跪求, 一个软件(甲基化结果分析的) 就是黑点和白点的,# Biology - 生物学p*12011-10-27 07:101 楼看了置顶帖,觉得受益匪浅。可是Negotiation的节奏如何?是一点一点慢慢argue么?这样别人会不会很烦啊?谢谢!
a*d2011-10-27 07:103 楼水版这个帖很火啊。这个大哥,我觉得像巨蟹男。巨蟹最爱扮妈妈,家里多了个小十几岁的小妹妹,喜欢得不得了,当宝宝养了。后来自己有了孩子,更是爱到骨头里,对老婆千依百顺,连老妈也顾不上了。更别说妹妹了。呵呵。论证完毕。【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】发信人: yueshang (月上人家), 信区: WaterWorld标 题: 我为什么会说大嫂极品,这是最后一帖发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 16 23:36:06 2013, 美东)我不知道发一个帖子会引来这么多人给我塞邮件来骂我,既然你们都这么认为我过分,这是最后一个帖子我父母都是老实巴交的农民,我大哥二哥年龄非常近,基本上都是一起上学,一个农家要供两个孩子一起上小学,中学,高中,大学,这其中的经济压力根本不是你们所想象得到的,大哥二哥上大学的时候我也开始上中学了,虽然一直很节俭,但再怎么省还是会很困难,因此,我大哥为家里做了很多我都知道。我爸妈经历过大饥荒,他们不想我们也饿着,从来都是天还没亮就出门,天黑才回来,我出生后,是我大哥带大的我,教我走路叫我说话,连第一次月经来买卫生巾生理课都是他给我上的,在我眼里他一直就是爸爸的存在,他结婚了,大嫂在我看来相当于一个继母。初中读完那会儿,家里实在负担不起,虽然我爸妈没有一直在我耳边说让我不要再读书,但是,多多少少这样的意思已经传达给我,那是我考砸的原因,那时候我才十四岁,就有了轻生的念头,加之大哥在外求学根本就不知道家里的情况,他一直打电话回来督促非要让我复读,结果我就跑去跳河。随便你们怎么说,说我没良心任性也罢,之后是我大哥负担起了我高中的学杂费直到大学,十四岁,发生了很多事,我不得不长大。是,是我对这个家没有什么付出,就不该说这说那,我不是那不知道事,二十二岁了在大学里还思想幼稚的小孩子。大学时候大哥开始谈恋爱,我大三时候他们开始谈婚论嫁,到我出国了,他们才结婚,这其中,他们之间发生的很多事情我都知道,可我没有说过我大嫂半句不是没说过什么要他们分手的话。为什么他们谈恋爱这么久才结婚?原因不是我,而是大嫂爸妈提出来的要求!那时候我大哥在北京光是给一些需要的公司做挂名和顾问,额外收入就有一百多万,加之一份稳定的工作,很快就有了房子,但是北京的户口非常紧张,没有指标根本弄不下来,而这其中的要求就是我哥必须要有北京户口,还要把我嫂子的户口给解决了!车更是,买下来还只能上外地牌照,直到现在还没摇到号!我大嫂是哪的人?具体我不想说,但我告诉你们她不是北京人,我们两家的家庭条件相差不是很大。我家是哪的?大体位置可以告诉你们,中部,离北京、广州都很远,我家在广州没有亲戚。关于这些我不想再多说,我来解释,为什么我会一直在花钱。大学时候,我就提出自己贷款读,并不需要大哥再负担,但是他不准。不是不让,而是不准,不让还有回旋余地,不准那就是他说的话我必须听!我大学专业我喜欢吗?不,我一点都不喜欢,还非常讨厌,但是它是大哥给我选的,我就读还要把它读好,读最好,该拿的都拿到手,从来没有输给任何人。来美国,你们说我有奖学金为什么还要花大哥二哥的钱?我不想说具体原因,你们也别人肉,我只能说,如果我和你们一样,那奖学金够我在美国花销,还会有很多时间来赚外快,过得比任何人都惬意。说这么多,我并没有埋怨过我大哥,二哥的话我还会反驳,对大哥我从来都不会去忤逆,这其中太多事情就算有再多的问题或者看法在你们看来或许有解的,在我这里都没有答案。是我没能力赚钱吗?不,我想用自己的钱给大哥买个结婚礼物,抽八天时间赚了3000美元,虽然不多,但你们有几个人敢站出来说你们在求学期间也能做得到!大哥结婚时候,我爸妈来,妈妈特意弄了很多家乡小吃带去北京,可除了核桃留下来,其他又都给背了回去,我妈给他们洗碗,大嫂又去洗第二遍,从他们结婚到现在,大嫂一次都没有去过我老家,很多生活中的小事,我和大嫂相处的并不长但看到的就有不少,我妈给我打电话重来不会说这些,至于吵架那件事,若不是她实在伤心我也不会知道。大嫂的事情我从来没有说过半句话,但这件事我无论如何也不会咽下这口气!