s*a
2 楼
有哪位知道,AP还有什么可RFE的。
b*e
3 楼
对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
我很累,这样的人,有必要在一起么。
驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
我很累,这样的人,有必要在一起么。
u*1
4 楼
正在制作用于whole-genome sequencing的human genome library。做完ligation跑胶
看到smear,然后切下比如450-500bp的区间做PCR。但可能是50bp的interval太小或者
自己技术不好,所以最后PCR出来的亮度比较低。(当然也不排除ligation efficiency
不好)
PCR的结果如图。
还没拿去测浓度。只想问问有经验的前辈这样的情况能拿去测30 coverage的WGS吗?
另外还有一个问题,就是,我们切胶的smear每一个区间(300-400,400-500,500-600
)这些区间里都一定cover了genome的每一个部分吗?我总担心genome的有的部分没有
被涵盖到,那岂不是就人为引入了很多bias?
thx
看到smear,然后切下比如450-500bp的区间做PCR。但可能是50bp的interval太小或者
自己技术不好,所以最后PCR出来的亮度比较低。(当然也不排除ligation efficiency
不好)
PCR的结果如图。
还没拿去测浓度。只想问问有经验的前辈这样的情况能拿去测30 coverage的WGS吗?
另外还有一个问题,就是,我们切胶的smear每一个区间(300-400,400-500,500-600
)这些区间里都一定cover了genome的每一个部分吗?我总担心genome的有的部分没有
被涵盖到,那岂不是就人为引入了很多bias?
thx
l*5
5 楼
肯定是你的材料不全。
d*l
6 楼
不能,而且没必要,mm人生苦短,真的不要浪费生命在让你不开心的人那里。
y*8
7 楼
If you can recover 10 ng DNA after gel cut, it should be enough.
Your gel picture looks weird. The band near to 1kb is too strong to me.
You should have a more quantitative way to measure your DNA concentration
around 1ng/ul.
Your gel picture looks weird. The band near to 1kb is too strong to me.
You should have a more quantitative way to measure your DNA concentration
around 1ng/ul.
u*1
10 楼
Thanks
But I just didn't see any band around 1kb....you mean 100bp?
【在 y******8 的大作中提到】
: If you can recover 10 ng DNA after gel cut, it should be enough.
: Your gel picture looks weird. The band near to 1kb is too strong to me.
: You should have a more quantitative way to measure your DNA concentration
: around 1ng/ul.
But I just didn't see any band around 1kb....you mean 100bp?
【在 y******8 的大作中提到】
: If you can recover 10 ng DNA after gel cut, it should be enough.
: Your gel picture looks weird. The band near to 1kb is too strong to me.
: You should have a more quantitative way to measure your DNA concentration
: around 1ng/ul.
y*8
12 楼
I saw two bands. What molecular weight should they be?
i*n
13 楼
摩羯座的吧
o*r
14 楼
30X一般是平均,具体到单个base,貌似现在publication的标准是80%以上(base or
exon)在20X以上。30X总还有不少base是没有任何coverage的。还有不少重要基因的
coverage总是比较低,比如NOTCH1
exon)在20X以上。30X总还有不少base是没有任何coverage的。还有不少重要基因的
coverage总是比较低,比如NOTCH1
j*b
17 楼
真正爱一个人就会去包容对方的缺点,而不是试图去改变对方。真正爱一个人就会试图
去改变自己迎合对方。如果明知道这是缺点却不去改变只是不够爱而已。呵呵,又没有
把你绕晕乎阿
