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Maxiprep problem
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Maxiprep problem# Biology - 生物学
l*e
1 楼
之前来版上问过15号上交的怎么25号还没信息，结果就发现签证系统出问题了，今天又
查了下，visa status是issued.timeline:15上交中信， 16号中信寄出，21号case
created, 30号issued. 还在等待的朋友们别心急。祝大家都顺利拿到签证。
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b*b
2 楼
傻子才相信主持人说的话不是故意的，在我看来完全就是故意的啊，她说自己关掉了视
频可谁能作证呢，开记者会还说是遭遇他人非法盗取视频及恶意传播，好想说怎么那么
巧主持人脱衣服的这段发生视频被窃取，观众都不是傻子的。
现在很多主播什么办法都能想出来，只要能提高自己的支持率，似乎做什么事情都是可
以的，只是看她们敢不敢罢了，之前斗鱼还直播造人了，这难道不能说是其故意的，只
是为了引来更多人的关注？主播人越来越多，似乎恶性竞争越来越厉害，想要自己脱颖
而出还是蛮难的，似乎在她们的认知中只要敢拼就能成功，可她的这一脱不就直接赢得
了更多人的关注吗？
我不晓得她的道歉有多少真诚的部分在，也许都是在演戏。脱衣门的主角是斗鱼的三骚
之一，这难道要怀疑其真实性吗，就是自己想这样提高自己的收视率啊，这下还连累了
公司，如果真的想好好做个主持人的话各个方面都会注意的，为什么要在屋子里面换衣
服，有黑客的事情不是应该提早就想到的吗。出了事情才要怪黑客真是可笑，我是觉得
在不好事情发生之前作为一个有经验的主持人就应该要想好一切所能发生的事情，而不
是像现在这样找借口。
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r*1
3 楼
【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: rove11 (狄丹奇钟爱的黄瓜), 信区: Returnee
标 题: 非诚勿扰 --- 关于“博士男”刘鲁新学历造假。 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Sep 27 15:49:19 2010, 美东)
发信人: welovemaomao (举头望明月，低头思故乡), 信区: WaterWorld
标 题: 非诚勿扰 --- 关于“博士男”刘鲁新学历造假。
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Sep 27 15:15:10 2010, 美东)
我现在佐治亚理工学院航空航天系攻读博士，因为我们系中国人很少(专业敏感), 所以
基本大家都知道. 刘鲁新是我系07年硕士毕业，并未拿到博士学位，硕士导师是Dr.
JVR Prasad, 大家可以去查. 我并不认识此人，不想评论其人品， 何况从他自我介绍
来看，的确没说自己拿到博士学位，只说拿到奖学金攻读博士，要知道，在我们系拿到
奖学金的人超过一半都是拿不到博士学位的！问题是制作单位给观众提供了假信息，而
刘鲁新也默认，令人想起了不久前的“唐骏门”。
海归
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f*h
4 楼
I have a question to ask people who know molecular biology. I have a plasmid
in DH5a cells and I can get 10ug DNA (200ng/uL, 50uL) from 1.5mL miniprep
culture. However, when I cultured 250mL for maxiprep, I only got 130ug DNA,
which is more than 10 times less than what I expected. The procedure of
extracting DNA should be fine because I got 900ug DNA from another plasmid
in parallel.
Can anyone give me some comments/suggestions? Thank you so much!
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j*o
5 楼
护照寄出了吗？
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f*4
6 楼
这次细菌养的有些老了？

plasmid
,

【在 f****h 的大作中提到】
: I have a question to ask people who know molecular biology. I have a plasmid
: in DH5a cells and I can get 10ug DNA (200ng/uL, 50uL) from 1.5mL miniprep
: culture. However, when I cultured 250mL for maxiprep, I only got 130ug DNA,
: which is more than 10 times less than what I expected. The procedure of
: extracting DNA should be fine because I got 900ug DNA from another plasmid
: in parallel.
: Can anyone give me some comments/suggestions? Thank you so much!
avatar
s*d
7 楼
谢谢

【在 l****e 的大作中提到】
: 之前来版上问过15号上交的怎么25号还没信息，结果就发现签证系统出问题了，今天又
: 查了下，visa status是issued.timeline:15上交中信， 16号中信寄出，21号case
: created, 30号issued. 还在等待的朋友们别心急。祝大家都顺利拿到签证。
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f*h
8 楼
I tried three times, 16hrs, 15hrs, 14hrs, the results are between 90-150ug.

【在 f***4 的大作中提到】
: 这次细菌养的有些老了？
:
: plasmid
: ,
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m*c
9 楼
我的case也是30号issued,20号寄的材料，23号case created.

