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Confocal microscopy 请教

Confocal microscopy 请教# Biology - 生物学

v*i2012-04-03 07:04

1 楼

weak case:
1. fresh phd graduate in CS. 0 industry experience.
2. 4 conference, 1 journal, plus two journal in Chinese.
3. citation 200,
4. reviewer for 5 conferences.
5. reference letter no super da-niu
citation looks good, not sure about which one to claim next? authorship or
review? might need do another few reviews

s*c2012-04-03 07:04

2 楼

观看群众们讨论歌手时，我的感受
在知乎，或者最近热议的mitbbs上，经常能看到诸如这样的言论：
张靓颖擅长高音
在我眼中等价于：姚明擅长突破
阿妹共鸣强
在我眼中：奥尼尔投篮强
姚贝娜没有感动度
在我眼中：詹姆斯没有身体
姚没有辨识度
在我眼中：詹姆斯没有技术
mc高音不输wh
在我眼中：王仕鹏扣篮不输乔丹
林志炫和张雨生谁高音厉害？
在我眼中：梅西和姚明谁长得高？
还是林志炫高音厉害一点！
在我眼中：。。。。他可能说的是梅西跳起来比姚明站着不动高一点，不过好像似乎还
是没有姚明高。
如果你在虎扑看到了诸如“詹姆斯没有身体”这样的话，真的不知道怎么回复，“一
时竟无言以对”。
我就经常是这个感觉，所以真心没法上其他论坛。说来说去一句话：
人民群众对声乐的理解水平为零。

T*i2012-04-03 07:04

3 楼

区别是，果粉是屌丝中的小资，有点小钱就要精致生活就要摆酷那种；果黑是
屌丝中的屌丝，经常到拿胖子到绿墙换免费卫生纸，遭小二白眼，英
语都说不溜，穿的衣服基本是沃尔玛级别的那种。果黑未必没钱，说不定钱赚的比果粉
多，但喜欢便宜货喜欢攒钱已经深入骨髓成为一种气质了。推测果粉以大城市小康人家
出身为主，果黑多是农村凤凰。
真正的高富帅白富美是用限量版手机，不用pad。因为他们很忙，每天各种交际各种
party要赶场，哪有时间用pad在网上灌水，是不是？

v*a2012-04-03 07:04

4 楼

以前只做过一般的dual-labeled 荧光显微镜，包括tissue和培养的细胞染色。请教如
果现用confocal，有什么不一样的地方需要注意吗，可以不改动protocol直接去看否？
比如细胞染色，我一般是用no.1的coverslip养在上面，现在看到paper里有人做
confocal用的是membrane inserts养细胞，还有的人是用的no.1.5的converslip。这些
都该如何选择比较好？fixative的选择有什么注意吗，我一般都不用Paraformaldehyde
，但paper里几乎清一色都是，而且是用ice-cold PFA fix几个小时。可以用RT PFA来
fix比较短的时间吗？
谢谢！

w*c2012-04-03 07:04

5 楼

More review could be better.

m*n2012-04-03 07:04

6 楼

你好象没明白..
这些人不是去中央音乐学院考声乐.
他们是唱歌给群众听, 就是以前"戏子"这类的.
不需要专业的标准去评判.

【在 s********c 的大作中提到】

: 观看群众们讨论歌手时，我的感受
: 在知乎，或者最近热议的mitbbs上，经常能看到诸如这样的言论：
: 张靓颖擅长高音
: 在我眼中等价于：姚明擅长突破
: 阿妹共鸣强
: 在我眼中：奥尼尔投篮强
: 姚贝娜没有感动度
: 在我眼中：詹姆斯没有身体
: 姚没有辨识度
: 在我眼中：詹姆斯没有技术

n*72012-04-03 07:04

7 楼

穷玩车富玩表，屌丝玩电脑

s*a2012-04-03 07:04

8 楼

fixative应该主要和你要研究的蛋白有关，不同的蛋白IHC染色可能需要不同的
protocol。

Paraformaldehyde

【在 v***a 的大作中提到】

: 以前只做过一般的dual-labeled 荧光显微镜，包括tissue和培养的细胞染色。请教如
: 果现用confocal，有什么不一样的地方需要注意吗，可以不改动protocol直接去看否？
: 比如细胞染色，我一般是用no.1的coverslip养在上面，现在看到paper里有人做
: confocal用的是membrane inserts养细胞，还有的人是用的no.1.5的converslip。这些
: 都该如何选择比较好？fixative的选择有什么注意吗，我一般都不用Paraformaldehyde
: ，但paper里几乎清一色都是，而且是用ice-cold PFA fix几个小时。可以用RT PFA来
: fix比较短的时间吗？
: 谢谢！

b*w2012-04-03 07:04

9 楼

you should send your background to these immigration lawyers for
free evaluations. After their judgement, you will know your chance.

