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蛋白表达求助

蛋白表达求助# Biology - 生物学

s*e2011-09-02 07:09

1 楼

现在postdog H-1中，如果找到公司的工作，申请regular H-1，需要到10月才能生效。
10月之前，如果从postdoc直接辞职（和老板关系不好），必须要回国从新签证吗？
留在美国到10月份（non-profit out of status ? )，可以吗？
谢谢大家

w*52011-09-02 07:09

2 楼

如果要在中国，香港，美国，加拿大，英国，日本都要用银行及投资服务,
选择哪一家比较好？

l*f2011-09-02 07:09

3 楼

宝宝一个多月大，最近脸上长很小的红点点，什么原因呀。

i*k2011-09-02 07:09

4 楼

看到我小猪我就气不打一处来。刚才看到节目的时候我就很生气，这不是在欺诈是什么
！闹什么劲儿喽！
虽然一开始就知道这些可能早就是套路了。那对战的节目都是一些什么皇家舞团啊什么
的，而罗志祥手里都是些小姑娘，还有很多不是德智体全面发展的，所以不论他怎么努
力有时候都真的赢不了那些人，但是看着小猪这么努力我就觉得特别感动。有些时候就
是这些孩子努力的蹦蹦跳跳的配合着罗志祥就觉得很感动。
接下来还有爆料就说什么有几个人都是签过经纪公司的，还有几个是有内定的，还有就
是掏钱试水要名气的。我就...如果这些罗志祥一开始都不知道的话，我真的觉得这算
是在玩他。你们真的应该好好考虑一下是不是要遭报应了。
虽然说真人秀这玩意大家看着玩，有剧本也没啥的。但是对于这种就是在调戏和嘲讽的
东西，实在是敬谢不敏了。这就是在罗志祥身上挖肉好吗？你们以为培养一个演员一个
歌手多不容易，出道后每次都要遭受到什么样的非议。就这样一步一个脚印的走出来的
你们还这样。真是气不打一处来。

e*r2011-09-02 07:09

5 楼

Kick starter 新项目，跟我想象的差不多，这样的产品看着还不错。

w*l2011-09-02 07:09

6 楼

win7 64位 home premium,刚买的，上网没什么问题，可是下载特别慢
不知道怎么回事

s*s2011-09-02 07:09

7 楼

要表达GST融合蛋白，第一次转进BL21 codon+（找别人借的...）中，挑菌，摇过夜，
存了一份glycerol stock放在－80, 然后剩下的菌IPTG诱导,成功表达。
可是后来用glycerol stock, 同样的条件，却再也不能诱导表达了，我也从冻在四度的
板子上再挑过菌，还是不能表达。
现在的打算是再找别人借一次（主要是有六个蛋白要表达一老借也不是个事），但还是
觉得很奇怪，菌的抗性还保存着说明质粒应该还在啊，当然这个菌不是保存质粒的好选
择，会有重组，可我还是不敢相信六个样品都发生重组。
有人知道这种第一次可以表达第二次就不行的现象是为什么吗？先谢谢大家了。
下面是抱怨帖：博士后天天在后面追着要蛋白，可是我还有ACE马上要过以及自己的课
题还有别的一堆事，真的没有那么多时间来trouble shooting啊>_<

z*62011-09-02 07:09

8 楼

大哥，BOC根本不能算国际性的银行，我看不要多久ICBC国际性都比BOC强。
国际性来说毫无疑问是citi and hsbc

a*l2011-09-02 07:09

9 楼

湿疹？

h*e2011-09-02 07:09

10 楼

你试试安装一下x220自带的联想的网络连接软件，我的情况是用了那个就正常了。
应该是进入WIN7按左上方蓝色键或者屏幕右下方的一个think什么的按钮

m*z2011-09-02 07:09

11 楼

以前实验室一个同学的蛋白就非要用fresh transformed cells. glycerol stock或者
放久了的板子就是不work...
你在借一点BL21,自己做一批competent cell放-80度不行吗？这样就不用每次去借了

