i*0
2 楼
谁说说
j*c
3 楼
皮实
f*9
4 楼
有人做过deep sequence, 有没有什么经验可以介绍一下啊
我要做两组样本RNA表达的差异。有没有做过的前辈指点一下啊
多谢
我要做两组样本RNA表达的差异。有没有做过的前辈指点一下啊
多谢
l*s
5 楼
好气派的大门,这是哪里啊?冰天雪地的
s*y
8 楼
如果只是RNA表达的差异上不一定现在要跳deep sequence,比起microarry来说在一般
模式生物上没有太大优势。但是缺点是如果同样一组做三个重复价钱要贵不少(bar
coding 还是比较麻烦而且又多一层bias)。而且现在没有太好的分析软件,如果没有
一定的command line的经验的话分析起来还是比较费劲的。
deep sequence还是在非模式生物和一些比较特定的实验设计(alternative splicing,
allele specific expresion,etc)下优势比较明显吧。
just my two cents.
模式生物上没有太大优势。但是缺点是如果同样一组做三个重复价钱要贵不少(bar
coding 还是比较麻烦而且又多一层bias)。而且现在没有太好的分析软件,如果没有
一定的command line的经验的话分析起来还是比较费劲的。
deep sequence还是在非模式生物和一些比较特定的实验设计(alternative splicing,
allele specific expresion,etc)下优势比较明显吧。
just my two cents.
p*a
9 楼
Living Room
B*r
10 楼
1994 What's Eating Gilbert Grape
2005 The Aviator
2007 Blood Diamond
2014 The Wolf of Wall Street
2005 The Aviator
2007 Blood Diamond
2014 The Wolf of Wall Street
s*s
12 楼
microarry做出来的数据最后还要qPCR验证,如果基因多的话费时费事费钱。
RNA-seq和qPCR基本上完全吻合,做出来数据不需要validate, 而且不同实验室
不同时间做出来的数据也方便比较
splicing,
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果只是RNA表达的差异上不一定现在要跳deep sequence,比起microarry来说在一般
: 模式生物上没有太大优势。但是缺点是如果同样一组做三个重复价钱要贵不少(bar
: coding 还是比较麻烦而且又多一层bias)。而且现在没有太好的分析软件,如果没有
: 一定的command line的经验的话分析起来还是比较费劲的。
: deep sequence还是在非模式生物和一些比较特定的实验设计(alternative splicing,
: allele specific expresion,etc)下优势比较明显吧。
: just my two cents.
RNA-seq和qPCR基本上完全吻合,做出来数据不需要validate, 而且不同实验室
不同时间做出来的数据也方便比较
splicing,
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果只是RNA表达的差异上不一定现在要跳deep sequence,比起microarry来说在一般
: 模式生物上没有太大优势。但是缺点是如果同样一组做三个重复价钱要贵不少(bar
: coding 还是比较麻烦而且又多一层bias)。而且现在没有太好的分析软件,如果没有
: 一定的command line的经验的话分析起来还是比较费劲的。
: deep sequence还是在非模式生物和一些比较特定的实验设计(alternative splicing,
: allele specific expresion,etc)下优势比较明显吧。
: just my two cents.