【在 v*****i 的大作中提到】

: weak case:
: 1. fresh phd graduate in CS. 0 industry experience.
: 2. 4 conference, 1 journal, plus two journal in Chinese.
: 3. citation 200,
: 4. reviewer for 5 conferences.
: 5. reference letter no super da-niu
: citation looks good, not sure about which one to claim next? authorship or
: review? might need do another few reviews

s*c2012-04-03 07:04

10 楼

我这是转载

【在 m**n 的大作中提到】

: 你好象没明白..
: 这些人不是去中央音乐学院考声乐.
: 他们是唱歌给群众听, 就是以前"戏子"这类的.
: 不需要专业的标准去评判.

i*o2012-04-03 07:04

11 楼

这话你也信？什么穷人玩车？

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

【在 n******7 的大作中提到】

: 穷玩车富玩表，屌丝玩电脑

D*a2012-04-03 07:04

12 楼

你们confocal没有专人管吗，最简单的是去跟那人聊聊，拍几张看看。

p*g2012-04-03 07:04

13 楼

make your review >10

m*n2012-04-03 07:04

14 楼

我这"你"是指原作者 :-)

【在 s********c 的大作中提到】

: 我这是转载

n*72012-04-03 07:04

15 楼

相对而言，再说本来就是玩笑话
屌丝玩电脑倒是真的

【在 i*****o 的大作中提到】

: 这话你也信？什么穷人玩车？
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

v*a2012-04-03 07:04

16 楼

蛋白在普通荧光上的条件已经做出来了，就是不知道confocal有没有什么特别

【在 s******a 的大作中提到】

: fixative应该主要和你要研究的蛋白有关，不同的蛋白IHC染色可能需要不同的
: protocol。
:
: Paraformaldehyde

g*h2012-04-03 07:04

17 楼

4. reviewer for 5 conferences
how many papers you reviewed for these 5 conferences? it will good if it is
>20

s*c2012-04-03 07:04

18 楼

原作者就叫比的原理

【在 m**n 的大作中提到】

: 我这"你"是指原作者 :-)

a*t2012-04-03 07:04

19 楼

本来也是调侃

【在 i*****o 的大作中提到】

: 这话你也信？什么穷人玩车？
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

v*a2012-04-03 07:04

20 楼

在等仪器排期……所以还没见到专门的人

【在 D*a 的大作中提到】

: 你们confocal没有专人管吗，最简单的是去跟那人聊聊，拍几张看看。

y*s2012-04-03 07:04

21 楼

姚贝娜没有感动度
在我眼中：詹姆斯没有身体
姚没有辨识度
在我眼中：詹姆斯没有技术
------
只有这两个看有人说过。别的没看人说过。
拿姚贝娜的感动度跟詹姆斯的身体比，是对詹姆斯的侮辱。

c*e2012-04-03 07:04

22 楼

靠一个iphone来区分是不是吊丝的都他妈是吊丝

【在 T****i 的大作中提到】

: 区别是，果粉是屌丝中的小资，有点小钱就要精致生活就要摆酷那种；果黑是
: 屌丝中的屌丝，经常到拿胖子到绿墙换免费卫生纸，遭小二白眼，英
: 语都说不溜，穿的衣服基本是沃尔玛级别的那种。果黑未必没钱，说不定钱赚的比果粉
: 多，但喜欢便宜货喜欢攒钱已经深入骨髓成为一种气质了。推测果粉以大城市小康人家
: 出身为主，果黑多是农村凤凰。
: 真正的高富帅白富美是用限量版手机，不用pad。因为他们很忙，每天各种交际各种
: party要赶场，哪有时间用pad在网上灌水，是不是？

Z*92012-04-03 07:04

23 楼

no.1.5的converslip

s*c2012-04-03 07:04

24 楼

我个人感觉，你既不懂詹姆斯也不懂姚贝娜

【在 y*****s 的大作中提到】

: 姚贝娜没有感动度
: 在我眼中：詹姆斯没有身体
: 姚没有辨识度
: 在我眼中：詹姆斯没有技术
: ------
: 只有这两个看有人说过。别的没看人说过。
: 拿姚贝娜的感动度跟詹姆斯的身体比，是对詹姆斯的侮辱。

g*o2012-04-03 07:04

25 楼

穷玩车富玩表，乞丐玩电脑

v*a2012-04-03 07:04

26 楼

谢谢！

【在 Z****9 的大作中提到】

: no.1.5的converslip

y*82012-04-03 07:04

27 楼

除了最后一句话，我re一下

v*a2012-04-03 07:04

28 楼

不知道tissue的话要不要做perfusion？

【在 Z****9 的大作中提到】

: no.1.5的converslip

y*s2012-04-03 07:04

29 楼

我个人感觉你在胡扯

【在 s********c 的大作中提到】

: 我个人感觉，你既不懂詹姆斯也不懂姚贝娜

n*k2012-04-03 07:04

30 楼

what's the difference between regular IF and confocal then?...

【在 v***a 的大作中提到】

: 蛋白在普通荧光上的条件已经做出来了，就是不知道confocal有没有什么特别

s*c2012-04-03 07:04

31 楼

哪句话？

【在 y*****s 的大作中提到】

: 我个人感觉你在胡扯

Z*92012-04-03 07:04

32 楼

和普通的microscope的最大区别是confocol可以做optical section 通俗点就是可以做
３d重建。比如，有两个荧光团，分别在不同的z position上，普通FL可能区分不出来。
confocol的第二个优点是能利用光学系统的最大分辨率
confocol的bleaching要比普通的microscope快，我知道不同的处理方式会影响
bleaching的速度。如果你按以前的protocol准备标本，bleaching不是问题的话，不一
定需要fellow别人的。

