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问个基因表达选promoter的问题
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问个基因表达选promoter的问题# Biology - 生物学
j*0
1 楼
等下打电话过去骂。还尼玛hard pull credit history，真尼玛没见过真么贱的公司。
明明就是有货，非得每天10点refresh inventory，refresh你妹呀！
就算没货不能take my fucking order and put me in the queue啥时候有货啥时候让
我pick up不行吗。
艹
准备抵制apple。让它犯贱
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n*0
2 楼
一般promoter就是选ATG之前1-2k的序列吧？把5'UTR也加上。那么promoter和coding
sequence之间能不能带酶切位点呢 （promoter+5'UTR+restriction site+ATG+cDNA)？
会不会影响蛋白正常表达呢？我的一个师兄说最好不要带酶切位点，或者把酶切位点设
计在ATG之后，可是感觉这样好难设计啊。想听听更多人的意见。
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j*0
3 楼
准备打电话过去骂人。。。。。。苹果说
because of the unexpected high volume, we cannot take your call at this
moment.
然后把我电话挂了。。。。。我擦
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l*g
4 楼

当然可以加酶切位点，但要注意不要破坏kozak序列

【在 n****0 的大作中提到】
: 一般promoter就是选ATG之前1-2k的序列吧？把5'UTR也加上。那么promoter和coding
: sequence之间能不能带酶切位点呢 （promoter+5'UTR+restriction site+ATG+cDNA)？
: 会不会影响蛋白正常表达呢？我的一个师兄说最好不要带酶切位点，或者把酶切位点设
: 计在ATG之后，可是感觉这样好难设计啊。想听听更多人的意见。
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m*w
5 楼
谁让你好这口。

【在 j****0 的大作中提到】
: 等下打电话过去骂。还尼玛hard pull credit history，真尼玛没见过真么贱的公司。
: 明明就是有货，非得每天10点refresh inventory，refresh你妹呀！
: 就算没货不能take my fucking order and put me in the queue啥时候有货啥时候让
: 我pick up不行吗。
: 艹
: 准备抵制apple。让它犯贱
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w*n
6 楼
不要再理你师兄了，小心把你带沟里。

【在 n****0 的大作中提到】
: 一般promoter就是选ATG之前1-2k的序列吧？把5'UTR也加上。那么promoter和coding
: sequence之间能不能带酶切位点呢 （promoter+5'UTR+restriction site+ATG+cDNA)？
: 会不会影响蛋白正常表达呢？我的一个师兄说最好不要带酶切位点，或者把酶切位点设
: 计在ATG之后，可是感觉这样好难设计啊。想听听更多人的意见。
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j*0
7 楼

这次准备换iphone 5就是因为这辈子一直没用过iphone，想试试啥感觉。没想到买个jb
电话就恶心成这操行。我看我还是go samsung s3吧，
苹果就是一坨大便，明天short aapl去。

【在 m**********w 的大作中提到】
: 谁让你好这口。
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j*x
8 楼
哈哈，你这个太直接了

【在 w******n 的大作中提到】
: 不要再理你师兄了，小心把你带沟里。
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n*0
9 楼
可是kozak序列不是ATG周围的序列么？如果我在ATG前加酶切位点不是十有八九要破坏
了么？

【在 l******g 的大作中提到】
:
: 当然可以加酶切位点，但要注意不要破坏kozak序列
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s*c
10 楼
酶切位点+kozak序列+ATG...

【在 n****0 的大作中提到】
: 可是kozak序列不是ATG周围的序列么？如果我在ATG前加酶切位点不是十有八九要破坏
: 了么？
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Z*5
11 楼
按照你师兄的设计，至少在转录调控方面和promoter原来启动的蛋白相似吧（不考虑很
远的enhancer）。
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n*0
12 楼
我也觉得他说的方案是最佳的，但是我就想后面接个GFP，本来直接放vector里就行了
，按照他的方法我还得重新设计引物，把promoter和GFP fuse到一起，我觉得不该这么
麻烦吧，所以问问大家是怎么做的

【在 Z******5 的大作中提到】
: 按照你师兄的设计，至少在转录调控方面和promoter原来启动的蛋白相似吧（不考虑很
: 远的enhancer）。
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a*o
13 楼
过来人的话听听没啥错
请师兄帮你设计
再让大家讨论他的设计

【在 w******n 的大作中提到】
: 不要再理你师兄了，小心把你带沟里。
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a*a
14 楼
你是要连启动子带orf一起克隆吗。。？
一般设计在atg之后是正确的。
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d*i
15 楼
promoter + kozak + ATG + ATG后面4-5个(甚至是10个左右的氨基酸序列) + 合适的酶切位点(如果可用HindIII似乎好一点) + 你的目的
蛋白(无ATG且in frame)
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