p*a
13 楼
Dining Room
c*o
17 楼
不错,包子包子
p*a
20 楼
Stairs to the second floor
p*a
22 楼
Family room
f*9
23 楼
多谢楼上各位的建议,我也感觉这个应用在deep seq上没有太多优势。只是现在
microarray发文章很难。所以考虑deep seq。并且新技术应该比较新颖吧。价钱似乎差
不太多。如果deep seq不需要triplicate in seq
microarray发文章很难。所以考虑deep seq。并且新技术应该比较新颖吧。价钱似乎差
不太多。如果deep seq不需要triplicate in seq
p*a
24 楼
Kitchen and Nook
p*a
26 楼
Deck
p*a
28 楼
Second floor
p*a
30 楼
Garage
j*x
31 楼
你说的没有错,RNA-seq定量确实表现很不错,否则也不会有取代array的大趋势,但是
也要看平台因素尤其还有人工,sample/library preparation 做的不够好的话出现不
稳定或者差异非常常见。我们的一个合作实验室同一组样本分给两个公司分别做deep-
seq,部分结果的差异有+-200%以上,很头大。
事实上paper中几乎所有高通量实验结果大多都会用低通量传统方法的验证,尤其对于
关键结果。比如我用定量蛋白质组方法得到的结果,还是必须得跑WB,虽然大家都很清
楚质谱的结果无论灵敏度还是分辨率都好过勉强算半定量的WB,但是这个“验证”还是
非做不可。
【在 s******s 的大作中提到】
: 我们实验室原来用array和qpcr,后来用illumina做过很多的seq,发现和qpcr几乎完全
: 吻合
:
: PE
也要看平台因素尤其还有人工,sample/library preparation 做的不够好的话出现不
稳定或者差异非常常见。我们的一个合作实验室同一组样本分给两个公司分别做deep-
seq,部分结果的差异有+-200%以上,很头大。
事实上paper中几乎所有高通量实验结果大多都会用低通量传统方法的验证,尤其对于
关键结果。比如我用定量蛋白质组方法得到的结果,还是必须得跑WB,虽然大家都很清
楚质谱的结果无论灵敏度还是分辨率都好过勉强算半定量的WB,但是这个“验证”还是
非做不可。
【在 s******s 的大作中提到】
: 我们实验室原来用array和qpcr,后来用illumina做过很多的seq,发现和qpcr几乎完全
: 吻合
:
: PE
m*T
33 楼
关键是现在的high throughput sequencing从library的制备,到sequencing本身再加
上后期的data处理都没有golden standard,错误率受各种因素的影响比较大,所以没
有其它validation方法,数据的准确性还不足以让大多数人信服。如何有效提高准确性
是整个NGS市场(包括array)面临的一个很大挑战。
上后期的data处理都没有golden standard,错误率受各种因素的影响比较大,所以没
有其它validation方法,数据的准确性还不足以让大多数人信服。如何有效提高准确性
是整个NGS市场(包括array)面临的一个很大挑战。
s*s
35 楼
可能是我们实验室tech水品比较高,做的熟练质量都很好。
【在 j****x 的大作中提到】
: 你说的没有错,RNA-seq定量确实表现很不错,否则也不会有取代array的大趋势,但是
: 也要看平台因素尤其还有人工,sample/library preparation 做的不够好的话出现不
: 稳定或者差异非常常见。我们的一个合作实验室同一组样本分给两个公司分别做deep-
: seq,部分结果的差异有+-200%以上,很头大。
: 事实上paper中几乎所有高通量实验结果大多都会用低通量传统方法的验证,尤其对于
: 关键结果。比如我用定量蛋白质组方法得到的结果,还是必须得跑WB,虽然大家都很清
: 楚质谱的结果无论灵敏度还是分辨率都好过勉强算半定量的WB,但是这个“验证”还是
: 非做不可。
【在 j****x 的大作中提到】
: 你说的没有错,RNA-seq定量确实表现很不错,否则也不会有取代array的大趋势,但是
: 也要看平台因素尤其还有人工,sample/library preparation 做的不够好的话出现不
: 稳定或者差异非常常见。我们的一个合作实验室同一组样本分给两个公司分别做deep-
: seq,部分结果的差异有+-200%以上,很头大。
: 事实上paper中几乎所有高通量实验结果大多都会用低通量传统方法的验证,尤其对于
: 关键结果。比如我用定量蛋白质组方法得到的结果,还是必须得跑WB,虽然大家都很清
: 楚质谱的结果无论灵敏度还是分辨率都好过勉强算半定量的WB,但是这个“验证”还是
: 非做不可。
s*s
39 楼
如果你发现几十个cell line, 各有几十个基因拿出来qpcr做出来没什么区别。
说明至少在自己实验室里,这两个技术是等价的,验证当然就没啥意义了,也就是
糊弄reviewer. 要验证也是从另一个角度,比如蛋白角度。
tech
IP