【在 v***a 的大作中提到】

: 不知道tissue的话要不要做perfusion？

y*s2012-04-03 07:04

33 楼

你说我那句

【在 s********c 的大作中提到】

: 哪句话？

b*b2012-04-03 07:04

34 楼

如果你很想了解confocal或者更高级的two-photon，下面两篇paper对你会有帮助。
1.Ojcius DM et al.Immunology and the confocal microscope. Res Immunol 1996
2.Cahalan MD et al.Two-photon tissue imaging: seeing the immune system in a
fresh light.Nat Rev Immunol 2002
ZL1999 (胖头猫)提到了confocal和一般fluoresent microscopy的区别，除了有一点我
不太认同，根据我的理解，confocal microscopy的photobleaching问题应该比一般的
fluoresent microscopy要小，因为前者illuminate smaller volume of your sample。
如果你要做的是培养的细胞，你可以不用改protocal，我一般用8-well chamber slide
，这样一张slide上可以有8个samples。coverslip我倒还从来没注意到是no.多少的，
想来应该越薄越好吧，这样光可以少走点路，呵呵，不太清楚。
Tissue的话，我没有比较过confocal和一般fluoresent microscopy，但是我觉得也应
该可以用一样的protocal吧。我觉得protocal应该没啥特别，confocal带给你的是
resolution。
培养细胞的fixation，我用4% PFA，RT 30min。tissue的fixation，看你怎么做，以及
用OCT还是parraffin，OCT对细胞表面marker保存比较好，而intracellular 分子的
staining用paraffin的多。我只用过OCT，我用acetone for fixation。至于需不需要
perfusion，取决于你的蛋白，比如GFP和NK1.1，通常做perfusion+fixation before
harvest your tissue。

Paraformaldehyde

【在 v***a 的大作中提到】

s*c2012-04-03 07:04

35 楼

你肯定没我懂姚贝娜，我估计你也不怎么懂詹姆斯，所以我说那话很有根据，你要是不
服，跟我辩啊

【在 y*****s 的大作中提到】

: 你说我那句

Z*92012-04-03 07:04

36 楼

confocal用的是PMT detector （大部分），这个的对光的检测效率（quantum
efficiency）在30-40%左右，对red 或者far red的检测效率更低
普通的fluorescent microscopy 用的是CCD 或者EMCCCD，效率在60-70%
confocal由于pinhole的存在，不但屏蔽了out focus的光子，同时也屏蔽了很多有效的
光子。
这两个原因，造成了confocal比普通的fluoresent microscopy的bleaching严重

a
sample。
slide

【在 b*********b 的大作中提到】

: 如果你很想了解confocal或者更高级的two-photon，下面两篇paper对你会有帮助。
: 1.Ojcius DM et al.Immunology and the confocal microscope. Res Immunol 1996
: 2.Cahalan MD et al.Two-photon tissue imaging: seeing the immune system in a
: fresh light.Nat Rev Immunol 2002
: ZL1999 (胖头猫)提到了confocal和一般fluoresent microscopy的区别，除了有一点我
: 不太认同，根据我的理解，confocal microscopy的photobleaching问题应该比一般的
: fluoresent microscopy要小，因为前者illuminate smaller volume of your sample。
: 如果你要做的是培养的细胞，你可以不用改protocal，我一般用8-well chamber slide
: ，这样一张slide上可以有8个samples。coverslip我倒还从来没注意到是no.多少的，
: 想来应该越薄越好吧，这样光可以少走点路，呵呵，不太清楚。

y*s2012-04-03 07:04

37 楼

原作者列的那几条，感动度、辨识度是最主观的。詹姆斯的身体条件是明摆着的客观存
在。纯粹浑水摸鱼夹带私货。

【在 s********c 的大作中提到】

: 你肯定没我懂姚贝娜，我估计你也不怎么懂詹姆斯，所以我说那话很有根据，你要是不
: 服，跟我辩啊

Z*92012-04-03 07:04

38 楼

大部分公司（zeiss， Nikon）的objectives对cover slip的厚度是有矫正的，都是用
No. 1.5的cover slip（厚度 0.17 mm）做标准
如果希望成像质量最好，用No. 1.5的cover slip
如果不计较成像质量，1号或者2号都可以

【在 v***a 的大作中提到】

: 谢谢！

s*c2012-04-03 07:04

39 楼

你这逻辑上有问题啊，原作者拿这两个不想干的东西比喻，原本就是因为如果比方和被
比方在本质上过于接近会产生信息传达上的干扰，因为他想比喻的核心是‘对一个事物
的熟悉程度’，所以找了詹姆斯这样一个耳熟能详的例子，来说明：某些歌迷对于姚贝
娜的某些方面的不了解，其业余程度就好像某些球迷对詹姆斯身体状况的不熟悉一样可
笑，而并非想拿‘对一个球员的个人能力的评判标准’去比喻‘对某一个歌手的演唱特
质的评判标准’，这两者本身就是跨界的无法比较。
你的信息提取错了。

【在 y*****s 的大作中提到】

: 原作者列的那几条，感动度、辨识度是最主观的。詹姆斯的身体条件是明摆着的客观存
: 在。纯粹浑水摸鱼夹带私货。

n*k2012-04-03 07:04

40 楼

zeiss， Nikon leica: do they have the adjustable objective to accomendate
different cover slip? I know Nikon has this feature for regular IF...

