b*1
2 楼
想做点包子、花卷、肉龙之类的给孩子做早餐吃，以前只速冻过饺子，发面的怎么保存
？
？
w*y
3 楼
我现在正在尝试从zebrafish embryo的total RNA里面提取mRNA， 用的是invitrogen的
Dynabeads和他们的mRNA purification kit。 按照他们的protocol做完后跑胶发现里
面还是有挺多rRNA。上网搜了一下发现有的人建议连续做2次protocol里说的
purification。 请问大家有什么建议么？
我试了一下发现第1次纯化后获得了大概3.8%的total RNA。第二次以后有1.5%的total
RNA。我不太确定这样连续2次purification会不会损失太多mRNA。
Dynabeads和他们的mRNA purification kit。 按照他们的protocol做完后跑胶发现里
面还是有挺多rRNA。上网搜了一下发现有的人建议连续做2次protocol里说的
purification。 请问大家有什么建议么？
我试了一下发现第1次纯化后获得了大概3.8%的total RNA。第二次以后有1.5%的total
RNA。我不太确定这样连续2次purification会不会损失太多mRNA。
m*1
4 楼
100万，妥妥的。
a*e
5 楼
先蒸熟了再速冻
【在 b**********1 的大作中提到】
: 想做点包子、花卷、肉龙之类的给孩子做早餐吃，以前只速冻过饺子，发面的怎么保存
: ？
【在 b**********1 的大作中提到】
: 想做点包子、花卷、肉龙之类的给孩子做早餐吃，以前只速冻过饺子，发面的怎么保存
: ？
n*k
6 楼
do u want mRNA only or you want rRNA depletion, for rRNA depletion, rRNA-
zero from epicentre is the way to go...with one around, I got virtually no
rRNA as determined by agilent Chip...based on the kit, the starting RNA is about 5ug and ends up with 150-
400ng RNA. So about 3-8%...that's what I got for all my 8 samples...
total
【在 w***y 的大作中提到】
: 我现在正在尝试从zebrafish embryo的total RNA里面提取mRNA， 用的是invitrogen的
: Dynabeads和他们的mRNA purification kit。 按照他们的protocol做完后跑胶发现里
: 面还是有挺多rRNA。上网搜了一下发现有的人建议连续做2次protocol里说的
: purification。 请问大家有什么建议么？
: 我试了一下发现第1次纯化后获得了大概3.8%的total RNA。第二次以后有1.5%的total
: RNA。我不太确定这样连续2次purification会不会损失太多mRNA。
zero from epicentre is the way to go...with one around, I got virtually no
rRNA as determined by agilent Chip...based on the kit, the starting RNA is about 5ug and ends up with 150-
400ng RNA. So about 3-8%...that's what I got for all my 8 samples...
total
【在 w***y 的大作中提到】
: 我现在正在尝试从zebrafish embryo的total RNA里面提取mRNA， 用的是invitrogen的
: Dynabeads和他们的mRNA purification kit。 按照他们的protocol做完后跑胶发现里
: 面还是有挺多rRNA。上网搜了一下发现有的人建议连续做2次protocol里说的
: purification。 请问大家有什么建议么？
: 我试了一下发现第1次纯化后获得了大概3.8%的total RNA。第二次以后有1.5%的total
: RNA。我不太确定这样连续2次purification会不会损失太多mRNA。
p*e
7 楼
百分之十五到二十比较合理
b*1
8 楼
好的,谢谢.如果再复蒸的话要蒸多久,是开水蒸还是冷水蒸?
【在 a*****e 的大作中提到】
: 先蒸熟了再速冻
【在 a*****e 的大作中提到】
: 先蒸熟了再速冻
w*y
9 楼
谢谢， 我只想要mRNA，因为我要去做mRNA-seq, 所以要去掉rRNA。 我看了rRNA-zero
kit，发现这是用在Human/Mouse/Rat上的， 似乎不能确定是否能用在zebrafish上，在
网上搜到有人说在鱼里效果不怎么样。 请问你是用在鱼里么？另外这个kit会不会导致mRNA的丢失呢？
about 5ug and ends up with 150-
【在 n********k 的大作中提到】
: do u want mRNA only or you want rRNA depletion, for rRNA depletion, rRNA-
: zero from epicentre is the way to go...with one around, I got virtually no
: rRNA as determined by agilent Chip...based on the kit, the starting RNA is about 5ug and ends up with 150-
: 400ng RNA. So about 3-8%...that's what I got for all my 8 samples...