【在 j****x 的大作中提到】
: 结果吻合的好,那tech水品比较高是自然的(而部分结果吻合不好也未必就意味着tech
: 技术有问题),但是这和你需不需要验证是两码事,好比你WB手法好结果稳定,但是不
: 等于你就可以不需要重复;你Y2H技术高灵敏度特异性俱佳,也不意味着你就不需要IP
: 等等其他实验来验证PPI。
: 高通量实验需要经典方法来重复验证,这基本是业内的“潜规则”,其实没什么可说的
: ,越是广泛运用的技术这样的要求越高(最初期的microarray的结果不需要qPCR也一样
: 发,广泛运用之后就不一样了)
说明至少在自己实验室里,这两个技术是等价的,验证当然就没啥意义了,也就是
糊弄reviewer. 要验证也是从另一个角度,比如蛋白角度。
tech
IP
【在 j****x 的大作中提到】
: 结果吻合的好,那tech水品比较高是自然的(而部分结果吻合不好也未必就意味着tech
: 技术有问题),但是这和你需不需要验证是两码事,好比你WB手法好结果稳定,但是不
: 等于你就可以不需要重复;你Y2H技术高灵敏度特异性俱佳,也不意味着你就不需要IP
: 等等其他实验来验证PPI。
: 高通量实验需要经典方法来重复验证,这基本是业内的“潜规则”,其实没什么可说的
: ,越是广泛运用的技术这样的要求越高(最初期的microarray的结果不需要qPCR也一样
: 发,广泛运用之后就不一样了)
j*x
41 楼
你也许没弄清楚什么是技术上的“等价”,如果你认为qPCR和RNA-seq就是“技术等价
”的话。至于说几十个cell line挑出几十个基因拿出来结果没有区别就可以认
定全部都没区别验证就是没有意义,这其中的严谨性态度和逻辑问题我不想再多说了
要说是糊弄reviewer,这太给力了,前面已经有很多朋友说了很多了我不重复了,
也许那些要求qPCR验证的reviewer都是外行找糊弄的,这当然也没啥,正常
【在 s******s 的大作中提到】
: 如果你发现几十个cell line, 各有几十个基因拿出来qpcr做出来没什么区别。
: 说明至少在自己实验室里,这两个技术是等价的,验证当然就没啥意义了,也就是
: 糊弄reviewer. 要验证也是从另一个角度,比如蛋白角度。
:
: tech
: IP
”的话。至于说几十个cell line挑出几十个基因拿出来结果没有区别就可以认
定全部都没区别验证就是没有意义,这其中的严谨性态度和逻辑问题我不想再多说了
要说是糊弄reviewer,这太给力了,前面已经有很多朋友说了很多了我不重复了,
也许那些要求qPCR验证的reviewer都是外行找糊弄的,这当然也没啥,正常
【在 s******s 的大作中提到】
: 如果你发现几十个cell line, 各有几十个基因拿出来qpcr做出来没什么区别。
: 说明至少在自己实验室里,这两个技术是等价的,验证当然就没啥意义了,也就是
: 糊弄reviewer. 要验证也是从另一个角度,比如蛋白角度。
:
: tech
: IP
m*T
43 楼
如果一个技术还没有成熟到那个地步,用不同技术来validate是再正常不过的了。我前
面提了,整个array和NGS还没有准确到足以让绝大多数人相信它的结果是完全准确的,
自然reviewer就少不了要求验证。
面提了,整个array和NGS还没有准确到足以让绝大多数人相信它的结果是完全准确的,
自然reviewer就少不了要求验证。
n*7
45 楼
没做过实验,只是好奇deep seq需要重复吗? 感觉重复就等于多了点coverage而已
splicing,
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果只是RNA表达的差异上不一定现在要跳deep sequence,比起microarry来说在一般
: 模式生物上没有太大优势。但是缺点是如果同样一组做三个重复价钱要贵不少(bar
: coding 还是比较麻烦而且又多一层bias)。而且现在没有太好的分析软件,如果没有
: 一定的command line的经验的话分析起来还是比较费劲的。
: deep sequence还是在非模式生物和一些比较特定的实验设计(alternative splicing,
: allele specific expresion,etc)下优势比较明显吧。
: just my two cents.
b*r
49 楼
我做reviewer的时候,关键data没有secondary method 去validate我一概批回
这个跟医院里护士打药前 要三查七对 是一个道理,不是说护士眼睛瞎了不认识药的牌
子计量
这个跟医院里护士打药前 要三查七对 是一个道理,不是说护士眼睛瞎了不认识药的牌
子计量
p*A
56 楼
looks like Missouri 400k?
a*8
59 楼
我们也在计划build这样的啊。写个攻略吧。
t*M
60 楼
最近几年的好像都是这种floorplan
nice
nice
r*q
62 楼
zan beautiful house!
gxgx!
gxgx!
k*0
63 楼
厨房也是木地板,会不会不好清洁 啊
q*p
65 楼
zan! so splendid!!!
