T*J
2 楼
修mixer,最后装的时候发现齿轮组的润滑需要food grade grease,可怜我n多修车用
的grease不能用在做食物的机器上。
的grease不能用在做食物的机器上。
r*n
3 楼
有没有类似Sony DPTS1 Digital Paper System这种东西?
K*g
4 楼
addgene说用直接anneal两个长引物,然后用phusion生成双链
请问高手们给个protocol吧。
请问高手们给个protocol吧。
C*n
8 楼
由于要在不同的物种里试,Addgene的载体对我来说,就是Cas9的序列和gRNA的
tracrRNA部分可以用。我是直接用PCR的,设计了一个很长的引物,直接把20bp的gRNA
加在upstream primer上。
tracrRNA部分可以用。我是直接用PCR的,设计了一个很长的引物,直接把20bp的gRNA
加在upstream primer上。
d*i
9 楼
几口之家不重要,关键看战斗力。
一般不锈钢三层的足够了,不行就多蒸几锅。
一般不锈钢三层的足够了,不行就多蒸几锅。
b*9
11 楼
看你是用什么载体,有直接将oligo退火然后GoldenGate克隆的(比如张峰lab的);也
有把整个U6 expression cassette 通过overlap PCR 或者 Gibson 拼起来插到载体里
的(比如Church lab)
有把整个U6 expression cassette 通过overlap PCR 或者 Gibson 拼起来插到载体里
的(比如Church lab)
K*g
13 楼
I want use the church's gRNA cloning vector
http://www.addgene.org/4184
thanks
http://www.addgene.org/4184
thanks
d*2
14 楼
到local restaurant supply store.
l*y
17 楼
church的这个质粒克隆很麻烦,还不如直接gBlock合成
其实你可以去搞一个zhang feng的质粒把gRNA casette弄出来随便找个质粒一插,然后
用他的protocol克隆
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
其实你可以去搞一个zhang feng的质粒把gRNA casette弄出来随便找个质粒一插,然后
用他的protocol克隆
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
b*9
19 楼
1. Gibson assemble,这个就是设计引物的时候两个PCR片段之间(U6 expression
cassette可以分成一个固定的,一个包含 target sequence的可变的),PCR片段和载
体之间要有overlap。
2.ovrelap PCR:两个PCR片段之间有overlap,先单独扩,分别扩增完之后再用Taq酶拼
起来,记得加3%DMSO。回收完了直接连T载体。
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
cassette可以分成一个固定的,一个包含 target sequence的可变的),PCR片段和载
体之间要有overlap。
2.ovrelap PCR:两个PCR片段之间有overlap,先单独扩,分别扩增完之后再用Taq酶拼
起来,记得加3%DMSO。回收完了直接连T载体。
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
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