还有你们有人说,既然说在北京租房这个提议,你们为什么不负担房租要让我大哥负担。首先我要说,这是假设,其次,他们可以这么做,最后,因为是爸妈来照顾大嫂月子,我们根本不知道事情会成后面那个样子,如果真有这样的做法,你们真以为这每月的房租会让我大哥一个人掏吗?最后,我想说,我甩大哥电话确实不对,你们说的我大哥结婚了以后他就不再和我是一家我无法接受,前一个帖子那么气愤是我一时气头上,平常时候我根本不会告诉任何人我有这样的想法,另外,如果你们衡量一件事情都是以金钱来作为标准的话,那么,我只能说你们是可悲的。我每天都要到晚上十点以后才会有自己的一点剩余时间,这是我在这里发的最后一个帖子,祝你们的生活都幸福。
m*c2011-10-27 07:107 楼 不要很多来回,一个是对方烦,再来程序上来回多次也不可能。如果需要negotiate地方不多,那么一次提完,提到顶,让对方去还价。如果很多点都需要谈,分清主次,先谈主要的三五点,这些是决定你是否要接这个offer的,第二轮再把trivial的提一提,属于有了更好没有也可以接受的。一次列个十几二十条让人觉得有点太挑剔,而且,没有经验的人,就算列二十条,还是会有漏下的,再提就让人更觉得烦。【在 p********1 的大作中提到】: 看了置顶帖,觉得受益匪浅。可是Negotiation的节奏如何?是一点一点慢慢argue么?: 这样别人会不会很烦啊?谢谢!
p*12011-10-27 07:1013 楼明白了!十分感谢!negotiate属于经验【在 m***c 的大作中提到】: 不要很多来回,一个是对方烦,再来程序上来回多次也不可能。如果需要negotiate: 地方: 不多,那么一次提完,提到顶,让对方去还价。如果很多点都需要谈,分清主次,先谈: 主要的三五点,这些是决定你是否要接这个offer的,第二轮再把trivial的提一提,属于: 有了更好没有也可以接受的。一次列个十几二十条让人觉得有点太挑剔,而且,没有经验: 的人,就算列二十条,还是会有漏下的,再提就让人更觉得烦。
a*d2011-10-27 07:1015 楼嗯,我也不太喜欢这个小姑娘。可是看着她对大哥的感情好像也超过了一个妹妹应该有的,忽然觉得她也好可怜的。【在 c********g 的大作中提到】: 只看这贴感觉是穷人家惯出来的公主
b*82011-10-27 07:1018 楼那个棒棒糖图啊,参考这个链接http://www.dxy.cn/bbs/thread/15900186?keywords=BSP#15900186BSP 主要目的是,通过测定亚硫酸盐修饰后的DNA序列,了解特定基因的具体CpG位点的甲基化情况。而MSP只能获得该样本是否发生甲基化的信息,BSP则可以详细了解每一个CpG位点的甲基化情况。1,首先,按前帖设计引物后,确定BSP反应条件。我们实验室一般都做45个cycle.提个有意思的题外话,通常BSP的退货温度,会比相应的MSP的退货温度低。2,BSPCR后,取10ul跑PCR,如条带单一,则直接克隆,具体操作按照Invitrogen的TOPO试剂盒进行;如条带有杂带,需要进行PCR Screen,具体操作及原理以后再讲;3,克隆后在LB胶上,培养过夜后,后通常取8-12个克隆,LB培养过夜;4,过夜后LB液浑浊;按照5-Primer的Mini Plasmid DNA提取试剂盒操作说明,提取质粒DNA;5,半量反应后,送Genomic Core测序;6,测序结果报告用FinchTV软件阅读(可用GOOGLE搜索后在线注册下载安装),寻找出目的片段后,建立每一个克隆序列的TEXT文章(后续的BiQ Analyzer用这个文件导入)。7,将上述文件导入BiQ Analyzer后,按研究需要质控,最后生成BSP直观图,如附图。
s*y2011-10-27 07:1019 楼说得对,一般只谈两个来回。最多谈三个来回。如果反复提出不同的新要求,会被对方觉得你要么是在故意拖时间或者是有其他用意。negotiate属于经验【在 m***c 的大作中提到】: 不要很多来回,一个是对方烦,再来程序上来回多次也不可能。如果需要negotiate: 地方: 不多,那么一次提完,提到顶,让对方去还价。如果很多点都需要谈,分清主次,先谈: 主要的三五点,这些是决定你是否要接这个offer的,第二轮再把trivial的提一提,属于: 有了更好没有也可以接受的。一次列个十几二十条让人觉得有点太挑剔,而且,没有经验: 的人,就算列二十条,还是会有漏下的,再提就让人更觉得烦。