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

【在 l****e 的大作中提到】
: 之前来版上问过15号上交的怎么25号还没信息，结果就发现签证系统出问题了，今天又
: 查了下，visa status是issued.timeline:15上交中信， 16号中信寄出，21号case
: created, 30号issued. 还在等待的朋友们别心急。祝大家都顺利拿到签证。
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f*4
10 楼
我觉得还是细菌的问题。是从单菌落/过夜菌/大瓶 来的吗？

【在 f****h 的大作中提到】
: I tried three times, 16hrs, 15hrs, 14hrs, the results are between 90-150ug.
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s*6
11 楼
我妈妈的也是15号上交中信， 16号中信寄出，22号case
created, 30号issued.
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f*h
12 楼
I picked up a single colony in the morning and grew it in 1.5mL culture from
9AM to 6PM, then from this miniculture, I took 250uL into 250mL, grew
overnight.
I thought about the bacteria, should I change the DH5a to a different one?

【在 f***4 的大作中提到】
: 我觉得还是细菌的问题。是从单菌落/过夜菌/大瓶 来的吗？
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j*o
13 楼
我的19号交给中信，23号case created, 28号更新为Administrative Processing，但
是一直到现在还是AP，不会要转面签吧，还是只是因为系统故障被延误了？
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f*4
14 楼
这个不太懂了，试试吧

from

【在 f****h 的大作中提到】
: I picked up a single colony in the morning and grew it in 1.5mL culture from
: 9AM to 6PM, then from this miniculture, I took 250uL into 250mL, grew
: overnight.
: I thought about the bacteria, should I change the DH5a to a different one?
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l*e
15 楼
寄出了，不过还没到当地中信。

【在 j*********o 的大作中提到】
: 护照寄出了吗？
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j*x
16 楼
这个问题在本版应该就讨论过不下三遍了，好消息是你绝不是第一个遇到类似问题的人
，坏消息是可能没有特别的解决办法。
我记得之前有一例是，换过菌株，换过培养条件（培养基温度时间什么的），换过抽提
方法，但是maxi就是不正常，最后只好大量小提然后再合并。
你可以试着换一换各种条件，或者试试看midi，也许有用也许没用，试过才知道。好运！

plasmid
,

【在 f****h 的大作中提到】
: I have a question to ask people who know molecular biology. I have a plasmid
: in DH5a cells and I can get 10ug DNA (200ng/uL, 50uL) from 1.5mL miniprep
: culture. However, when I cultured 250mL for maxiprep, I only got 130ug DNA,
: which is more than 10 times less than what I expected. The procedure of
: extracting DNA should be fine because I got 900ug DNA from another plasmid
: in parallel.
: Can anyone give me some comments/suggestions? Thank you so much!
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s*s
17 楼
我也遇到过这样的问题，后来发现是摇的时间太短了。后来摇24小时或者更长反而好些
。现在一般先取一点小提看一下，算一下量，然后再大提。

plasmid
,

【在 f****h 的大作中提到】
: I have a question to ask people who know molecular biology. I have a plasmid
: in DH5a cells and I can get 10ug DNA (200ng/uL, 50uL) from 1.5mL miniprep
: culture. However, when I cultured 250mL for maxiprep, I only got 130ug DNA,
: which is more than 10 times less than what I expected. The procedure of
: extracting DNA should be fine because I got 900ug DNA from another plasmid
: in parallel.
: Can anyone give me some comments/suggestions? Thank you so much!
avatar
f*h
18 楼
Ok, I will change the bacteria strain and tell you guys what happen. Thanks!

运！

【在 j****x 的大作中提到】
: 这个问题在本版应该就讨论过不下三遍了，好消息是你绝不是第一个遇到类似问题的人
: ，坏消息是可能没有特别的解决办法。
: 我记得之前有一例是，换过菌株，换过培养条件（培养基温度时间什么的），换过抽提
: 方法，但是maxi就是不正常，最后只好大量小提然后再合并。
: 你可以试着换一换各种条件，或者试试看midi，也许有用也许没用，试过才知道。好运！
:
: plasmid
: ,
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j*x
19 楼
如果要摇超过16个小时，有必要加氯霉素，否则即使能提出质粒来质量也不会好的

【在 s********s 的大作中提到】
: 我也遇到过这样的问题，后来发现是摇的时间太短了。后来摇24小时或者更长反而好些
: 。现在一般先取一点小提看一下，算一下量，然后再大提。
:
: plasmid
: ,
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T*y
20 楼
18-20 hrs.
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