【在 Z****9 的大作中提到】

: 大部分公司（zeiss， Nikon）的objectives对cover slip的厚度是有矫正的，都是用
: No. 1.5的cover slip（厚度 0.17 mm）做标准
: 如果希望成像质量最好，用No. 1.5的cover slip
: 如果不计较成像质量，1号或者2号都可以

y*s2012-04-03 07:04

41 楼

比喻要比的让人觉得合理才有说服力。
再业余的球迷看见詹姆斯，也不可能说出“没有身体”这种话。
而姚贝娜有没有感动度本来就是见仁见智的问题。
按他的说法，没被姚贝娜感动的听众都是睁眼瞎了。
更合理的应该是比如拿姚贝娜的感动度去比詹姆斯的组织能力。
其他有的比喻也都是讲不通的。
比如林志炫跟张雨生比就是梅西跟姚明比身高？
他怎么不说是奥尼尔跟姚明比身高？奥尼尔也明显比姚明矮啊。
梅西也就170。
而不管足球还是篮球，顶级联赛里170，180以上的运动员都占了大部分。
那按他这么比喻，是不是说大部分歌手高音都秒了林志炫呢？

【在 s********c 的大作中提到】

: 你这逻辑上有问题啊，原作者拿这两个不想干的东西比喻，原本就是因为如果比方和被
: 比方在本质上过于接近会产生信息传达上的干扰，因为他想比喻的核心是‘对一个事物
: 的熟悉程度’，所以找了詹姆斯这样一个耳熟能详的例子，来说明：某些歌迷对于姚贝
: 娜的某些方面的不了解，其业余程度就好像某些球迷对詹姆斯身体状况的不熟悉一样可
: 笑，而并非想拿‘对一个球员的个人能力的评判标准’去比喻‘对某一个歌手的演唱特
: 质的评判标准’，这两者本身就是跨界的无法比较。
: 你的信息提取错了。

l*12012-04-03 07:04

42 楼

Please refer:
scanned Bessel beams in conjunction
with structured illumination and/or two-photon excitation to create thinner
light sheets (<0.5 μm) better suited to three-dimensional (3D) subcellular
imaging
PubMed link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21378978
Planchon TA, Gao L, et al.
Rapid three-dimensional isotropic imaging of living cells using Bessel beam
plane illumination.
Nat Methods. 2011 May;8(5):417-
>Abstract
>A key challenge when imaging living cells is how to noninvasively extract
the most spatiotemporal information possible. Unlike popular wide-field and
confocal methods, plane-illumination microscopy limits excitation to the
information-rich vicinity of the focal plane, providing effective optical
sectioning and high speed while minimizing out-of-focus background and
premature photobleaching. Here we used scanned Bessel beams in conjunction
with structured illumination and/or two-photon excitation to create thinner
light sheets (<0.5 μm) better suited to three-dimensional (3D) subcellular
imaging. As demonstrated by imaging the dynamics of mitochondria, filopodia,
membrane ruffles, intracellular vesicles and mitotic chromosomes in live
cells, the microscope currently offers 3D isotropic resolution down to ～0.3
μm, speeds up to nearly 200 image planes per second and the ability to
noninvasively acquire hundreds of 3D data volumes from single living cells
encompassing tens of thousands of image frames.

【在 n********k 的大作中提到】

: zeiss， Nikon leica: do they have the adjustable objective to accomendate
: different cover slip? I know Nikon has this feature for regular IF...

s*c2012-04-03 07:04

43 楼

发信人: ypgcwrs (lghlmcl), 信区: TVChinese
标题: Re: 【比的原理】我为什么不愿意去mitbbs等论坛
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Feb 19 12:04:51 2015, 美东)
比喻要比的让人觉得合理才有说服力。
再业余的球迷看见詹姆斯，也不可能说出“没有身体”这种话。
而姚贝娜有没有感动度本来就是见仁见智的问题。
按他的说法，没被姚贝娜感动的听众都是睁眼瞎了。
更合理的应该是比如拿姚贝娜的感动度去比詹姆斯的组织能力。
——————————————
对詹姆斯不了解就喷的人，说他没有身体，这有什么难以理解的？我还看到球迷说乔丹
放在今天就是个乔·约翰逊呢，你根本就是自己预设了一个下限给文盲，可文盲有下限？
其他有的比喻也都是讲不通的。
比如林志炫跟张雨生比就是梅西跟姚明比身高？
他怎么不说是奥尼尔跟姚明比身高？奥尼尔也明显比姚明矮啊。
—————————————
这是为了凸显差距啊，姚明比奥尼尔高一点，可臂展不如奥尼尔啊
梅西也就170。
而不管足球还是篮球，顶级联赛里170，180以上的运动员都占了大部分。
那按他这么比喻，是不是说大部分歌手高音都秒了林志炫呢？
——————————————
你又混乱了，我说了跨界比较是比的核心逻辑，不是表面数据，你这根本是葫芦搅茄子

m*y2012-04-03 07:04

44 楼

coverslip的厚度是镜头决定的，有的镜头可以调来适应玻璃厚度，你直接问管显微镜
的人
一般说confocal bleach比较快是因为激光汇聚在在焦点上，虽然每次只激发很小的体
积，但是这个体积内的能量密度很大。同样，管显微镜的人肯定会培训你再让你上机的
，他肯定会教你尽量从小的激光功率开始

a
sample。
slide

【在 b*********b 的大作中提到】

n*y2012-04-03 07:04

45 楼

你没看懂原贴，最后的结论也就是论点是
人民群众对声乐的理解水平为零。
所以这个对比是基于对声乐有一定理解才能得出的。
对声乐的理解水平为零会觉得这个对比不make sense