v*a
66 楼
from the amount of snow in the picture, the date on the pic and also the ID
name. I guess LZ probably work for a pharmaceutical company in midwest, most
probably Eli Lilly in Indianapolis. The house probably cost around 400k in
the best school district in Indianapolis area.
name. I guess LZ probably work for a pharmaceutical company in midwest, most
probably Eli Lilly in Indianapolis. The house probably cost around 400k in
the best school district in Indianapolis area.
z*n
69 楼
新房的厨房里面为啥不做vent out 的hood呢?难道是外嫁的,不需要炒中国菜了?
u*r
75 楼
豪宅啊!喜欢你家的大厨房。
D*r
76 楼
很漂亮呀。恭喜。不show实际价格,能不能show个房子建造本身的价格?
不算地价的那个价格。
不算地价的那个价格。
M*8
77 楼
恭喜恭喜!
提个小建议,玄关餐厅的灯可以更好。
提个小建议,玄关餐厅的灯可以更好。
D*C
79 楼
看IP大概是MICHIGAN
c*8
85 楼
It's a very nice house.
I like it, it is my dream!
I like it, it is my dream!
n*D
87 楼
哇,真漂亮啊
f*l
89 楼
MO的一般学区这样大小的房子现在要不了400k,估计新房在300-350k之间。不过内装不
太像MO的新房啊。好学区就不说了,这么大应该至少奔500-600k了。
太像MO的新房啊。好学区就不说了,这么大应该至少奔500-600k了。
f*b
92 楼
赞豪宅
貌似窗很大,如果不是双层玻璃的话冬天取暖费会有点高
不过有壁炉的话好一点
楼主住进去了来报告一下吧
貌似窗很大,如果不是双层玻璃的话冬天取暖费会有点高
不过有壁炉的话好一点
楼主住进去了来报告一下吧
l*d
107 楼
也就是show房子,价钱就别showoff了
b*n
118 楼
拜托LS的各位别那么MEAN好不好,我看你们就是CLL的嫉妒.就算在密歇根,也有很贵的房
子.既然你们都看出来是PULTE的房子了,那到PULTE网站上看看价格不就知道了.应该也
能在ZILLOW上查到当地房子的价格吧.不要以为只要在扭约和加州房子就一定贵,不要以
为在密西根和西佛吉尼亚就一定便宜.哪都有有钱人,哪都有穷人.吃不到葡萄说葡萄酸
的都是LOSER
子.既然你们都看出来是PULTE的房子了,那到PULTE网站上看看价格不就知道了.应该也
能在ZILLOW上查到当地房子的价格吧.不要以为只要在扭约和加州房子就一定贵,不要以
为在密西根和西佛吉尼亚就一定便宜.哪都有有钱人,哪都有穷人.吃不到葡萄说葡萄酸
的都是LOSER
n*n
119 楼
l*d
121 楼
真逗,楼主发出来本来是想听听别人羡慕嫉妒的词儿,听到了又不乐意了。楼上的也搞
,吃不到葡萄就说葡萄酸的就是loser?合着大家都应该众口一词的唱赞美歌,就不是
loser了?
,吃不到葡萄就说葡萄酸的就是loser?合着大家都应该众口一词的唱赞美歌,就不是
loser了?
b*n
122 楼
房子的好坏是以价格来判断的吗?不管怎么样,没人会否认LZ的房子不好吧?
LZ能在MI找到工作,花50万买到好房子,那是人有本事,在扭约的没本事在MI找到工作,住
不上好房子,然后看到LZ贴房子的照片,就说什么"要是在MA,NJ肯定买不起"这样的话,不
是吃不到葡萄说葡萄酸的LOSER还能是什么?有本事你也到JOB MARKET很小的地方找个高
薪工作啊,然后也能住这么大的房子.在工作好找的地方有个工作也算不上什么值得炫耀
的.要真能买个跟LZ房子一样漂亮的大房子,那才算本事.即使这样,也充其量跟LZ在同样
的生活水平线上罢了.没可圈可点的地方.
LZ的房子就是很漂亮,说房子好有什么不对的,总对价格说三道四的有意思吗?在美国买
CK牛仔裤 50刀就能买到,在中国买同样的要1000多RMB,难道你就说中国买的那条比美国
买的好?