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
去改变自己迎合对方。如果明知道这是缺点却不去改变只是不够爱而已。呵呵,又没有
把你绕晕乎阿
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
n*o
24 楼
不好,要宽容也是双方都宽容,不能只要求对方改变。
而且跟自己的gf/lp有什么好较劲的,最怕是个窝里横,外面怂的。
这男的没长大。
而且跟自己的gf/lp有什么好较劲的,最怕是个窝里横,外面怂的。
这男的没长大。
T*g
26 楼
你男的自信心不够呀,太care别人对自己的看法了
先要搞清楚他到底是不是喜欢你,还是要面子和你在一起
先要搞清楚他到底是不是喜欢你,还是要面子和你在一起
v*a
27 楼
试试把对话控制在下三路
T*g
28 楼
换一个角度讲,其实LZ也是计较的,不然也不会有这个帖子了
准确的描述是,我家里老爸是很中庸的,什么时候都让着老妈,为什么我男盆友不让我呢
LZ男朋友家里面应该正好反过来,男强女弱
准确的描述是,我家里老爸是很中庸的,什么时候都让着老妈,为什么我男盆友不让我呢
LZ男朋友家里面应该正好反过来,男强女弱
v*2
31 楼
还是算了。累一个月还能忍,累上一辈子没有必要。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
b*e
32 楼
我已经没有留恋了。
我今天痛经第一天,忙了一天,晚上没吃饭,可恶的公车又消失了整整一班,我在外面
等了一个小时,给他打电话,他没接。回到家,难受的睡了一会,睡醒了给他电话,问
他为什么不接,他说没有啊,然后我说了一句,为什么我最需要你的时候总找不到你。
就这一句话,他就怒了,像愤怒的狮子,说又不是他的错,问我难道我不知道我的手机
不好么。我手机从来没有什么问题。后来,我打电话哄他,让他不要生气,他好像好了
点,然后,我就觉得自己难受,委屈,想让他关心安慰,也是我打电话太怨妇了,还一
直哭,可是我没法控制自己,因为我听到的,都是辩解,说他也想过,他只是不确定能
不能做到,所以在想,我说,给我送个饭,有那么难么,接着,他还是辩解。我真的觉
得自己太贱了。这种男人不值得我这么难过。结束了。
我觉得解脱了。谢谢他今天这么对我,不然,也许我还想着试图让自己变得更宽容,更
理解他。
^^
vivian1012 (妞妞) 的大作中提到: 】
我今天痛经第一天,忙了一天,晚上没吃饭,可恶的公车又消失了整整一班,我在外面
等了一个小时,给他打电话,他没接。回到家,难受的睡了一会,睡醒了给他电话,问
他为什么不接,他说没有啊,然后我说了一句,为什么我最需要你的时候总找不到你。
就这一句话,他就怒了,像愤怒的狮子,说又不是他的错,问我难道我不知道我的手机
不好么。我手机从来没有什么问题。后来,我打电话哄他,让他不要生气,他好像好了
点,然后,我就觉得自己难受,委屈,想让他关心安慰,也是我打电话太怨妇了,还一
直哭,可是我没法控制自己,因为我听到的,都是辩解,说他也想过,他只是不确定能
不能做到,所以在想,我说,给我送个饭,有那么难么,接着,他还是辩解。我真的觉
得自己太贱了。这种男人不值得我这么难过。结束了。
我觉得解脱了。谢谢他今天这么对我,不然,也许我还想着试图让自己变得更宽容,更
理解他。
^^
vivian1012 (妞妞) 的大作中提到: 】
T*g
33 楼
这个男的太敏感了,还没长大
【在 b*******e 的大作中提到】
: 我已经没有留恋了。
: 我今天痛经第一天,忙了一天,晚上没吃饭,可恶的公车又消失了整整一班,我在外面
: 等了一个小时,给他打电话,他没接。回到家,难受的睡了一会,睡醒了给他电话,问
: 他为什么不接,他说没有啊,然后我说了一句,为什么我最需要你的时候总找不到你。
: 就这一句话,他就怒了,像愤怒的狮子,说又不是他的错,问我难道我不知道我的手机
: 不好么。我手机从来没有什么问题。后来,我打电话哄他,让他不要生气,他好像好了
: 点,然后,我就觉得自己难受,委屈,想让他关心安慰,也是我打电话太怨妇了,还一
: 直哭,可是我没法控制自己,因为我听到的,都是辩解,说他也想过,他只是不确定能
: 不能做到,所以在想,我说,给我送个饭,有那么难么,接着,他还是辩解。我真的觉
: 得自己太贱了。这种男人不值得我这么难过。结束了。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 我已经没有留恋了。
: 我今天痛经第一天,忙了一天,晚上没吃饭,可恶的公车又消失了整整一班,我在外面
: 等了一个小时,给他打电话,他没接。回到家,难受的睡了一会,睡醒了给他电话,问
: 他为什么不接,他说没有啊,然后我说了一句,为什么我最需要你的时候总找不到你。
: 就这一句话,他就怒了,像愤怒的狮子,说又不是他的错,问我难道我不知道我的手机
: 不好么。我手机从来没有什么问题。后来,我打电话哄他,让他不要生气,他好像好了
: 点,然后,我就觉得自己难受,委屈,想让他关心安慰,也是我打电话太怨妇了,还一
: 直哭,可是我没法控制自己,因为我听到的,都是辩解,说他也想过,他只是不确定能
: 不能做到,所以在想,我说,给我送个饭,有那么难么,接着,他还是辩解。我真的觉
: 得自己太贱了。这种男人不值得我这么难过。结束了。
P*d
35 楼
他多大了?