【在 y*****s 的大作中提到】

: 比喻要比的让人觉得合理才有说服力。
: 再业余的球迷看见詹姆斯，也不可能说出“没有身体”这种话。
: 而姚贝娜有没有感动度本来就是见仁见智的问题。
: 按他的说法，没被姚贝娜感动的听众都是睁眼瞎了。
: 更合理的应该是比如拿姚贝娜的感动度去比詹姆斯的组织能力。
: 其他有的比喻也都是讲不通的。
: 比如林志炫跟张雨生比就是梅西跟姚明比身高？
: 他怎么不说是奥尼尔跟姚明比身高？奥尼尔也明显比姚明矮啊。
: 梅西也就170。
: 而不管足球还是篮球，顶级联赛里170，180以上的运动员都占了大部分。

v*a2012-04-03 07:04

46 楼

谢谢大家！现在觉得清楚多了！

y*s2012-04-03 07:04

47 楼

逻辑荒谬，以果推因？

【在 n***y 的大作中提到】

: 你没看懂原贴，最后的结论也就是论点是
: 人民群众对声乐的理解水平为零。
: 所以这个对比是基于对声乐有一定理解才能得出的。
: 对声乐的理解水平为零会觉得这个对比不make sense

b*b2012-04-03 07:04

48 楼

深度了解了一下，ZL1999 (胖头猫) 和 mammothcy (mammoth) 说的都非常有道理，
Confocal的photobleaching确实比一般fluorescent严重。

y*s2012-04-03 07:04

49 楼

乔丹跟乔约翰逊比也不是不合理啊。
再说现在很多小孩没看过乔丹比赛，
没看过詹姆斯比赛的有几个？
评论姚贝娜的会没听过她唱歌吗？
呵呵，这种比法无非就是借机贬人而已。
林志炫跟张雨生比高音，是梅西和姚明比身高？
那我是不是可以说梅西和姚明比身高，相当于你和梅西比球技了？
所以林志炫跟张雨生的高音差距相当于你和梅西的球技差距。

【在 s********c 的大作中提到】

: 发信人: ypgcwrs (lghlmcl), 信区: TVChinese
: 标题: Re: 【比的原理】我为什么不愿意去mitbbs等论坛
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu Feb 19 12:04:51 2015, 美东)
: 比喻要比的让人觉得合理才有说服力。
: 再业余的球迷看见詹姆斯，也不可能说出“没有身体”这种话。
: 而姚贝娜有没有感动度本来就是见仁见智的问题。
: 按他的说法，没被姚贝娜感动的听众都是睁眼瞎了。
: 更合理的应该是比如拿姚贝娜的感动度去比詹姆斯的组织能力。
: ——————————————
: 对詹姆斯不了解就喷的人，说他没有身体，这有什么难以理解的？我还看到球迷说乔丹

s*j2012-04-03 07:04

50 楼

"confocal由于pinhole的存在，不但屏蔽了out focus的光子，同时也屏蔽了很多有效的
光子。"
pinhole setting 在 1 airy disk size的话, 95%以上的你所谓"有效光子"都会通过
pinhole( scattered 除外). 不存在"屏蔽很多"的问题

【在 Z****9 的大作中提到】

: confocal用的是PMT detector （大部分），这个的对光的检测效率（quantum
: efficiency）在30-40%左右，对red 或者far red的检测效率更低
: 普通的fluorescent microscopy 用的是CCD 或者EMCCCD，效率在60-70%
: confocal由于pinhole的存在，不但屏蔽了out focus的光子，同时也屏蔽了很多有效的
: 光子。
: 这两个原因，造成了confocal比普通的fluoresent microscopy的bleaching严重
:
: a
: sample。
: slide

n*y2012-04-03 07:04

51 楼

真的还需要我解释这个逻辑吗？这么明显的？

【在 y*****s 的大作中提到】

: 逻辑荒谬，以果推因？

s*j2012-04-03 07:04

52 楼

一般也就水镜有矫正, refractive index 不 match. 对cover slip thickness 比较
敏感.
油镜很少有矫正的.

【在 n********k 的大作中提到】

: zeiss， Nikon leica: do they have the adjustable objective to accomendate
: different cover slip? I know Nikon has this feature for regular IF...

y*s2012-04-03 07:04

53 楼

林志炫跟张雨生比高音相当于梅西比珠穆朗玛峰，我这个对比是不是更make sense。

【在 n***y 的大作中提到】

: 真的还需要我解释这个逻辑吗？这么明显的？

s*c2012-04-03 07:04

54 楼

谁告诉你评论的一定是小孩？70后80后就没资格当球迷了？
听姚贝娜也许听过，但估计就是听了一首all by myself到破音那儿就退出了，然后上
网发帖子‘姚贝娜这水平还不如我邻居隔壁老王家的外甥女卡拉OK麦霸’
林志炫和张雨生的高音差距，有客观数据支持，你可以和这位比的原理辩论一下，他使
用的是自己设计的频谱分析，有干货，你如果也有干货，请拿出来，空打嘴炮只能证明
你的无知

