有用过TOP10 competent cell的么# Biology - 生物学
y*l
1 楼
刚看了一个房子，后院从高向低倾斜（对面房子地势比这个高）。
另外屋主说，曾经有一次power outrage, 结果这一片的房子都被flood过，这个房子是
不是不能买？
谢谢。
另外屋主说，曾经有一次power outrage, 结果这一片的房子都被flood过，这个房子是
不是不能买？
谢谢。
c*k
2 楼
【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: imboss (带头大哥), 信区: WaterWorld
标 题: 关于莆田官员自杀事件的小道消息
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 8 23:09:08 2010, 美东)
昨天和一个莆田的哥们聊天，说起他们那边自杀的官员的事情。他说那个跳楼事件发生的地点离他以前上学的学校就一二百米的距离。我问他，那哥们是不是被纪委查，顶不住了自己了断的。他说这个不好说，但是那哥们是肯定有问题的。前任市长都被判刑了。这种前仆后继太正常了。比如没有处理好前任的问题，接了个烫手山芋，或者知道了不该知道的事情。
另外这哥们还说，也有可能是被当地有钱人逼着自杀的。据说莆田地方很出有钱人，不过都非常低调，身家几十亿也不显山不漏水。国内开私人医院的百分之八十是莆田的，男科，妇科，皮肤科。。。都是赚钱的行当啊。一进去先把你的病说的很严重，吓你个半死，有些病又不好意思去大医院，所以提到黑医院，十有八九都是那边的。还有耐克之类大牌的鞋，我说的是假鞋啊，好多都是莆田生产的。经济基础决定上层建筑，估计是当地的经济基础不顺眼这个上层建筑也是
发信人: imboss (带头大哥), 信区: WaterWorld
标 题: 关于莆田官员自杀事件的小道消息
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 8 23:09:08 2010, 美东)
昨天和一个莆田的哥们聊天，说起他们那边自杀的官员的事情。他说那个跳楼事件发生的地点离他以前上学的学校就一二百米的距离。我问他，那哥们是不是被纪委查，顶不住了自己了断的。他说这个不好说，但是那哥们是肯定有问题的。前任市长都被判刑了。这种前仆后继太正常了。比如没有处理好前任的问题，接了个烫手山芋，或者知道了不该知道的事情。
另外这哥们还说，也有可能是被当地有钱人逼着自杀的。据说莆田地方很出有钱人，不过都非常低调，身家几十亿也不显山不漏水。国内开私人医院的百分之八十是莆田的，男科，妇科，皮肤科。。。都是赚钱的行当啊。一进去先把你的病说的很严重，吓你个半死，有些病又不好意思去大医院，所以提到黑医院，十有八九都是那边的。还有耐克之类大牌的鞋，我说的是假鞋啊，好多都是莆田生产的。经济基础决定上层建筑，估计是当地的经济基础不顺眼这个上层建筑也是
C*m
3 楼
做质粒转化，克隆，质粒比较大，而且带有Tn7, Cre/LoxP sequences. Protocol上建
议用top10,不知道用DH5alpha会不会有影响？多谢。
议用top10,不知道用DH5alpha会不会有影响？多谢。
i*e
4 楼
不能！
F*n
5 楼
jp?
