p*i
2 楼
我用的是CAMKII Cre 老鼠与我的flox老鼠杂交，希望只在forbrain区knockdown我的
gene. 目前得到了Cre Hetero/flox hetero还有Cre homo/flox hetero.
请问如何检测knock down efficiency呢？
1. take forbrain, extract genome, RT PCR
2. perfuse brain, immunostain brain sections with antibody against my gene
of interest. Can I costain with anti Cre antibody? If so, where can I buy a
good one?
3. DAB staining brain sections using antibody against my gene of interest.
请问一般Cre 的knock down efficiency 是多高？ Cre homo or hetero 会有很大区别
吗？
谢谢
gene. 目前得到了Cre Hetero/flox hetero还有Cre homo/flox hetero.
请问如何检测knock down efficiency呢？
1. take forbrain, extract genome, RT PCR
2. perfuse brain, immunostain brain sections with antibody against my gene
of interest. Can I costain with anti Cre antibody? If so, where can I buy a
good one?
3. DAB staining brain sections using antibody against my gene of interest.
请问一般Cre 的knock down efficiency 是多高？ Cre homo or hetero 会有很大区别
吗？
谢谢
c*2
3 楼
不对啊， 应该就这么重， 今天去BB， 结果晚了， 到了已经开门了， sales
说已经发完ticket了， 看见20来口人排队在交钱领机器， 羡慕嫉妒恨啊， 同时发现
这个pad的盒子确实不大， 好像也不重 看起来就和letter的一盒打印纸大小差不多，
当然重量也许还能轻一些。。。
说已经发完ticket了， 看见20来口人排队在交钱领机器， 羡慕嫉妒恨啊， 同时发现
这个pad的盒子确实不大， 好像也不重 看起来就和letter的一盒打印纸大小差不多，
当然重量也许还能轻一些。。。
l*i
4 楼
一般不搞cre homo的。一个cre就足够了
efficiency要用cre;flox/flox的老鼠做
a
【在 p***i 的大作中提到】
: 我用的是CAMKII Cre 老鼠与我的flox老鼠杂交，希望只在forbrain区knockdown我的
: gene. 目前得到了Cre Hetero/flox hetero还有Cre homo/flox hetero.
: 请问如何检测knock down efficiency呢？
: 1. take forbrain, extract genome, RT PCR
: 2. perfuse brain, immunostain brain sections with antibody against my gene
: of interest. Can I costain with anti Cre antibody? If so, where can I buy a
: good one?
: 3. DAB staining brain sections using antibody against my gene of interest.
: 请问一般Cre 的knock down efficiency 是多高？ Cre homo or hetero 会有很大区别
: 吗？
efficiency要用cre;flox/flox的老鼠做
a
【在 p***i 的大作中提到】
: 我用的是CAMKII Cre 老鼠与我的flox老鼠杂交，希望只在forbrain区knockdown我的
: gene. 目前得到了Cre Hetero/flox hetero还有Cre homo/flox hetero.
: 请问如何检测knock down efficiency呢？
: 1. take forbrain, extract genome, RT PCR
: 2. perfuse brain, immunostain brain sections with antibody against my gene
: of interest. Can I costain with anti Cre antibody? If so, where can I buy a
: good one?
: 3. DAB staining brain sections using antibody against my gene of interest.