【在 y*****s 的大作中提到】

: 乔丹跟乔约翰逊比也不是不合理啊。
: 再说现在很多小孩没看过乔丹比赛，
: 没看过詹姆斯比赛的有几个？
: 评论姚贝娜的会没听过她唱歌吗？
: 呵呵，这种比法无非就是借机贬人而已。
: 林志炫跟张雨生比高音，是梅西和姚明比身高？
: 那我是不是可以说梅西和姚明比身高，相当于你和梅西比球技了？
: 所以林志炫跟张雨生的高音差距相当于你和梅西的球技差距。

n*y2012-04-03 07:04

55 楼

扣字扣句有意思吗？
原作者的意思表达得很清楚了。

【在 y*****s 的大作中提到】

: 林志炫跟张雨生比高音相当于梅西比珠穆朗玛峰，我这个对比是不是更make sense。

s*c2012-04-03 07:04

56 楼

这个对比更make sense在证明了你语文没怎么及格

【在 y*****s 的大作中提到】

: 林志炫跟张雨生比高音相当于梅西比珠穆朗玛峰，我这个对比是不是更make sense。

w*k2012-04-03 07:04

57 楼

这么牛逼的人不被请去做评委真是埋没人才啊

【在 s********c 的大作中提到】

s*c2012-04-03 07:04

58 楼

典型理工男，技术流，估计嘴皮子笨的一比，当评委只能干瞪眼看别人说话

【在 w**********k 的大作中提到】

: 这么牛逼的人不被请去做评委真是埋没人才啊

B*Z2012-04-03 07:04

59 楼

这个b装得有水平，群主喜闻乐见，多来些多来些

s*c2012-04-03 07:04

60 楼

人家是有干货的，现在是技术流统一世界的节奏，码工这么吃香就是铁的事实

【在 B******Z 的大作中提到】

: 这个b装得有水平，群主喜闻乐见，多来些多来些

T*c2012-04-03 07:04

61 楼

所以我说喜闻乐见啊
但你后面两句跨度太大，我不禁陷入了沉思，这一定是体制的问题。。。

【在 s********c 的大作中提到】

: 人家是有干货的，现在是技术流统一世界的节奏，码工这么吃香就是铁的事实

s*c2012-04-03 07:04

62 楼

后两句纯属对码工的崇拜，对弯曲30w+贫困线的无限向往

【在 T***c 的大作中提到】

: 所以我说喜闻乐见啊
: 但你后面两句跨度太大，我不禁陷入了沉思，这一定是体制的问题。。。

c*g2012-04-03 07:04

63 楼

比哥自然在这版上，而且本版以前的讨论也给过他灵感，你竟然还不知道他是谁
但他最大的问题是先站了边，事实上单说声音，各个频段共鸣好的声谱漂亮的多了去了
，他只会选择性的给你看一些。
同样他的解读的话有诱导性，比如姚贝娜那个G5怒音，他的解读就是怒音厉害
如果去掉那些解读，这个声谱上线条不稳定，如果张靓颖唱了同样声谱的一个G5 （她
的bang bang里声谱不差），肯定是各种贬
黄妈唱了个一样声谱的怒音，那解读就是各种难听，噪音
他只愿对比张靓颖的话，这真没什么人说张靓颖高音更好的，包括我在内，在这主流其
实贬低她的高音不稳定，我就喜欢调笑她爱最后从低到高拉一嗓子以显示高音（当然也
是因为她确实经常这么做）。
但张靓颖真没她的一些优势么？她的假声天生就更好些，这方面她是有天赋的。我相信
她经过正规训练是可以尝试去唱花腔的，会比一般人容易入门些。
至于说感动度什么的，艺术有了绝对才是可怕。真资深听戏的，听流行歌或唱流行歌都
是玩票性的，对他们来说根本无所谓感动度。同样非戏迷听戏也就是觉得节奏慢，恐
怕连听也不愿意听了。现在这年代早不是什么统一
至于谈到詹姆斯，虎扑里能说詹姆斯身体不行的那是极少数带目的性质的花样黑，这属
于摆在台面上的很明显的东西，不适合类比。

【在 s********c 的大作中提到】

: 人家是有干货的，现在是技术流统一世界的节奏，码工这么吃香就是铁的事实

y*s2012-04-03 07:04

64 楼

你这是臆断。网上那么多帖子，要专门挑一些极端的或者成心恶搞的也不用活了。
莫名其妙。姚明的身高在NBA里也是凤毛麟角，在全世界60亿人里都是数得着呢？
梅西的身高在普通人里都算矮的。
林志炫高音不如张雨生，不需要什么干货就可以听出来，又不是没比过。
但是他说的是林志炫高音:张雨生高音=梅西身高:姚明身高
那他就得用干货展示一下，相对于姚明身高，谁的高音是C罗身高，是林书豪身高，是
科比身高，是奥尼尔身高。总不能林志炫高音是梅西身高，结果在梅西和姚明之间没几
个人了吧？