生的地点离他以前上学的学校就一二百米的距离。我问他，那哥们是不是被纪委查，顶
不住了自己了断的。他说这个不好说，但是那哥们是肯定有问题的。前任市长都被判刑
了。这种前仆后继太正常了。比如没有处理好前任的问题，接了个烫手山芋，或者知道
了不该知道的事情。
不过都非常低调，身家几十亿也不显山不漏水。国内开私人医院的百分之八十是莆田的
，男科，妇科，皮肤科。。。都是赚钱的行当啊。一进去先把你的病说的很严重，吓你
个半死，有些病又不好意思去大医院，所以提到黑医院，十有八九都是那边的。还有耐
克之类大牌的鞋，我说的是假鞋啊，好多都是莆田生产的。经济基础决定上层建筑，估
计是当地的经济基础不顺眼这个上层建筑也是有可能的。。。。
没有？不清楚，自从国荣哥哥跳楼后，官员死亡又有了个时髦而高尚的理由。。。抑郁
症。这次这哥们不知道会不会“被抑郁”
【在 c***k 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
: 发信人: imboss (带头大哥), 信区: WaterWorld
: 标 题: 关于莆田官员自杀事件的小道消息
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 8 23:09:08 2010, 美东)
: 昨天和一个莆田的哥们聊天，说起他们那边自杀的官员的事情。他说那个跳楼事件发生的地点离他以前上学的学校就一二百米的距离。我问他，那哥们是不是被纪委查，顶不住了自己了断的。他说这个不好说，但是那哥们是肯定有问题的。前任市长都被判刑了。这种前仆后继太正常了。比如没有处理好前任的问题，接了个烫手山芋，或者知道了不该知道的事情。
: 另外这哥们还说，也有可能是被当地有钱人逼着自杀的。据说莆田地方很出有钱人，不过都非常低调，身家几十亿也不显山不漏水。国内开私人医院的百分之八十是莆田的，男科，妇科，皮肤科。。。都是赚钱的行当啊。一进去先把你的病说的很严重，吓你个半死，有些病又不好意思去大医院，所以提到黑医院，十有八九都是那边的。还有耐克之类大牌的鞋，我说的是假鞋啊，好多都是莆田生产的。经济基础决定上层建筑，估计是当地的经济基础不顺眼这个上层建筑也是
生的地点离他以前上学的学校就一二百米的距离。我问他，那哥们是不是被纪委查，顶
不住了自己了断的。他说这个不好说，但是那哥们是肯定有问题的。前任市长都被判刑
了。这种前仆后继太正常了。比如没有处理好前任的问题，接了个烫手山芋，或者知道
了不该知道的事情。
不过都非常低调，身家几十亿也不显山不漏水。国内开私人医院的百分之八十是莆田的
，男科，妇科，皮肤科。。。都是赚钱的行当啊。一进去先把你的病说的很严重，吓你
个半死，有些病又不好意思去大医院，所以提到黑医院，十有八九都是那边的。还有耐
克之类大牌的鞋，我说的是假鞋啊，好多都是莆田生产的。经济基础决定上层建筑，估
计是当地的经济基础不顺眼这个上层建筑也是有可能的。。。。
没有？不清楚，自从国荣哥哥跳楼后，官员死亡又有了个时髦而高尚的理由。。。抑郁
症。这次这哥们不知道会不会“被抑郁”
【在 c***k 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
: 发信人: imboss (带头大哥), 信区: WaterWorld
: 标 题: 关于莆田官员自杀事件的小道消息
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 8 23:09:08 2010, 美东)
: 昨天和一个莆田的哥们聊天，说起他们那边自杀的官员的事情。他说那个跳楼事件发生的地点离他以前上学的学校就一二百米的距离。我问他，那哥们是不是被纪委查，顶不住了自己了断的。他说这个不好说，但是那哥们是肯定有问题的。前任市长都被判刑了。这种前仆后继太正常了。比如没有处理好前任的问题，接了个烫手山芋，或者知道了不该知道的事情。
: 另外这哥们还说，也有可能是被当地有钱人逼着自杀的。据说莆田地方很出有钱人，不过都非常低调，身家几十亿也不显山不漏水。国内开私人医院的百分之八十是莆田的，男科，妇科，皮肤科。。。都是赚钱的行当啊。一进去先把你的病说的很严重，吓你个半死，有些病又不好意思去大医院，所以提到黑医院，十有八九都是那边的。还有耐克之类大牌的鞋，我说的是假鞋啊，好多都是莆田生产的。经济基础决定上层建筑，估计是当地的经济基础不顺眼这个上层建筑也是
s*r
6 楼
dont know your case. But we use that constantly for most of the molecular
biology work, including large targeting vectors. They work perfectly.
biology work, including large targeting vectors. They work perfectly.
y*l
7 楼
能讲讲具体理由么？谢谢。
附近还有一个房子，backyard倒是平的，不过还是对面房子地势要高。是不是也不行？
附近还有一个房子，backyard倒是平的，不过还是对面房子地势要高。是不是也不行？
H*7
8 楼
福建莆田石狮的商人都黑的很
C*m
9 楼
You are constantly using DH5alpha?