:
: total
kit，发现这是用在Human/Mouse/Rat上的， 似乎不能确定是否能用在zebrafish上，在
网上搜到有人说在鱼里效果不怎么样。 请问你是用在鱼里么？另外这个kit会不会导致mRNA的丢失呢？
about 5ug and ends up with 150-
【在 n********k 的大作中提到】
: do u want mRNA only or you want rRNA depletion, for rRNA depletion, rRNA-
: zero from epicentre is the way to go...with one around, I got virtually no
: rRNA as determined by agilent Chip...based on the kit, the starting RNA is about 5ug and ends up with 150-
: 400ng RNA. So about 3-8%...that's what I got for all my 8 samples...
:
: total
C*7
10 楼
thanks
【在 p*********e 的大作中提到】
: 百分之十五到二十比较合理
【在 p*********e 的大作中提到】
: 百分之十五到二十比较合理
a*e
11 楼
微波炉就行。很快，每个40多秒，视大小微调：）。
【在 b**********1 的大作中提到】
: 好的,谢谢.如果再复蒸的话要蒸多久,是开水蒸还是冷水蒸?
【在 b**********1 的大作中提到】
: 好的,谢谢.如果再复蒸的话要蒸多久,是开水蒸还是冷水蒸?
c*n
12 楼
Do the purification twice--from my own experience. The protocol/kit doesn't
work the way it claimed. You'll lose some mRNA each round. Anyone has good
alternative ways?
total
【在 w***y 的大作中提到】
: 我现在正在尝试从zebrafish embryo的total RNA里面提取mRNA， 用的是invitrogen的
: Dynabeads和他们的mRNA purification kit。 按照他们的protocol做完后跑胶发现里
: 面还是有挺多rRNA。上网搜了一下发现有的人建议连续做2次protocol里说的
: purification。 请问大家有什么建议么？
: 我试了一下发现第1次纯化后获得了大概3.8%的total RNA。第二次以后有1.5%的total
: RNA。我不太确定这样连续2次purification会不会损失太多mRNA。
work the way it claimed. You'll lose some mRNA each round. Anyone has good
alternative ways?
total
【在 w***y 的大作中提到】
: 我现在正在尝试从zebrafish embryo的total RNA里面提取mRNA， 用的是invitrogen的
: Dynabeads和他们的mRNA purification kit。 按照他们的protocol做完后跑胶发现里
: 面还是有挺多rRNA。上网搜了一下发现有的人建议连续做2次protocol里说的
: purification。 请问大家有什么建议么？
: 我试了一下发现第1次纯化后获得了大概3.8%的total RNA。第二次以后有1.5%的total
: RNA。我不太确定这样连续2次purification会不会损失太多mRNA。
s*y
13 楼
这个也得看你是怎么跳的吧。如果是对方主动来挖你，而且你可以带去一大笔钱，而且
是同档学校之间跳，那么的确有可能涨工资。但如果是从低往高跳，那就不一定了。
top candidate 的要求并不能都得到满足的，关键要看你的要求是否在合理范围之内。
【在 C***7 的大作中提到】
: AP跳槽该涨多少工资呀
: 现在学校还不到10万
b*1
14 楼
好的,我试下,多谢
【在 a*****e 的大作中提到】
: 微波炉就行。很快，每个40多秒，视大小微调：）。
【在 a*****e 的大作中提到】
: 微波炉就行。很快，每个40多秒，视大小微调：）。
l*1
15 楼
alternatively you can try Oligotex-dt30 mRNA purification kit for total RNA
sample:
Manual book:
//catalog.takara-bio.co.jp/PDFFiles/NTrap%20mRNA_j.pdf
Vender link:
//www.mn-net.com/Products/DNAandRNApurification/RNA/NucleoTrapmRNA/tabid/1328/language/en-
US/Default.aspx
Reference:
please go to
PubMed link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18678863
T Yabu - 2008 JBC
31 Oct 2008 – In zebrafish embryonic cells, the endogenous SMase enzyme was
.... using the Oligotex-dt30 mRNA purification kit (Takara Biomedicals,
Shiga, ...