【在 s******s 的大作中提到】

: 要表达GST融合蛋白，第一次转进BL21 codon+（找别人借的...）中，挑菌，摇过夜，
: 存了一份glycerol stock放在－80, 然后剩下的菌IPTG诱导,成功表达。
: 可是后来用glycerol stock, 同样的条件，却再也不能诱导表达了，我也从冻在四度的
: 板子上再挑过菌，还是不能表达。
: 现在的打算是再找别人借一次（主要是有六个蛋白要表达一老借也不是个事），但还是
: 觉得很奇怪，菌的抗性还保存着说明质粒应该还在啊，当然这个菌不是保存质粒的好选
: 择，会有重组，可我还是不敢相信六个样品都发生重组。
: 有人知道这种第一次可以表达第二次就不行的现象是为什么吗？先谢谢大家了。
: 下面是抱怨帖：博士后天天在后面追着要蛋白，可是我还有ACE马上要过以及自己的课
: 题还有别的一堆事，真的没有那么多时间来trouble shooting啊>_<

s*k2011-09-02 07:09

12 楼

hsbc

如果要在中国，香港，美国，加拿大，英国，日本都要用银行及投资服务,
选择哪一家比较好？

【在 w***5 的大作中提到】

: 如果要在中国，香港，美国，加拿大，英国，日本都要用银行及投资服务,
: 选择哪一家比较好？

s*s2011-09-02 07:09

13 楼

谢谢谢谢，看来不是只有我一个人碰到过这个问题。
我要来了这种菌，不过这个codon＋里面自带质粒所以有三种抗性，有两种抗生素我们
没有所以要买（如果只用一种抗生素的话可能回掉质粒），所以先上来问问有没有人知
道为什么会有不表达的情况在决定是借菌还是买抗生素。
实在太谢谢您了～

【在 m**z 的大作中提到】

: 以前实验室一个同学的蛋白就非要用fresh transformed cells. glycerol stock或者
: 放久了的板子就是不work...
: 你在借一点BL21,自己做一批competent cell放-80度不行吗？这样就不用每次去借了

s*n2011-09-02 07:09

14 楼

你先确定一下这三种抗性是否都在质粒上，还是有一些在基因组上，如果是在基因组上
的抗性可以不用管，只加质粒上的就可以。

【在 s******s 的大作中提到】

: 谢谢谢谢，看来不是只有我一个人碰到过这个问题。
: 我要来了这种菌，不过这个codon＋里面自带质粒所以有三种抗性，有两种抗生素我们
: 没有所以要买（如果只用一种抗生素的话可能回掉质粒），所以先上来问问有没有人知
: 道为什么会有不表达的情况在决定是借菌还是买抗生素。
: 实在太谢谢您了～

s*n2011-09-02 07:09

15 楼

Host strain Genotype
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL strain E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW
Strep/Specr]
BL21-CodonPlus-RIL strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal endA Hte [argU ileY leuW Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RIL strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU ileY leuW Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RIL-X strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA metA::Tn5(kanr) Hte [argU ileY leuW Camr]
BL21-CodonPlus-RP strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal endA Hte [argU proL Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RP strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU proL Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RP-X strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA metA::Tn5(kanr) Hte [argU proL Camr]

s*n2011-09-02 07:09

16 楼

没用过这个系列的，不确定是否含质粒，从基因型看好像是插入基因组的(没有pXXX)，
建议你发个Email或者打电话问问Agilent (Stratagene)。

s*s2011-09-02 07:09

17 楼

非常感谢，我又看了一下产品介绍，虽说是自带质粒，但只用加一种抗生素就可以了。
“The plasmid contains a functional partitioning locus that ensures
proper plasmid segregation, preventing plasmid loss even in the absence of a
selective agent.”
谢谢提示：）

【在 s********n 的大作中提到】

: 没用过这个系列的，不确定是否含质粒，从基因型看好像是插入基因组的(没有pXXX)，
: 建议你发个Email或者打电话问问Agilent (Stratagene)。