w*w
2 楼
能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector,谁能推荐一个啊?谢谢
w*w
4 楼
up
s*s
6 楼
教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵
【在 w********w 的大作中提到】
: 能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector,谁能推荐一个啊?谢谢
2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵
【在 w********w 的大作中提到】
: 能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector,谁能推荐一个啊?谢谢
w*w
8 楼
谢谢。好主意。类似的方法想过了, 就是不想太多的cloning, 最好有卖的现成的
vector, 知道有同时表达2个的,不知道3个或以上的。
【在 s******s 的大作中提到】
: 教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
: 2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
: mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
: 有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
: 个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
: 是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
: 这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
: neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
: 四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵
vector, 知道有同时表达2个的,不知道3个或以上的。
【在 s******s 的大作中提到】
: 教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
: 2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
: mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
: 有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
: 个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
: 是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
: 这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
: neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
: 四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵
G*W
11 楼
參考一下 :
http://blog.sina.com.cn/s/blog_50ecf21301017a8c.html
【在 t******g 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/playlist?list=PLpTETw88gKC12QOOVL02o330Y
: 希望有帮助
http://blog.sina.com.cn/s/blog_50ecf21301017a8c.html
【在 t******g 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/playlist?list=PLpTETw88gKC12QOOVL02o330Y
: 希望有帮助
M*a
12 楼
nice.
【在 s******s 的大作中提到】
: 教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
: 2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
: mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
: 有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
: 个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
: 是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
: 这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
: neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
: 四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵
【在 s******s 的大作中提到】
: 教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
: 2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
: mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
: 有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
: 个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
: 是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
: 这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
: neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
: 四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵
t*g
13 楼
不错, 谢了
【在 G**W 的大作中提到】
: 參考一下 :
: http://blog.sina.com.cn/s/blog_50ecf21301017a8c.html
【在 G**W 的大作中提到】
: 參考一下 :
: http://blog.sina.com.cn/s/blog_50ecf21301017a8c.html
Y*u
17 楼
腿是盘不坏的, 大概需要点疼死算了的决心。。:)
x*e
22 楼
有人试过植物里面好用么?
L*s
39 楼
刚好看到这个,觉得还不错,可以试试做做。
http://www.yogajournal.com/video/video/hip-openers-and-twists/
【在 t******g 的大作中提到】
: 正在用力搞,
http://www.yogajournal.com/video/video/hip-openers-and-twists/
【在 t******g 的大作中提到】
: 正在用力搞,
t*g
45 楼
身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk
【在 t****h 的大作中提到】
: 我练习盘腿是为了打坐时可以容易点,时间长点。还有听说对身体健康有帮助,就更有
: 动力了。
: 你认为这种想法有贪,对吗?你认为应该怎么对待更这个问题更合适呢?
http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk
【在 t****h 的大作中提到】
: 我练习盘腿是为了打坐时可以容易点,时间长点。还有听说对身体健康有帮助,就更有
: 动力了。
: 你认为这种想法有贪,对吗?你认为应该怎么对待更这个问题更合适呢?
t*g
46 楼
谢了!!
【在 L**********s 的大作中提到】
: 刚好看到这个,觉得还不错,可以试试做做。
: http://www.yogajournal.com/video/video/hip-openers-and-twists/
【在 L**********s 的大作中提到】
: 刚好看到这个,觉得还不错,可以试试做做。
: http://www.yogajournal.com/video/video/hip-openers-and-twists/
t*h
48 楼
可以双盘的外道而且可以如禅定的很多,难道就可以解脱了吗?
经书中有行者双腿被打折之后,一夜勤修,第二日证得阿罗汉的故事。不双盘就不能解
脱了吗?
还是去找个禅师修习吧!没有正见,修行很容易迷路哟!
【在 t******g 的大作中提到】
: 身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
: http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
: 个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk
经书中有行者双腿被打折之后,一夜勤修,第二日证得阿罗汉的故事。不双盘就不能解
脱了吗?
还是去找个禅师修习吧!没有正见,修行很容易迷路哟!
