蛋白浓度很低，干扰会很大，用coomassie会比较准。如果蛋白浓度高，280吸收最
简单，而且容易回收，前提是没有加loading dye.
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个很不准的，因为detergent 会干扰读数的
简单，而且容易回收，前提是没有加loading dye.
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个很不准的，因为detergent 会干扰读数的
y*g
25 楼
BCA assay can tolerate SDS<5%
s*y
26 楼
http://www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=02020104
Substances compatible with the Thermo Scientific Coomassie Plus Protein
Assay. The following is a short list of compatible substances and their
concentrations that the BCA Protein Assay can tolerate. For a more complete
list please refer to the instruction booklet for the product or view our
Table of Compatible Substances for a comparison of substance compatibilities
among several different protein assay methods.
Substance Compatible Conc. Substance Compatible Conc.
Ammonium Sulfate 1.0M ß-Mercaptoethanol 1.0M
Azide 0.5% MES 100mM
NaCl 5.0M NaOH 0.1M
Brij-35 0.062% Brij-56 0.03%
Brij-58 0.016% NP-40 0.5%
CHAPS 5.0% CHAPSO 5.0%
SDS 0.016% Sucrose 10.0%
Citrate 200mM Tris 2.0M
EDTA 0.1M Glucose 1.0M
Glycine 0.1M Triton X-100 0.062%
Triton X-114 0.062% Triton X-405 0.25%
Guanidine HCl 3.5M Tween-20 0.031%
Tween-80 0.016% HCl 0.1M
KSCN 3.0M Urea 3.0M
Please refer to the product instructions for special notes and definitions
about compatibility tolerances.
Substances compatible with the Thermo Scientific Coomassie Plus Protein
Assay. The following is a short list of compatible substances and their
concentrations that the BCA Protein Assay can tolerate. For a more complete
list please refer to the instruction booklet for the product or view our
Table of Compatible Substances for a comparison of substance compatibilities
among several different protein assay methods.
Substance Compatible Conc. Substance Compatible Conc.
Ammonium Sulfate 1.0M ß-Mercaptoethanol 1.0M
Azide 0.5% MES 100mM
NaCl 5.0M NaOH 0.1M
Brij-35 0.062% Brij-56 0.03%
Brij-58 0.016% NP-40 0.5%
CHAPS 5.0% CHAPSO 5.0%
SDS 0.016% Sucrose 10.0%
Citrate 200mM Tris 2.0M
EDTA 0.1M Glucose 1.0M
Glycine 0.1M Triton X-100 0.062%
Triton X-114 0.062% Triton X-405 0.25%
Guanidine HCl 3.5M Tween-20 0.031%
Tween-80 0.016% HCl 0.1M
KSCN 3.0M Urea 3.0M
Please refer to the product instructions for special notes and definitions
about compatibility tolerances.
C*e
27 楼
Lowry Assay
SDS可以有1%
SDS可以有1%
m*u
28 楼
借这话题问一下，提核蛋白。提取液含高浓度盐和10%glycerol。用BCA法干扰很大，有
别的办法没有
别的办法没有
z*h
29 楼
1. Lowry works
2. Bio-Rad has a detergent-compatiable bio-rad kit.
2. Bio-Rad has a detergent-compatiable bio-rad kit.
A*d
30 楼
http://www.expedeon.com/TECHNICALRESOURCES/PROTOCOLS/Methodsfor
according to this, BCA, UV and BradfordUltra are all good with detergent.
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
: 查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
: assay。
: 有别的办法吗？
: 测浓度做定量的WB。
: 谢谢。
according to this, BCA, UV and BradfordUltra are all good with detergent.
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
: 查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
: assay。
: 有别的办法吗？
: 测浓度做定量的WB。
: 谢谢。
A*d
31 楼
how do you quantify this then? Software?
w
【在 o*****r 的大作中提到】
: or try dot blot on WB membrane, then stain w/ coomassie blue, then compare w
: / control.
w
【在 o*****r 的大作中提到】
: or try dot blot on WB membrane, then stain w/ coomassie blue, then compare w
: / control.
A*d
32 楼
Sunny day already suggested, running a gel. this should always work.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 借这话题问一下，提核蛋白。提取液含高浓度盐和10%glycerol。用BCA法干扰很大，有
: 别的办法没有
【在 m*****u 的大作中提到】
: 借这话题问一下，提核蛋白。提取液含高浓度盐和10%glycerol。用BCA法干扰很大，有
: 别的办法没有
o*r
33 楼
measure the intensity of the dots, similar to the band of stained SDS gel or
WB on the film.
One software is Image J.
【在 A******d 的大作中提到】
: how do you quantify this then? Software?
:
: w
WB on the film.
One software is Image J.
【在 A******d 的大作中提到】
: how do you quantify this then? Software?
:
: w
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