【在 l******d 的大作中提到】
: 50万不到,在纽约可不是便宜么
LZ能在MI找到工作,花50万买到好房子,那是人有本事,在扭约的没本事在MI找到工作,住
不上好房子,然后看到LZ贴房子的照片,就说什么"要是在MA,NJ肯定买不起"这样的话,不
是吃不到葡萄说葡萄酸的LOSER还能是什么?有本事你也到JOB MARKET很小的地方找个高
薪工作啊,然后也能住这么大的房子.在工作好找的地方有个工作也算不上什么值得炫耀
的.要真能买个跟LZ房子一样漂亮的大房子,那才算本事.即使这样,也充其量跟LZ在同样
的生活水平线上罢了.没可圈可点的地方.
LZ的房子就是很漂亮,说房子好有什么不对的,总对价格说三道四的有意思吗?在美国买
CK牛仔裤 50刀就能买到,在中国买同样的要1000多RMB,难道你就说中国买的那条比美国
买的好?
【在 l******d 的大作中提到】
: 50万不到,在纽约可不是便宜么
v*a
123 楼
呵呵,有些人会告诉你纽约生活如何如何洋派丰富,玉米地如何如何又土又无聊,于是
人家宁要浦西一张床,不要浦东一间房。其实这些人成天commute两三个小时,一年到
头也难得有一两次机会到mahattan逛逛。
【在 b*******n 的大作中提到】
: 房子的好坏是以价格来判断的吗?不管怎么样,没人会否认LZ的房子不好吧?
: LZ能在MI找到工作,花50万买到好房子,那是人有本事,在扭约的没本事在MI找到工作,住
: 不上好房子,然后看到LZ贴房子的照片,就说什么"要是在MA,NJ肯定买不起"这样的话,不
: 是吃不到葡萄说葡萄酸的LOSER还能是什么?有本事你也到JOB MARKET很小的地方找个高
: 薪工作啊,然后也能住这么大的房子.在工作好找的地方有个工作也算不上什么值得炫耀
: 的.要真能买个跟LZ房子一样漂亮的大房子,那才算本事.即使这样,也充其量跟LZ在同样
: 的生活水平线上罢了.没可圈可点的地方.
: LZ的房子就是很漂亮,说房子好有什么不对的,总对价格说三道四的有意思吗?在美国买
: CK牛仔裤 50刀就能买到,在中国买同样的要1000多RMB,难道你就说中国买的那条比美国
: 买的好?
人家宁要浦西一张床,不要浦东一间房。其实这些人成天commute两三个小时,一年到
头也难得有一两次机会到mahattan逛逛。
【在 b*******n 的大作中提到】
: 房子的好坏是以价格来判断的吗?不管怎么样,没人会否认LZ的房子不好吧?
: LZ能在MI找到工作,花50万买到好房子,那是人有本事,在扭约的没本事在MI找到工作,住
: 不上好房子,然后看到LZ贴房子的照片,就说什么"要是在MA,NJ肯定买不起"这样的话,不
: 是吃不到葡萄说葡萄酸的LOSER还能是什么?有本事你也到JOB MARKET很小的地方找个高
: 薪工作啊,然后也能住这么大的房子.在工作好找的地方有个工作也算不上什么值得炫耀
: 的.要真能买个跟LZ房子一样漂亮的大房子,那才算本事.即使这样,也充其量跟LZ在同样
: 的生活水平线上罢了.没可圈可点的地方.
: LZ的房子就是很漂亮,说房子好有什么不对的,总对价格说三道四的有意思吗?在美国买
: CK牛仔裤 50刀就能买到,在中国买同样的要1000多RMB,难道你就说中国买的那条比美国
: 买的好?
b*e
124 楼
lz 还有图吗很好看 呀
w*y
127 楼
在CA好区, 2-3M
L*n
128 楼
Pulte, Ryland 这类mass builder跟生产线一样印出来的房子。中等加些许UPGRADE吧
。
。
f*r
132 楼
some ppl r really disgusting.
if u do criticize here,u better show ur's here,too.
if u do criticize here,u better show ur's here,too.
A*0
133 楼
好漂亮啊
T*U
134 楼
半人高baseboard,铁栏杆,带窗户车库,豪宅标志。
l*e
137 楼
新房怎么看都是入眼的
m*r
138 楼
very nice
F*P
139 楼
挺不错的。窗户都很大,不过。。装窗帘老贵的了。。。
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