【在 t******g 的大作中提到】
: 身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
: http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
: 个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk
t*h
49 楼
http://www.hongshi.org.tw/writings.aspx?code=7F9983E37C2D41BD73
提舍是舍衛城中一個大家族的首長,他捨棄價值四億元的黃金而出家,住在遠離
人間的森林裡修行。他的弟婦派遣五百個強盜搜查森林,以便殺害他。
當強盜們圍繞著長老時,他問說:「居士們,你們為什麼來到這裡?」強盜
們回答說:「為了要殺你。」長老說:「在有擔保的情況下,請給我這一夜的生命。」
強盜們說:「沙門,在這樣的森林裡,誰能擔保你不會逃走呢?」於是長老拿起一塊大
石頭,將自己兩腿的骨頭都打斷,然後說:「居士們,這樣的擔保可以嗎?」知道長老
已經無法逃走,強盜們就暫時離開他,走到經行道的一端,燃起火堆,躺在地上睡覺。
當時長老精進地修行。如何修行呢?疏鈔中解釋說:長老不去注意因腿骨斷
折所產生的痛苦,壓抑著身體的痛苦,而思惟自己的戒行。由於他的戒行清淨,所以心
中生起愉悅與歡喜。由於愉悅與歡喜,身體的痛苦消失了。然後他修行止禪以培育定力
,再以該定力作為基礎,逐步地修行觀禪,在當天夜間的三個時段裡,他完成了沙門的
任務。在黎明的那一刻,他證悟了阿羅漢果,並且說出下列這些莊嚴的話:
「打斷我的雙腿給你們作為擔保,
我厭惡且不願以染污的心而死。」
如此思惟之後我見到諸法實相,
並且在黎明時證悟阿羅漢果位。
提舍是舍衛城中一個大家族的首長,他捨棄價值四億元的黃金而出家,住在遠離
人間的森林裡修行。他的弟婦派遣五百個強盜搜查森林,以便殺害他。
當強盜們圍繞著長老時,他問說:「居士們,你們為什麼來到這裡?」強盜
們回答說:「為了要殺你。」長老說:「在有擔保的情況下,請給我這一夜的生命。」
強盜們說:「沙門,在這樣的森林裡,誰能擔保你不會逃走呢?」於是長老拿起一塊大
石頭,將自己兩腿的骨頭都打斷,然後說:「居士們,這樣的擔保可以嗎?」知道長老
已經無法逃走,強盜們就暫時離開他,走到經行道的一端,燃起火堆,躺在地上睡覺。
當時長老精進地修行。如何修行呢?疏鈔中解釋說:長老不去注意因腿骨斷
折所產生的痛苦,壓抑著身體的痛苦,而思惟自己的戒行。由於他的戒行清淨,所以心
中生起愉悅與歡喜。由於愉悅與歡喜,身體的痛苦消失了。然後他修行止禪以培育定力
,再以該定力作為基礎,逐步地修行觀禪,在當天夜間的三個時段裡,他完成了沙門的
任務。在黎明的那一刻,他證悟了阿羅漢果,並且說出下列這些莊嚴的話:
「打斷我的雙腿給你們作為擔保,
我厭惡且不願以染污的心而死。」
如此思惟之後我見到諸法實相,
並且在黎明時證悟阿羅漢果位。
t*g
50 楼
如果你觉得我纠结于双盘(看我的帖子觉得是吗?), 那是说地有理。
正如我以前说的, 双盘可能更稳定些, 不然经书里也不会经常说跏趺坐。
至于网上有人说一定要双盘, 我没有资格评论, 我转过的帖子的例子里面, 散盘的
也可以的
你说的这个故事, 如果是对治我可能是纠结于双盘的思想, 或许是有效的,