【在 s********c 的大作中提到】

: 谁告诉你评论的一定是小孩？70后80后就没资格当球迷了？
: 听姚贝娜也许听过，但估计就是听了一首all by myself到破音那儿就退出了，然后上
: 网发帖子‘姚贝娜这水平还不如我邻居隔壁老王家的外甥女卡拉OK麦霸’
: 林志炫和张雨生的高音差距，有客观数据支持，你可以和这位比的原理辩论一下，他使
: 用的是自己设计的频谱分析，有干货，你如果也有干货，请拿出来，空打嘴炮只能证明
: 你的无知

y*s2012-04-03 07:04

65 楼

省略了比高度三个字而已

【在 s********c 的大作中提到】

: 这个对比更make sense在证明了你语文没怎么及格

s*c2012-04-03 07:04

66 楼

比哥看你这么说，会笑掉大牙的

【在 c********g 的大作中提到】

: 比哥自然在这版上，而且本版以前的讨论也给过他灵感，你竟然还不知道他是谁
: 但他最大的问题是先站了边，事实上单说声音，各个频段共鸣好的声谱漂亮的多了去了
: ，他只会选择性的给你看一些。
: 同样他的解读的话有诱导性，比如姚贝娜那个G5怒音，他的解读就是怒音厉害
: 如果去掉那些解读，这个声谱上线条不稳定，如果张靓颖唱了同样声谱的一个G5 （她
: 的bang bang里声谱不差），肯定是各种贬
: 黄妈唱了个一样声谱的怒音，那解读就是各种难听，噪音
: 他只愿对比张靓颖的话，这真没什么人说张靓颖高音更好的，包括我在内，在这主流其
: 实贬低她的高音不稳定，我就喜欢调笑她爱最后从低到高拉一嗓子以显示高音（当然也
: 是因为她确实经常这么做）。

c*g2012-04-03 07:04

67 楼

服了，你还个人崇拜起来了
我需要关心他笑不笑么
我知道他是版上哪个
要出来自然欢迎

【在 s********c 的大作中提到】

: 比哥看你这么说，会笑掉大牙的

f*r2012-04-03 07:04

68 楼

你肯定不需要关心，你笑他就笑，你不笑他立马停

【在 c********g 的大作中提到】

: 服了，你还个人崇拜起来了
: 我需要关心他笑不笑么
: 我知道他是版上哪个
: 要出来自然欢迎

s*c2012-04-03 07:04

69 楼

你这种激将法是没用的，比哥已经说了，这个版上双方的辩论都是胡扯，他一句一句去
纠正很累，所以你就别想这茬了

【在 c********g 的大作中提到】

: 服了，你还个人崇拜起来了
: 我需要关心他笑不笑么
: 我知道他是版上哪个
: 要出来自然欢迎

s*c2012-04-03 07:04

70 楼

当然胡扯的也包括你，你要觉得不服，自己去百度贴吧找他单挑 lol

【在 s********c 的大作中提到】

: 你这种激将法是没用的，比哥已经说了，这个版上双方的辩论都是胡扯，他一句一句去
: 纠正很累，所以你就别想这茬了

c*g2012-04-03 07:04

71 楼

呵呵看来你就是一小卒啊，自己还挺美
又不是没在这版上跟他打过交道

【在 s********c 的大作中提到】

: 你这种激将法是没用的，比哥已经说了，这个版上双方的辩论都是胡扯，他一句一句去
: 纠正很累，所以你就别想这茬了

s*c2012-04-03 07:04

72 楼

我是什么不重要，重点是我帮你你了解清楚你自己在他那里是个什么水平就行了

【在 c********g 的大作中提到】

: 呵呵看来你就是一小卒啊，自己还挺美
: 又不是没在这版上跟他打过交道

c*g2012-04-03 07:04

73 楼

我对在网上成为意见领袖没啥兴趣
谁要来来就是
你这样的小卒理解不了

【在 s********c 的大作中提到】

: 当然胡扯的也包括你，你要觉得不服，自己去百度贴吧找他单挑 lol

c*g2012-04-03 07:04

74 楼

还是一股浓浓的小卒范
就你这点分辨能力，连他是版上的谁都不知道

【在 s********c 的大作中提到】

: 我是什么不重要，重点是我帮你你了解清楚你自己在他那里是个什么水平就行了

s*c2012-04-03 07:04

75 楼

我不care你的兴趣是什么，你不需要征求我对你的看法的看法，当然，适时的从一些懂
行的人那里获知对自己的评价，有助于改掉满嘴跑火车的毛病，起码下次不懂装懂的时
候还知道有人看着，可能还会收敛点

【在 c********g 的大作中提到】

: 我对在网上成为意见领袖没啥兴趣
: 谁要来来就是
: 你这样的小卒理解不了

s*c2012-04-03 07:04

76 楼

我何必知道他在这版上是谁，如果他又不在这版上发言？这版上来回就那么几个ID，别
太把自己当回事了，还以为大家都趋之若鹜似的

【在 c********g 的大作中提到】

: 还是一股浓浓的小卒范
: 就你这点分辨能力，连他是版上的谁都不知道

c*g2012-04-03 07:04

77 楼

我知道我在说啥，你看不懂是你的问题
他也会知道我在说啥

【在 s********c 的大作中提到】

: 我不care你的兴趣是什么，你不需要征求我对你的看法的看法，当然，适时的从一些懂
: 行的人那里获知对自己的评价，有助于改掉满嘴跑火车的毛病，起码下次不懂装懂的时
: 候还知道有人看着，可能还会收敛点