在一起多久了?
还是分了吧
在一起多久了?
还是分了吧
a*a
39 楼
有些人总觉得世界,不是黑的就是白的。他自己这么认为,也希望周围的人认同。朋友
同事,睁眼闭眼就算了。爹妈血亲,得忍着。伴侣?何苦呢。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
同事,睁眼闭眼就算了。爹妈血亲,得忍着。伴侣?何苦呢。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
b*e
41 楼
今天他给我打电话,我一直没有接,刚才给我发信说坐下好好谈谈,我说没必要了。他
说他接受不了,他说我不理解他,我让他好好地把想说的都说出来,可他又说不出来,
很痛苦的样子,说我在逼他,问我能理解他现在的样子么,问我为什么不能好好的,说
我都做了些什么,不接电话,不理他。我说,我跟你在一起每天都觉得要崩溃了,就这
个理由,我还不能跟你分手么,他又问,这是谁造成的。我觉得,我要是再说下去,又
变成了两个人互相罗列自己的理由,我要分的理由,他觉得我没道理分不好好跟他一起
的种种不是。
为什么我要分手也分得这么痛苦。为什么就不能学着接受?为什么我要让他满意才能分
?我真的受不了了。好不容易好起来的心情,又被自己一时的同情心接他的话搞坏了。
【在 a*****a 的大作中提到】
: 有些人总觉得世界,不是黑的就是白的。他自己这么认为,也希望周围的人认同。朋友
: 同事,睁眼闭眼就算了。爹妈血亲,得忍着。伴侣?何苦呢。
说他接受不了,他说我不理解他,我让他好好地把想说的都说出来,可他又说不出来,
很痛苦的样子,说我在逼他,问我能理解他现在的样子么,问我为什么不能好好的,说
我都做了些什么,不接电话,不理他。我说,我跟你在一起每天都觉得要崩溃了,就这
个理由,我还不能跟你分手么,他又问,这是谁造成的。我觉得,我要是再说下去,又
变成了两个人互相罗列自己的理由,我要分的理由,他觉得我没道理分不好好跟他一起
的种种不是。
为什么我要分手也分得这么痛苦。为什么就不能学着接受?为什么我要让他满意才能分
?我真的受不了了。好不容易好起来的心情,又被自己一时的同情心接他的话搞坏了。
【在 a*****a 的大作中提到】
: 有些人总觉得世界,不是黑的就是白的。他自己这么认为,也希望周围的人认同。朋友
: 同事,睁眼闭眼就算了。爹妈血亲,得忍着。伴侣?何苦呢。
w*d
43 楼
分啊!我遇到过这样的,而且,还没怎样么就要求我给人家做饭带饭,哈哈,我立马把
伊踹了。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
伊踹了。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 对方总是有自己一套理论,说凡是是对的就是对的,不对的就是不对的。不对的他要反
: 驳,我说过我无法接受每天都活在这种潜在的争论中,很累很怕,他说我不宽容,不理
: 解他,如果我理解他了,就不会觉得这是很累的事情。我从小家里人都是比较中庸的,
: 我觉得很多事情没必要计较那么多对错,讲情远比讲理重要,我们的差异是从小的生活
: 环境决定的,我觉得很难改变了。我说我和他性格什么的不合适,可是每次到这他都很
: 生气的说,不是这么个道理,非要强调我不理解他。然后很生气的挂电话或者甩脸子。
: 我很累,这样的人,有必要在一起么。
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