zero
致mRNA的丢失呢？
【在 w***y 的大作中提到】
: 谢谢， 我只想要mRNA，因为我要去做mRNA-seq, 所以要去掉rRNA。 我看了rRNA-zero
: kit，发现这是用在Human/Mouse/Rat上的， 似乎不能确定是否能用在zebrafish上，在
: 网上搜到有人说在鱼里效果不怎么样。 请问你是用在鱼里么？另外这个kit会不会导致mRNA的丢失呢？
:
: about 5ug and ends up with 150-
sample:
Manual book:
//catalog.takara-bio.co.jp/PDFFiles/NTrap%20mRNA_j.pdf
Vender link:
//www.mn-net.com/Products/DNAandRNApurification/RNA/NucleoTrapmRNA/tabid/1328/language/en-
US/Default.aspx
Reference:
please go to
PubMed link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18678863
T Yabu - 2008 JBC
31 Oct 2008 – In zebrafish embryonic cells, the endogenous SMase enzyme was
.... using the Oligotex-dt30 mRNA purification kit (Takara Biomedicals,
Shiga, ...
zero
致mRNA的丢失呢？
【在 w***y 的大作中提到】
: 谢谢， 我只想要mRNA，因为我要去做mRNA-seq, 所以要去掉rRNA。 我看了rRNA-zero
: kit，发现这是用在Human/Mouse/Rat上的， 似乎不能确定是否能用在zebrafish上，在
: 网上搜到有人说在鱼里效果不怎么样。 请问你是用在鱼里么？另外这个kit会不会导致mRNA的丢失呢？
:
: about 5ug and ends up with 150-
e*e
16 楼
俺的只涨了8%
【在 p*********e 的大作中提到】
: 百分之十五到二十比较合理
【在 p*********e 的大作中提到】
: 百分之十五到二十比较合理
d*e
17 楼
要口感好的话还是得放水蒸， 时间来的及的话。
w*y
18 楼
Thanks, anybody tried Oligotex mRNA kit from Qiagen?
RNA
1328/language/en-
【在 l**********1 的大作中提到】
: alternatively you can try Oligotex-dt30 mRNA purification kit for total RNA
: sample:
: Manual book:
: //catalog.takara-bio.co.jp/PDFFiles/NTrap%20mRNA_j.pdf
: Vender link:
: //www.mn-net.com/Products/DNAandRNApurification/RNA/NucleoTrapmRNA/tabid/1328/language/en-
: US/Default.aspx
: Reference:
: please go to
: PubMed link:
RNA
1328/language/en-
【在 l**********1 的大作中提到】
: alternatively you can try Oligotex-dt30 mRNA purification kit for total RNA
: sample:
: Manual book:
: //catalog.takara-bio.co.jp/PDFFiles/NTrap%20mRNA_j.pdf
: Vender link:
: //www.mn-net.com/Products/DNAandRNApurification/RNA/NucleoTrapmRNA/tabid/1328/language/en-
: US/Default.aspx
: Reference:
: please go to
: PubMed link:
b*1
19 楼
如果要蒸的话要蒸多久呢，开水还是冷水？
【在 d*********e 的大作中提到】
: 要口感好的话还是得放水蒸， 时间来的及的话。
【在 d*********e 的大作中提到】
: 要口感好的话还是得放水蒸， 时间来的及的话。
b*1
20 楼
试了下，复蒸，开水3分钟，口感不错，很受欢迎。
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