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i*z
1
宝宝3岁了。平时在家很活泼,能说会道,而且很执着(就是那种不达到自己目的就一
直跟你磨的那种),还经常耍无赖
(不太讲道理)。但是一出去就特别胆小,什么都要妈妈。比如说,家里来客人,一个
两个还好,过半小时一小时,只要对
方知道怎么讨小朋友开心,就能熟落。但是要是客人一多,就一直粘着我,不管别人问
她啥,她就叫妈妈。出去就更糟糕
了。看到别的小朋友的玩具,想一起玩,自己是一定不会主动上去的,一定要妈妈去。
妈妈不去,就一直缠着。
最近一直吵着要去学芭蕾,今天下午带她去了。去的时候那个开心啊。可是一到教室门
口,就不肯进去了。说下次再去。我
说妈妈陪你呀,她也不肯。我陪她在里面看了一会,说我们一起过去吧,没想到,拉着
她的手过去,老师就问了一声,小朋
友你叫什么名字,她就开始大哭了。我那个窘啊。这已经是第三次了,每次都是她要去
,我们是从来不强迫她 的。
可能是因为她一直是我自己带大了。她从小就特别粘我,其他人谁都不要,到2岁以上
才好点。我们算是经常带她出去的,
平时周末总带她到处走(出去吃饭呀,参加各种活动啊),每年还带她出去旅游好几次。
大家给点建议吧,怎么能push一下她,让她open点?
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E*1
2
做蛋白蛋白interaction.蛋白A MW 255KD, 蛋白B MW 58KD,蛋白C MW 229KD.每个蛋白
有GFP, Flag等tag.Overexpression 做Co-IP.
先做A和B的相互作用,用protien A beads,IP后boil.先IP B, WB A.对照有(1)non-
transfected, (2)only transfected with A, 试验组(3)transfected with A and
B. IP后发现(1)没有A,(2)中有weak band of A,(3)中有strong band of A.
然后怀疑A蛋白太大,可能和beads或者antibody for IP有non-specific结合,所以(2
)中有weak band of A.之后change strategy: IP A, WB B.后来发现有同样情况。
请问下大家有没有发现蛋白和protein A beads non-specific结合的情况?
然后又换flag-crosslinked beads 做,IP B, WB A. 用Flag-peptide elute中只有B,
没有A,怀疑蛋白浓度太低。然后boil beads. 发现可以得到positive results: IP 后(
1)(2)中都没A,(3)中有A.推断A与这种beads没有non-specific binding.
然后又开始做A和C的interaction.用flag-crosslinked beads,boil.IP C, WB A.发现
了之前的non-specific binding 现象:(1)没有A,(2)中有weak band of A,(3)中
有strong band of A.这次蛋白浓度很高,因为换了中细胞系表达。现在推断可能用于
蛋白浓度太高,导致A和beads有non-specific binding.下一步准备用flag-peptide
elute,看会不会去除non-specific band.
大家有什么经验,或者意见,建议,请不吝赐教!
在此先谢谢啦!
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p*i
3

多做榜样,你先说,他慢慢学。

【在 i****z 的大作中提到】
: 宝宝3岁了。平时在家很活泼,能说会道,而且很执着(就是那种不达到自己目的就一
: 直跟你磨的那种),还经常耍无赖
: (不太讲道理)。但是一出去就特别胆小,什么都要妈妈。比如说,家里来客人,一个
: 两个还好,过半小时一小时,只要对
: 方知道怎么讨小朋友开心,就能熟落。但是要是客人一多,就一直粘着我,不管别人问
: 她啥,她就叫妈妈。出去就更糟糕
: 了。看到别的小朋友的玩具,想一起玩,自己是一定不会主动上去的,一定要妈妈去。
: 妈妈不去,就一直缠着。
: 最近一直吵着要去学芭蕾,今天下午带她去了。去的时候那个开心啊。可是一到教室门
: 口,就不肯进去了。说下次再去。我

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m*5
4
照你的说法,其实你的实验已经没问题了,因为ip B能拉下strong A band
Negative control中有背景太正常了
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m*a
5
我女儿以前也是这样。但经过近两年的daycare锻炼,现在已经非常大方了。我觉得还
是多带出去,多多锻炼,慢慢就开朗大方起来。
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g*5
6
yes, control sometime have ghost bands. and post a pic here?
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i*z
7
看来还是努力不够。只是我耐心不够,有时候实在是受不了。要坚持!!!
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W*7
8
1)是不必要的,2)应该换成B的tag载体跟A共转(别的组也一样,要有空载体的)
实验你可以先用beads pre-incubate一下,最主要的是降低你的input,我个人的经验
是如果你用1mg以上的input,什么都是阳性的。自己摸索几次看看多少合适你的实验,
因为转染效率不一样,我也不好说多少是最好的,但是一般都控制到500ug一下吧。
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w*t
9
我也是一个人在家带孩子,怕出现楼主这样的情况,现在我每天至少带孩子出门一趟,
主要是去人多的地方,然后就是,我见到带孩子的都主动搭话,也教孩子打招呼,家里
来客人的时候,要求客人们都抱抱孩子,所以孩子至今还不认生。还有就是,在家的妈
妈其实可以找本地的moms meet up,多跟人接触,我这里的meetup就有一点不好,全是
金发白人娃
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W*n
10
同意。我家儿子也害羞,上课不主动发言。有次家长被邀请听课,每次老师向家长提问
,我都举手回答。就是让儿子知道妈妈不仅要求他,自己也是这样做的。

【在 p******i 的大作中提到】
:
: 多做榜样,你先说,他慢慢学。

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o*y
11
课之前可以先说说上课的事情,如上课应该干什么,老师、她应该在一起学习,妈妈在
旁边陪着,妈妈希望她如何等等。课后也多鼓励,多表扬。
还有就是得多出去,多参加活动,多鼓励她。
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i*z
12
她的问题是,去之前,都跟她说得好好的(比如上什么课,妈妈可以不可以陪等等),
自己也表示很有兴趣,但是去了,就
死活不肯进去。之后就是很长时间什么课程都不愿意去。我们的原则是,一般不强迫她
去上课的,尽量多带她出去走走。不
过至今为止没觉得有什么改善。哎,头疼。

【在 o******y 的大作中提到】
: 课之前可以先说说上课的事情,如上课应该干什么,老师、她应该在一起学习,妈妈在
: 旁边陪着,妈妈希望她如何等等。课后也多鼓励,多表扬。
: 还有就是得多出去,多参加活动,多鼓励她。

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