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碰到这种老板怎么办
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碰到这种老板怎么办# Biology - 生物学
g*j
1
连续几个phone interview都感觉不好, 已经被据了两个了, 艾, 如果没interview还可
以怪市场, 有interview搞不定就只能怪自己了, 被打击死啊. 都怪自己太水了....
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h*n
2
最近查了credit report, 发现最久的AMEX信用卡被cancel了。这张卡多年没有用了,
可我并没有主动让银行关卡,这个应该怎么办?和AMEX打电话argue?
谢谢。
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s*r
3
☆─────────────────────────────────────☆
QuickTime (;)))))))) 于 (Mon Jul 7 00:39:32 2008) 提到:
开个太阳能汽车应该不错
☆─────────────────────────────────────☆
chernobyl (小水葱 golden playboy,金童玉女之金童) 于 (Mon Jul 7 00:39:52 2008) 提到:


☆─────────────────────────────────────☆
meigancai (梅干菜) 于 (Mon Jul 7 00:41:42 2008) 提到:
谁说没有?
☆─────────────────────────────────────☆
sdlx (sdlx) 于 (Mon Jul 7 00:41:47 2008) 提到:
you need to spend 25 hours to reach your office.
since each car will be 25x big
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c*d
4
我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
好的办法就是
做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
directed
mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
己做克
隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?
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W*N
5
自己总结一下经验教训,work on it ba

【在 g***j 的大作中提到】
: 连续几个phone interview都感觉不好, 已经被据了两个了, 艾, 如果没interview还可
: 以怪市场, 有interview搞不定就只能怪自己了, 被打击死啊. 都怪自己太水了....

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P*k
6
你有什么理由argue, move on吧
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e*s
7
我老板也不喜欢那个Kit。
一个点突变为什么要从提RNA重新开始?
两个建议,
用Kit,Sequence 整个vector.
通过PCR纠正,通常1-2轮PCR就好了,这样PCR的只是目标CDNA的区域了。如果能找到唯
一的internal site就更好了。

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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g*y
8
多总结教训吧,在面试中提高,呵呵,加油!

【在 g***j 的大作中提到】
: 连续几个phone interview都感觉不好, 已经被据了两个了, 艾, 如果没interview还可
: 以怪市场, 有interview搞不定就只能怪自己了, 被打击死啊. 都怪自己太水了....

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p*x
9
call them and ask for reinstate.

【在 h*****n 的大作中提到】
: 最近查了credit report, 发现最久的AMEX信用卡被cancel了。这张卡多年没有用了,
: 可我并没有主动让银行关卡,这个应该怎么办?和AMEX打电话argue?
: 谢谢。

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m*5
10
从早上提RNA,下午逆转录,晚上pcr上走人,第二天早上收货……不需要多少时间啊
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s*n
11
得到锻炼的机会,有了提高的可能
多好~~

【在 g***j 的大作中提到】
: 连续几个phone interview都感觉不好, 已经被据了两个了, 艾, 如果没interview还可
: 以怪市场, 有interview搞不定就只能怪自己了, 被打击死啊. 都怪自己太水了....

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l*8
12
借楼问下大牛,第一张卡不用又不想被cancel的话,一般多久用一次才没问题呀?
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z*i
13


【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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s*s
14
面试前先找人帮你pre-interview吧。bless!
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m*8
15
借楼问下反正不用,cancel不是很好吗?
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z*i
16
可以换一种方法做突变,只针对CDS做PCR, 两次PCR就可以了。

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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t*9
17
多总结经验吧,我也一样,每次都觉得面得不好,但都没有吸取过经验教训,不应该亚
~~
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b*n
18
很容易啊,还是突变(=表示cDNA部分,*表示突变位点)
-> =========================
-*-> 两对引物,两轮PCR,(第二轮用引物对->和克隆回原来载体,测序cDNA部分就行
不过我还是觉得抽RNA反转录可能快点(如果别人有现成的cDNA那就更快了)

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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f*r
19
没有interview的都快郁闷的不行了。。
:( :(
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j*x
20
1. 突变位点两端找两个最近的酶切位点,site directed mutagenesis(QuikChange
method)之后把这个片段切下来替换原来的质粒上的错误序列。测序验证这个片段排除
引入新突变的可能性。
2. Clonetech Transformer Site-Directed Mutagenesis strategy, PCR free method
,所以基本不必担心会引入新突变的问题。
BTW,就算vector因为太长引入了新突变,关系很大吗?cDNA克隆没事不就完了?

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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c*d
21
前面还有杀老鼠(还是特殊发育期的老鼠,我得等老鼠),后面有pcr产物胶提,放载
体里。其他的
跟突变pcr差不多。
突变pcr呢只要做个pcr,后面transformation什么的都一样。
时间多一些,步骤多一些,出错机会就会多一些。关键是不知道这个片段是不是容易
pcr出来。

【在 m******5 的大作中提到】
: 从早上提RNA,下午逆转录,晚上pcr上走人,第二天早上收货……不需要多少时间啊
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n*w
22
我觉得quickchange挺好使的。
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a*a
23
这种sb怎么当上老板的?

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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s*9
24
My mentor will never give such a detailed suggestion. As long as you get
can the right clone with proper control, he is fine with any resolution.