(不过, 如何知道这个行者以前是如何盘腿的内?:D 所以说对治脱了环境也是一种偏颇
一夜勤修,第二日证得阿罗汉, 如果强调一夜, 似乎又是忽视了“以前”的用功了,
括弧里的不是对你说的)
下个礼拜会去葛因卡10日禅, 我明天以后基本就不上来了, WRON法友的10日禅应该是
礼拜天
出来, 我怕他出来到版上发感想, 对我有“影响“, LOL
如果你觉得我说的 “治苦”的思维不是正见, 求开启, 我的思维是从贴的link里面
来的
有偏差的可能性比较大, 我贴其中一段, 最后, 还是要感谢指点。
。。。。
2.1.1 四种姿势
我们以四种姿势观照身心:
行、住、坐、卧
在《大念处经》的纲要中有四种基本或主要的姿势,因为身比心容易观照,所以我们由
观身着
手。身比较容易观照的原因是 1)身较「粗显」,心较微细。2)四种姿势随时存在。(心
的所缘——如
听、看只有在某些时间起作用。)3)色身比其它所缘更容易观苦,因为我们观照四种姿
势时,苦总是
无法隐蔽的。
2.1.2 我们观照所需的工具:
1.精进
2.正念
3.正知
4.如理作意(如理思惟)
3
5.觉察力
精进是积极断烦恼。
正念是念住于四念处。
正知是可以启发智慧,袪除愚痴或邪见的清楚认知。
用三心观照各种姿势:
1)精进,不精进你就无法体会整个坐的色身。例如,妄想使你偏离了当下,精进心提起
正念正
知使你回到当下。
2)正念使你明白你坐的样子——姿势。
3)正知使你知道整个姿势即是坐的色身。
4)如理作意意即以正见将个人的注意力集中在某件事情上,诸如知道任何动作的原因或
坐的色
身的实际情况。如理作意提醒你不管饮食、沐浴、如厕或做其它任何事,你都是为了治
苦而做的,
不是为了寻乐而做的。如理作意也提醒你,变换姿势只是为了治苦而已。
5)觉察力是观照。它告诉你修得是否正确,觉察力可以使你知道是否偏离了当下。
2.1.3 中道
中道袪除或止息了喜欢或不喜欢,执取或厌恶。中道对于此修法是非常重要的。如果你
能具足
正念正知地活在当下,喜欢或不喜欢就无法生起了。
这也是为什么我们:
1)每当苦产生的时候,就要改变姿势来治苦,因为苦迫使色身变换姿势。你必须保持「
如理作
意」以防止烦恼介入。所以变换姿势的时候必须保持良好的如理作意和觉察力,才能使
你注意到修
行是否与烦恼相应。例如,坐的时候,我们感到有点痛,我们不喜欢这个姿势(起厌恶
心)因而起贪欲
想变换到一个新的姿势。唯独苦逼迫我们的时候,我们才可以改变姿势。
我们不要坐到疼痛完全消失,因为这样会产生烦恼——以为我可以控制疼痛的邪见(事
实上,身
心皆无法控制,它们是无我的)。然而有些修行者为了见到苦设法坐更久或者坐到疼痛
完全消失,但
是这种苦并不真实,因为这种苦是人为因素刻意造成的。有些修行者想坐更久是为了能
加深禅定,
因为他们认为这样能够引发智慧,但是这样做只是徒增烦恼而已。记住,四念处只是修
心而非修身;
如果心错了,身也会跟着做错的。例如,心里认为双跏趺坐比较容易见实相——心会令
身结双跏趺
坐。
2)不要想从任何姿势得到舒适或快乐。也不要觉得那一种姿势比另一种姿势好,因为每
一种姿
势都是不实的:无常、苦、无我的。
.....
【在 t******h 的大作中提到】
: 可以双盘的外道而且可以如禅定的很多,难道就可以解脱了吗?
: 经书中有行者双腿被打折之后,一夜勤修,第二日证得阿罗汉的故事。不双盘就不能解
: 脱了吗?
: 还是去找个禅师修习吧!没有正见,修行很容易迷路哟!
