求救：检测蛋白的方法 - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

求救：检测蛋白的方法

求救：检测蛋白的方法# Biology - 生物学

j*12014-09-09 07:09

1 楼

请教各位：现在可以从组织中分离progenitor 细胞，但是量很少，每个老鼠只可以
分到大概2千到5千个细胞(FACS分捡），所以没法做western，最后的细胞蛋白样可能会
几个老鼠分出来细胞POOL在一起，但是还是不够，请问还有什么敏感的蛋白质检测方法
去检查蛋白（用抗体）？因为样品量实在太少了，多谢各位指教。谢谢。

e*s2014-09-09 07:09

2 楼

1）感觉还是可以尝试下Western.
为什么那么确定western不行呢？Western不完全取决于样品总量多少，更和目标蛋白丰
度，抗体灵敏度有关系。另外，可以考虑用更灵敏的ECL (fento)检测。
2）MS也许可以考虑，IP出来后，上MS？

s*x2014-09-09 07:09

3 楼

直接staining 吧。

K*S2014-09-09 07:09

4 楼

MRM

【在 j******1 的大作中提到】

: 请教各位：现在可以从组织中分离progenitor 细胞，但是量很少，每个老鼠只可以
: 分到大概2千到5千个细胞(FACS分捡），所以没法做western，最后的细胞蛋白样可能会
: 几个老鼠分出来细胞POOL在一起，但是还是不够，请问还有什么敏感的蛋白质检测方法
: 去检查蛋白（用抗体）？因为样品量实在太少了，多谢各位指教。谢谢。

l*y2014-09-09 07:09

5 楼

啥蛋白，先按copy数估算一下有多少把。

【在 j******1 的大作中提到】

s*g2014-09-09 07:09

6 楼

要不
1。固定，打孔，直接免疫荧光染色，照相？（你会需要一个cytospin的机器把悬浮细
胞离心到玻片上）
2。或 IP-Western
3。或针对此蛋白做细胞的免疫荧光染色，再做Flow cytometry
4。灵敏的 ECL 液体也是关键。反正GE 的ECL不行。我平时都是用GE的加少量
MILLIPORE的。MILLIPORE的太强了，有杂带，还需要更好的分子量marker. （GE的我们
是专门用
来显GAPDH，ACTIN等常规大量蛋白的）

【在 j******1 的大作中提到】