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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b*H
25
SOEing

【在 z********i 的大作中提到】
: 可以换一种方法做突变,只针对CDS做PCR, 两次PCR就可以了。
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c*d
26
我从前的老板是这样的,现在这个技术上不是大牛还喜欢控制一切细节,凡有未经他同
意的改动都会让他勃然大怒。所以我的问题是碰到这样的老板怎么办。

【在 s****9 的大作中提到】
: My mentor will never give such a detailed suggestion. As long as you get
: can the right clone with proper control, he is fine with any resolution.

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c*d
27
谢谢大家的建议,我觉得提的这些技术都很好使,应该都可以解决我的问题。有时候觉
得做research的一个乐趣在解决问题,而一个痛苦则在于一定要用一个我不喜欢的方式
去解决(而且还不一定能解决)。
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y*i
28
不能在突变位点两边找到适当的位点切一下么?怎么都不需要把8kb都pcr吧。
我要是你就偷偷做了,一下子就完成的cloning。

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

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i*l
29
对这样的老板 你就别总告诉他这么具体的细节 没有细节 他也无从 MicroManagement了
自己闷声做呗 做出来了 把结果Show给他就完了

【在 c********d 的大作中提到】
: 我从前的老板是这样的,现在这个技术上不是大牛还喜欢控制一切细节,凡有未经他同
: 意的改动都会让他勃然大怒。所以我的问题是碰到这样的老板怎么办。

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c*d
30
从前可以,现在不行了,他会要看实验记录,对于不听从他指挥的做法定性为
communication有严重问题,performance不好。很难相处啊。都想马上不干了,但是下
家还没找到呢。版上有人要没?

【在 y***i 的大作中提到】
: 不能在突变位点两边找到适当的位点切一下么?怎么都不需要把8kb都pcr吧。
: 我要是你就偷偷做了,一下子就完成的cloning。

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a*u
31
请问PCR扩增8kb的一个基因是什么难度?
还是说没有普遍性?因基因而异?
我们实验室想以人或小鼠的cDNA为模板,扩增一个大约8kb的基因,导师觉得一次扩增
这么长的片段不太可能成功。确实,我们试了分段P,结果P 4000bp的其中片段都不成
功。我们用的是LA Taq。
请问对cDNA的反转录过程有什么特别要求吗?我们用了oligo和random引物,takara的
试剂盒。
另外如果买相应克隆的话要4000美元,比较不能接受。
大家遇到这种情况是怎么解决的呢?
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m*5
32
8kb?? 是从genomic DNA还是cDNA p?

【在 a*******u 的大作中提到】
: 请问PCR扩增8kb的一个基因是什么难度?
: 还是说没有普遍性?因基因而异?
: 我们实验室想以人或小鼠的cDNA为模板,扩增一个大约8kb的基因,导师觉得一次扩增
: 这么长的片段不太可能成功。确实,我们试了分段P,结果P 4000bp的其中片段都不成
: 功。我们用的是LA Taq。
: 请问对cDNA的反转录过程有什么特别要求吗?我们用了oligo和random引物,takara的
: 试剂盒。
: 另外如果买相应克隆的话要4000美元,比较不能接受。
: 大家遇到这种情况是怎么解决的呢?

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A*d
33
这老板台可怕了
你是薄厚?快照下家

【在 c********d 的大作中提到】
: 从前可以,现在不行了,他会要看实验记录,对于不听从他指挥的做法定性为
: communication有严重问题,performance不好。很难相处啊。都想马上不干了,但是下
: 家还没找到呢。版上有人要没?

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w*n
34
用质量好的酶,8kb完全没问题,我做过几十个这样的突变纠正。

【在 c********d 的大作中提到】
: 我们实验室买了个cDNA克隆,中间有个点突变,没有别的公司卖正确克隆的。我觉得最
: 好的办法就是
: 做个site directed mutagenesis把这个点突变改回正常。老板非常不信任site
: directed
: mutagenesis,说是vector太长了(8kb的样子)会引入新的突变,要我从提RNA开始自
: 己做克
: 隆。这得多多少工作,我怎么也说服不了他。大家说碰到这种情况我怎么办?

avatar
b*n
35
nod,Stratagene PfuUltra DNA polymerase 是个很好的选择

【在 w******n 的大作中提到】
: 用质量好的酶,8kb完全没问题,我做过几十个这样的突变纠正。
avatar
j*x
36
问题不在于好酶是否能够纠正突变,而在于你如何排除引入新的突变。即便理论上这样的
几率不大,但是为了确保万无一失,一般还是需要全长测序验证的。8kb,至少也是10
个反
应,时间,成本,都是问题了

【在 w******n 的大作中提到】
: 用质量好的酶,8kb完全没问题,我做过几十个这样的突变纠正。
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j*x
37
laf...
看了后面的帖子才知道你压根就没用过这个酶,你也真靠谱...

【在 b******n 的大作中提到】
: nod,Stratagene PfuUltra DNA polymerase 是个很好的选择
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b*n
38
用过pfuUltra,但是新出来一个pfuUltra和fusion的结合体心里没谱

【在 j****x 的大作中提到】
: laf...
: 看了后面的帖子才知道你压根就没用过这个酶,你也真靠谱...

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l*8
39
赶紧找,我以前也碰到过这种沙蔽, 很难交流,什么都想控制。

【在 c********d 的大作中提到】
: 从前可以,现在不行了,他会要看实验记录,对于不听从他指挥的做法定性为
: communication有严重问题,performance不好。很难相处啊。都想马上不干了,但是下
: 家还没找到呢。版上有人要没?

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