I am trying to clone genes into several plasmids for further transferring
into baculovirus system. Basically it is MultiBac system I am dealing with.
What I am not clear is why TOP10 was suggested not the more popular DH5alpha.
【在 s********r 的大作中提到】
: dont know your case. But we use that constantly for most of the molecular
: biology work, including large targeting vectors. They work perfectly.
I am trying to clone genes into several plasmids for further transferring
into baculovirus system. Basically it is MultiBac system I am dealing with.
What I am not clear is why TOP10 was suggested not the more popular DH5alpha.
【在 s********r 的大作中提到】
: dont know your case. But we use that constantly for most of the molecular
: biology work, including large targeting vectors. They work perfectly.
y*l
10 楼
re
s*r
11 楼
Checked with the technician. We use "Subcloning Efficiency DH5α Competent
Cells" from invitrogen. I think TOP10 and DH5α are similar, except the
former having better efficiency.
"
Cells" from invitrogen. I think TOP10 and DH5α are similar, except the
former having better efficiency.
"
s*d
12 楼
这还用说吗，你得多爱这个房子才会看不到啊。
因为会淹水。
【在 y*l 的大作中提到】
: 能讲讲具体理由么？谢谢。
: 附近还有一个房子，backyard倒是平的，不过还是对面房子地势要高。是不是也不行？
d*y
13 楼
你要做多大的？ top10 我整过1万5的质粒，毫无问题。 top10和5alpha差不多的，就
是top10的效率更高些。
是top10的效率更高些。
y*l
14 楼
Thanks. 房子看着还挺不错的。。。这下死心了。
【在 s**********d 的大作中提到】
:
: 这还用说吗，你得多爱这个房子才会看不到啊。
: 因为会淹水。
【在 s**********d 的大作中提到】
:
: 这还用说吗，你得多爱这个房子才会看不到啊。
: 因为会淹水。
C*e
15 楼
1万5的质粒是啥？
1万5个constructs？
15000bp？（15 kb）？
【在 d***y 的大作中提到】
: 你要做多大的？ top10 我整过1万5的质粒，毫无问题。 top10和5alpha差不多的，就
: 是top10的效率更高些。
1万5个constructs？
15000bp？（15 kb）？
【在 d***y 的大作中提到】
: 你要做多大的？ top10 我整过1万5的质粒，毫无问题。 top10和5alpha差不多的，就
: 是top10的效率更高些。
m*y
16 楼
Grading is fixable, and there are ways to improve drainage. But again, it's
not for amateur.
not for amateur.
C*m
17 楼
质粒本身7.5kb左右 加两三个1000a.a.的基因总长度超过15kb-20kb
phenotype层次说top10有mcr突变，转甲基化的DNA容易一些。DH5alpha没有看到。
【在 d***y 的大作中提到】
: 你要做多大的？ top10 我整过1万5的质粒，毫无问题。 top10和5alpha差不多的，就
: 是top10的效率更高些。
phenotype层次说top10有mcr突变，转甲基化的DNA容易一些。DH5alpha没有看到。
【在 d***y 的大作中提到】
: 你要做多大的？ top10 我整过1万5的质粒，毫无问题。 top10和5alpha差不多的，就
: 是top10的效率更高些。
y*g
18 楼
几乎买一个这样后院的房子: 幸亏对方不肯让价,才没有谈成!
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