: 请问一般Cre 的knock down efficiency 是多高？ Cre homo or hetero 会有很大区别
: 吗？
w*u
5 楼
就是纸，我已近收到了。。。。
D*a
6 楼
1. take forbrain, extract genome, quantitative PCR
2 anti 目标蛋白 和 anti Cre antibody是我正想做的，见有paper做过，我们实验室
没有先例，尤其我们是膜蛋白更难搞。尤其是anti Cre antibody，版上用过的也告诉
我一声吧。
3 可以用cre杂交mice with reporter gene，比如lac z或者 某FP。
2 anti 目标蛋白 和 anti Cre antibody是我正想做的，见有paper做过，我们实验室
没有先例，尤其我们是膜蛋白更难搞。尤其是anti Cre antibody，版上用过的也告诉
我一声吧。
3 可以用cre杂交mice with reporter gene，比如lac z或者 某FP。
c*2
7 楼
你是开玩笑还是说真的啊？？？
是什么纸？？？给个片片啊。。。
【在 w*****u 的大作中提到】
: 就是纸，我已近收到了。。。。
是什么纸？？？给个片片啊。。。
【在 w*****u 的大作中提到】
: 就是纸，我已近收到了。。。。
p*i
8 楼
但是我听说cre的recombination的效率最多只有60%， 请问是这样吗？如果是的话，那
么cre homo是否应该比册cre hetero更高效呢？
谢谢
【在 l****i 的大作中提到】
: 一般不搞cre homo的。一个cre就足够了
: efficiency要用cre;flox/flox的老鼠做
:
: a
么cre homo是否应该比册cre hetero更高效呢？
谢谢
【在 l****i 的大作中提到】
: 一般不搞cre homo的。一个cre就足够了
: efficiency要用cre;flox/flox的老鼠做
:
: a
k*y
9 楼
我也才收到。哦欧欧
D*a
10 楼
看具体哪个cre。
【在 p***i 的大作中提到】
: 但是我听说cre的recombination的效率最多只有60%， 请问是这样吗？如果是的话，那
: 么cre homo是否应该比册cre hetero更高效呢？
: 谢谢
【在 p***i 的大作中提到】
: 但是我听说cre的recombination的效率最多只有60%， 请问是这样吗？如果是的话，那
: 么cre homo是否应该比册cre hetero更高效呢？
: 谢谢
z*a
11 楼
打印纸
HP都是分开寄的，当然是真的
【在 c*******2 的大作中提到】
: 你是开玩笑还是说真的啊？？？
: 是什么纸？？？给个片片啊。。。
h*n
12 楼
you should compare Cre Hetero/flox homo and wt/flox homo
do not use Cre homo.
do not use Cre homo.
P*D
13 楼
我觉得他指的是为了用coupon买的那个作为filler的打印纸。
【在 c*******2 的大作中提到】
: 你是开玩笑还是说真的啊？？？
: 是什么纸？？？给个片片啊。。。
【在 c*******2 的大作中提到】
: 你是开玩笑还是说真的啊？？？
: 是什么纸？？？给个片片啊。。。
p*i
14 楼
Can I ask why?
【在 h*****n 的大作中提到】
: you should compare Cre Hetero/flox homo and wt/flox homo
: do not use Cre homo.
【在 h*****n 的大作中提到】
: you should compare Cre Hetero/flox homo and wt/flox homo
: do not use Cre homo.
r*g
15 楼
lol 别filler到了机子咳嗽了……
【在 P****D 的大作中提到】
: 我觉得他指的是为了用coupon买的那个作为filler的打印纸。
【在 P****D 的大作中提到】
: 我觉得他指的是为了用coupon买的那个作为filler的打印纸。
D*a
16 楼
因为一般来说cre在基因组里面是瞎插的，有破坏其他基因功能的可能性。所以
hemizygote没事，但是homo的cre，有可能就会有phenotype了。
【在 p***i 的大作中提到】
: Can I ask why?
hemizygote没事，但是homo的cre，有可能就会有phenotype了。
【在 p***i 的大作中提到】
: Can I ask why?
h*n
17 楼
right
【在 D*a 的大作中提到】
: 因为一般来说cre在基因组里面是瞎插的，有破坏其他基因功能的可能性。所以
: hemizygote没事，但是homo的cre，有可能就会有phenotype了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 因为一般来说cre在基因组里面是瞎插的，有破坏其他基因功能的可能性。所以
: hemizygote没事，但是homo的cre，有可能就会有phenotype了。
s*g
18 楼
how to know if the Cre is homo or hetero. My understanding is that Cre is
randomly inserted in genome even potentially with multiple copies.
Is really a way to know if it is hetero or homo?
randomly inserted in genome even potentially with multiple copies.
Is really a way to know if it is hetero or homo?
D*a
19 楼
homo or hetero是指是不是占据等位基因的两个位点，跟copy数没关系。主要是cre的
插入是否破坏其他基因的问题，跟cre的毒性是两个概念。
【在 s*********g 的大作中提到】
: how to know if the Cre is homo or hetero. My understanding is that Cre is
: randomly inserted in genome even potentially with multiple copies.
: Is really a way to know if it is hetero or homo?
插入是否破坏其他基因的问题，跟cre的毒性是两个概念。
【在 s*********g 的大作中提到】
: how to know if the Cre is homo or hetero. My understanding is that Cre is
: randomly inserted in genome even potentially with multiple copies.
: Is really a way to know if it is hetero or homo?
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