正如我以前说的, 双盘可能更稳定些, 不然经书里也不会经常说跏趺坐。
至于网上有人说一定要双盘, 我没有资格评论, 我转过的帖子的例子里面, 散盘的
也可以的
你说的这个故事, 如果是对治我可能是纠结于双盘的思想, 或许是有效的,
(不过, 如何知道这个行者以前是如何盘腿的内?:D 所以说对治脱了环境也是一种偏颇
一夜勤修,第二日证得阿罗汉, 如果强调一夜, 似乎又是忽视了“以前”的用功了,
括弧里的不是对你说的)
下个礼拜会去葛因卡10日禅, 我明天以后基本就不上来了, WRON法友的10日禅应该是
礼拜天
出来, 我怕他出来到版上发感想, 对我有“影响“, LOL
如果你觉得我说的 “治苦”的思维不是正见, 求开启, 我的思维是从贴的link里面
来的
有偏差的可能性比较大, 我贴其中一段, 最后, 还是要感谢指点。
。。。。
2.1.1 四种姿势
我们以四种姿势观照身心:
行、住、坐、卧
在《大念处经》的纲要中有四种基本或主要的姿势,因为身比心容易观照,所以我们由
观身着
手。身比较容易观照的原因是 1)身较「粗显」,心较微细。2)四种姿势随时存在。(心
的所缘——如
听、看只有在某些时间起作用。)3)色身比其它所缘更容易观苦,因为我们观照四种姿
势时,苦总是
无法隐蔽的。
2.1.2 我们观照所需的工具:
1.精进
2.正念
3.正知
4.如理作意(如理思惟)
3
5.觉察力
精进是积极断烦恼。
正念是念住于四念处。
正知是可以启发智慧,袪除愚痴或邪见的清楚认知。
用三心观照各种姿势:
1)精进,不精进你就无法体会整个坐的色身。例如,妄想使你偏离了当下,精进心提起
正念正
知使你回到当下。
2)正念使你明白你坐的样子——姿势。
3)正知使你知道整个姿势即是坐的色身。
4)如理作意意即以正见将个人的注意力集中在某件事情上,诸如知道任何动作的原因或
坐的色
身的实际情况。如理作意提醒你不管饮食、沐浴、如厕或做其它任何事,你都是为了治
苦而做的,
不是为了寻乐而做的。如理作意也提醒你,变换姿势只是为了治苦而已。
5)觉察力是观照。它告诉你修得是否正确,觉察力可以使你知道是否偏离了当下。
2.1.3 中道
中道袪除或止息了喜欢或不喜欢,执取或厌恶。中道对于此修法是非常重要的。如果你
能具足
正念正知地活在当下,喜欢或不喜欢就无法生起了。
这也是为什么我们:
1)每当苦产生的时候,就要改变姿势来治苦,因为苦迫使色身变换姿势。你必须保持「
如理作
意」以防止烦恼介入。所以变换姿势的时候必须保持良好的如理作意和觉察力,才能使
你注意到修
行是否与烦恼相应。例如,坐的时候,我们感到有点痛,我们不喜欢这个姿势(起厌恶
心)因而起贪欲
想变换到一个新的姿势。唯独苦逼迫我们的时候,我们才可以改变姿势。
我们不要坐到疼痛完全消失,因为这样会产生烦恼——以为我可以控制疼痛的邪见(事
实上,身
心皆无法控制,它们是无我的)。然而有些修行者为了见到苦设法坐更久或者坐到疼痛
完全消失,但
是这种苦并不真实,因为这种苦是人为因素刻意造成的。有些修行者想坐更久是为了能
加深禅定,
因为他们认为这样能够引发智慧,但是这样做只是徒增烦恼而已。记住,四念处只是修
心而非修身;
如果心错了,身也会跟着做错的。例如,心里认为双跏趺坐比较容易见实相——心会令
身结双跏趺
坐。
2)不要想从任何姿势得到舒适或快乐。也不要觉得那一种姿势比另一种姿势好,因为每
一种姿
势都是不实的:无常、苦、无我的。
.....
【在 t******h 的大作中提到】
: 可以双盘的外道而且可以如禅定的很多,难道就可以解脱了吗?
: 经书中有行者双腿被打折之后,一夜勤修,第二日证得阿罗汉的故事。不双盘就不能解
: 脱了吗?
: 还是去找个禅师修习吧!没有正见,修行很容易迷路哟!
t*h
51 楼
下载了,感觉挺有帮助的。谢谢。
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【在 t******g 的大作中提到】
: 身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
: http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
: 个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk
[发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]
【在 t******g 的大作中提到】
: 身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
: http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
: 个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk
j*g
55 楼
头大坐起来痛。
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