s*c2012-04-03 07:04

78 楼

他知道你在说啥，所以他说了，都是胡扯，我也能看懂你在说啥，我知道八成都是抄的
，还没抄对

【在 c********g 的大作中提到】

: 我知道我在说啥，你看不懂是你的问题
: 他也会知道我在说啥

c*g2012-04-03 07:04

79 楼

嘿嘿
我就乐意在这灌灌而不是去吹什么秒天秒地秒宇宙的
小卒们理解不了

【在 s********c 的大作中提到】

: 我何必知道他在这版上是谁，如果他又不在这版上发言？这版上来回就那么几个ID，别
: 太把自己当回事了，还以为大家都趋之若鹜似的

c*g2012-04-03 07:04

80 楼

别急啊
还八成都是抄的
懒得跟你说了，继续美美的做你的小卒吧

【在 s********c 的大作中提到】

: 他知道你在说啥，所以他说了，都是胡扯，我也能看懂你在说啥，我知道八成都是抄的
: ，还没抄对

s*c2012-04-03 07:04

81 楼

不需要理解，ur nobody

【在 c********g 的大作中提到】

: 嘿嘿
: 我就乐意在这灌灌而不是去吹什么秒天秒地秒宇宙的
: 小卒们理解不了

s*c2012-04-03 07:04

82 楼

没什么好急的，实话实说而已

【在 c********g 的大作中提到】

: 别急啊
: 还八成都是抄的
: 懒得跟你说了，继续美美的做你的小卒吧

c*g2012-04-03 07:04

83 楼

看你这急的
自己没啥干货，只好拉出意见领袖
我生活里过的 somebody就行了

【在 s********c 的大作中提到】

: 不需要理解，ur nobody

s*c2012-04-03 07:04

84 楼

自己没话说了就说别人急，自己没干货就巴望别人和自己一样，抄货的特质啊

【在 c********g 的大作中提到】

: 看你这急的
: 自己没啥干货，只好拉出意见领袖
: 我生活里过的 somebody就行了

c*g2012-04-03 07:04

85 楼

你真想要干货
那我晚上就去搞一篇，欢迎比的原理出来
小卒看着就行了，也许可以吆喝几句。

【在 s********c 的大作中提到】

: 自己没话说了就说别人急，自己没干货就巴望别人和自己一样，抄货的特质啊

s*c2012-04-03 07:04

86 楼

去吧，多谢顶贴

【在 c********g 的大作中提到】

: 你真想要干货
: 那我晚上就去搞一篇，欢迎比的原理出来
: 小卒看着就行了，也许可以吆喝几句。

x*g2012-04-03 07:04

87 楼

比的原理比任何人都偏激

【在 s********c 的大作中提到】

s*c2012-04-03 07:04

88 楼

错，冷漠微笑比他偏激

【在 x**********g 的大作中提到】

: 比的原理比任何人都偏激

w*r2012-04-03 07:04

89 楼

上网就等于去酒吧，图个热闹，和开学术会议能一样吗？。
当然有人是为了装B，和酒吧一样，脑袋被抡了酒瓶子啥的。

【在 s********c 的大作中提到】

p*y2012-04-03 07:04

90 楼

就是个普通网友的评论，看你们捧此人捧到好像是什么名人巨星。
mitbbs网友就是灌谁好玩，谁care此人来不来，谁care此人说什么。
不好意思，前面的帖子没细看，跳着看。

【在 c********g 的大作中提到】

: 服了，你还个人崇拜起来了
: 我需要关心他笑不笑么
: 我知道他是版上哪个
: 要出来自然欢迎

p*y2012-04-03 07:04

91 楼

不需要他来纠正，没人care他说什么，转告此话给他/她。

【在 s********c 的大作中提到】

: 你这种激将法是没用的，比哥已经说了，这个版上双方的辩论都是胡扯，他一句一句去
: 纠正很累，所以你就别想这茬了

s*c2012-04-03 07:04

92 楼

不好意思，我和connecting的对话是基于彼此都懂一点的前提，也许他比我更懂，不过
主贴讨论的人群不包括你，你想多了

【在 p****y 的大作中提到】

: 不需要他来纠正，没人care他说什么，转告此话给他/她。

s*c2012-04-03 07:04

93 楼

你自己是为了灌水好玩，但不要assume所有人都和你一样，你强行代表大家不是一次了

【在 p****y 的大作中提到】

: 就是个普通网友的评论，看你们捧此人捧到好像是什么名人巨星。
: mitbbs网友就是灌谁好玩，谁care此人来不来，谁care此人说什么。
: 不好意思，前面的帖子没细看，跳着看。

p*y2012-04-03 07:04

94 楼

除了你，还有谁care此人说什么，care的人请re下让我看看。
不就是个普通网友的点评么，不知道你为什么那么care。

【在 s********c 的大作中提到】

: 你自己是为了灌水好玩，但不要assume所有人都和你一样，你强行代表大家不是一次了

s*c2012-04-03 07:04

95 楼

a若干人经常讨论他的频谱分析，而且显然的我提起这人不少ID都知道，你不感兴趣那
是你各人的事

【在 p****y 的大作中提到】

: 除了你，还有谁care此人说什么，care的人请re下让我看看。
: 不就是个普通网友的点评么，不知道你为什么那么care。

f*t2012-04-03 07:04

96 楼

靠说的是啥狗屁

n*y2012-04-03 07:04

97 楼

MITBBS 就是戾气太重，什么事情都是要揪出鸡毛蒜皮的事情来批判一番。楼主的意思
再明显不过了，就是看不惯mitbbs的人不懂装懂， that's it.

m*o2012-04-03 07:04

98 楼

就算去考中央音乐学院，最终的终极舞台也就是中南海小剧场吧，那帮观众可能比这里
的网民还不如。。。。

【在 m**n 的大作中提到】

: 你好象没明白..
: 这些人不是去中央音乐学院考声乐.
: 他们是唱歌给群众听, 就是以前"戏子"这类的.
: 不需要专业的标准去评判.