c*g2011-10-27 07:1021 楼买卖提好多极品为题的抱怨贴,看完后大多感觉贴主自己是那什么:)【在 a***d 的大作中提到】: 嗯,我也不太喜欢这个小姑娘。: 可是看着她对大哥的感情好像也超过了一个妹妹应该有的,忽然觉得她也好可怜的。
p*12011-10-27 07:1025 楼谢谢了! 之前接口头offer的时候Dean说会send email,结果一周就把hardcopy寄过来了。我本来是打算argue两轮的,现在收到的是hardcopy不是email,argue两轮可行么?【在 s******y 的大作中提到】: 说得对,一般只谈两个来回。最多谈三个来回。: 如果反复提出不同的新要求,会被对方觉得你要么是在故意拖时间或者是有其他用意。: : negotiate: 属于: 经验
s*y2011-10-27 07:1031 楼可以。一般都是等你的negotiation 完全结束之后再给你发一封新的hardcopy么?【在 p********1 的大作中提到】: 谢谢了! 之前接口头offer的时候Dean说会send email,结果一周就把hardcopy寄过来: 了。我本来是打算argue两轮的,现在收到的是hardcopy不是email,argue两轮可行么?
p*12011-10-27 07:1037 楼哈哈好的!真是谢谢了!【在 s******y 的大作中提到】: 可以。一般都是等你的negotiation 完全结束之后再给你发一封新的hardcopy: : 么?
x*s2011-10-27 07:1042 楼貌似受汇率及泰国大水的影响,笔记本都会慢慢小涨一点点吧?【在 t**********8 的大作中提到】: 原想这两天下个单,没想到居然涨价啦。坑爹呀!: 别的笔记本都减价。为什么Thankpad涨价呢?
B*M2011-10-27 07:1043 楼旁边一个实验室的男生说,BSPCR的效率很低,company许诺90% cover,他做出来的只有10% cover, 真的吗?【在 b**********8 的大作中提到】: 那个棒棒糖图啊,参考这个链接: http://www.dxy.cn/bbs/thread/15900186?keywords=BSP#15900186: BSP 主要目的是,通过测定亚硫酸盐修饰后的DNA序列,了解特定基因的具体CpG位点的: 甲基化情况。而MSP只能获得该样本是否发生甲基化的信息,BSP则可以详细了解每一个: CpG位点的甲基化情况。: 1,首先,按前帖设计引物后,确定BSP反应条件。我们实验室一般都做45个cycle.: 提个有意思的题外话,通常BSP的退货温度,会比相应的MSP的退货温度低。: 2,BSPCR后,取10ul跑PCR,如条带单一,则直接克隆,具体操作按照Invitrogen的: TOPO试剂盒进行;如条带有杂带,需要进行PCR Screen,具体操作及原理以后再讲;: 3,克隆后在LB胶上,培养过夜后,后通常取8-12个克隆,LB培养过夜;
b*82011-10-27 07:1044 楼10不明白,你这里说的90% or 10% cover是什么意思?【在 B*M 的大作中提到】: 旁边一个实验室的男生说,BSPCR的效率很低,company许诺90% cover,他做出来的只有10: % cover, 真的吗?
b*82011-10-27 07:1047 楼你这个图应该也要先做BSP+克隆测序,拿到序列后才能进行分析所以TA克隆应该是不可避免的【在 l********s 的大作中提到】: 是这个图谱,一直没找到相关软件
b*82011-10-27 07:1051 楼这位一看ID就知道是做甲基化的高手了,能否展开说说如何用excel来做这类figure?学习一下【在 D******9 的大作中提到】: KAO, use EXCEL
c*42011-10-27 07:1052 楼QUMA: quma.cdb.riken.jp/Very straightforward. Good luck!【在 l********s 的大作中提到】: 在文章中一直看是用这种软件分析的,请问哪里能找到????: 谢谢,
b*82011-10-27 07:1053 楼恩这个挺好的【在 c*********4 的大作中提到】: QUMA: quma.cdb.riken.jp/: Very straightforward. Good luck!