请问各位cloning高手# Biology - 生物学
u*a
1 楼
老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
地方有卖的...
不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
价格比local店便宜100多.
地方有卖的...
不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
价格比local店便宜100多.
j*l
2 楼
如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
f*m
3 楼
amazon overnight shipping. no tax
【在 u******a 的大作中提到】
: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
: 地方有卖的...
: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
: 价格比local店便宜100多.
【在 u******a 的大作中提到】
: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
: 地方有卖的...
: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
: 价格比local店便宜100多.
j*x
4 楼
如果质粒不特别大的话，感觉比较简单的策略就是NEB的突变策略。
在想删除的位点两侧设计“背靠背”引物（必须5'端磷酸化修饰），把你需要替换的序
列设计在引物上。扩增整个质粒，PCR产物就是线性化的目的质粒序列，然后self-
ligation即可。
,
【在 j***l 的大作中提到】
: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
在想删除的位点两侧设计“背靠背”引物（必须5'端磷酸化修饰），把你需要替换的序
列设计在引物上。扩增整个质粒，PCR产物就是线性化的目的质粒序列，然后self-
ligation即可。
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【在 j***l 的大作中提到】
: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
l*e
5 楼
如果900加税可以的话，这个还不错。
http://www.microcenter.com/single_product_results.phtml?product
http://www.microcenter.com/single_product_results.phtml?product
n*e
6 楼
这个不难，用overlapping PCR，先做两段PCR产物含有SP6的，再融合一块，酶切后
进入同样切过的质粒。需要订4个引物，两端两个，中间含有SP6的两个。两端酶切位点
选择片段不长不短，几百个bp合适PCR的就好。
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【在 j***l 的大作中提到】
: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
进入同样切过的质粒。需要订4个引物，两端两个，中间含有SP6的两个。两端酶切位点
选择片段不长不短，几百个bp合适PCR的就好。
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【在 j***l 的大作中提到】
: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
a*t
7 楼
MC
【在 u******a 的大作中提到】
: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
: 地方有卖的...
: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
: 价格比local店便宜100多.
【在 u******a 的大作中提到】
: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
: 地方有卖的...
: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
: 价格比local店便宜100多.
o*r
8 楼
quikchange multi sites
,
【在 j***l 的大作中提到】
: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
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【在 j***l 的大作中提到】
: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,
: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
u*a
9 楼
是很好, 可惜我妈不用mac...
【在 l*******e 的大作中提到】
: 如果900加税可以的话，这个还不错。
: http://www.microcenter.com/single_product_results.phtml?product
【在 l*******e 的大作中提到】
: 如果900加税可以的话，这个还不错。
: http://www.microcenter.com/single_product_results.phtml?product
C*m
10 楼
en, good one. 用 InFusion，引物就不用磷酸化了，两个引物就可以了。
【在 j****x 的大作中提到】
: 如果质粒不特别大的话，感觉比较简单的策略就是NEB的突变策略。
: 在想删除的位点两侧设计“背靠背”引物（必须5'端磷酸化修饰），把你需要替换的序
: 列设计在引物上。扩增整个质粒，PCR产物就是线性化的目的质粒序列，然后self-
: ligation即可。
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【在 j****x 的大作中提到】
: 如果质粒不特别大的话，感觉比较简单的策略就是NEB的突变策略。
: 在想删除的位点两侧设计“背靠背”引物（必须5'端磷酸化修饰），把你需要替换的序
: 列设计在引物上。扩增整个质粒，PCR产物就是线性化的目的质粒序列，然后self-
: ligation即可。
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u*a
11 楼
更新一下. 发现microcenter明显便宜, 逛店的时候无聊google了一下microcenter,前
段时间竟然有不到1k的13寸128g ssd mba么? 太神奇了.
不过女人买电脑主要还是看外型. 最后还是在bestbuy买的.
【在 u******a 的大作中提到】
: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
: 地方有卖的...
: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
: 价格比local店便宜100多.
段时间竟然有不到1k的13寸128g ssd mba么? 太神奇了.
不过女人买电脑主要还是看外型. 最后还是在bestbuy买的.
【在 u******a 的大作中提到】
: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么
: 地方有卖的...
: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的
: 价格比local店便宜100多.
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