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能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector
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能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector# Biology - 生物学
t*g
1
正在用力搞,
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w*w
2
能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector,谁能推荐一个啊?谢谢
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w*w
4
up
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t*h
5
这个不要强求吧!先试着单盘,若单盘不来,试着散盘,或者天神坐,跪都可以,关键
是保持不动或少动,心能安住。

【在 t******g 的大作中提到】
: 正在用力搞,
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s*s
6
教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵

【在 w********w 的大作中提到】
: 能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector,谁能推荐一个啊?谢谢
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M*A
7
天神怎么坐

【在 t******h 的大作中提到】
: 这个不要强求吧!先试着单盘,若单盘不来,试着散盘,或者天神坐,跪都可以,关键
: 是保持不动或少动,心能安住。

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w*w
8
谢谢。好主意。类似的方法想过了, 就是不想太多的cloning, 最好有卖的现成的
vector, 知道有同时表达2个的,不知道3个或以上的。

【在 s******s 的大作中提到】
: 教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
: 2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
: mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
: 有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
: 个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
: 是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
: 这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
: neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
: 四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵

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t*g
9
谢了, 老胳膊老腿真不能强求, 想说的是以前butterfly stretch
我做地并不正确, 让脚和身体接近, 我没理解, 以为是掰脚贴身体
后跟却没有贴近身体。。。。唉
看了视频才知道

【在 t******h 的大作中提到】
: 这个不要强求吧!先试着单盘,若单盘不来,试着散盘,或者天神坐,跪都可以,关键
: 是保持不动或少动,心能安住。

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l*g
10
表达几个受制于plasmid的大小. 一个vector, 你可以随便装几个expression
cassettes. 工业界用这种方法生产蛋白, 都是每升以克计

【在 w********w 的大作中提到】
: 谢谢。好主意。类似的方法想过了, 就是不想太多的cloning, 最好有卖的现成的
: vector, 知道有同时表达2个的,不知道3个或以上的。

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M*a
12
nice.

【在 s******s 的大作中提到】
: 教你一招,这个不需要啥特殊载体,直接加2A就可以了
: 2A包括T2A,P2A等等,大多数是十几二十个aa的sequence, 能够
: mediate co-translational cleavage,翻成白话就是一个蛋白里面
: 有这个sequence, 一边翻译一边就被切两半了。你要做的就是表达一
: 个大蛋白,中间插上2A,表达出来自己就变成四五个小蛋白了,好处
: 是表达量相同;类似的可以加ires,不过后面蛋白表达量小。
: 这么多基因怎么clone成一个大蛋白呢并且加2A呢?很简单,google
: neb gibson assembly mix就知道了。PCR的时候头上加部分2A sequence,
: 四五个片段放在一起,加mix "biu。。。"的一声就变成一个片段了,呵呵

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s*s
14
现成卖的不知道,不过表达四个以上的很正常,比如ips的vector. 问题是
每一个都装上下游序列实在太大了,而且克隆起来很不方遍。所以我建议你
用2A配合gibson,克隆方便,体积小

【在 w********w 的大作中提到】
: 谢谢。好主意。类似的方法想过了, 就是不想太多的cloning, 最好有卖的现成的
: vector, 知道有同时表达2个的,不知道3个或以上的。

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t*g
15
可能是这样的

【在 M*******A 的大作中提到】
: 天神怎么坐
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w*w
16
谢谢。可以考虑2A的方法。 不过ips vector你有名字 和相关信息吗?

【在 s******s 的大作中提到】
: 现成卖的不知道,不过表达四个以上的很正常,比如ips的vector. 问题是
: 每一个都装上下游序列实在太大了,而且克隆起来很不方遍。所以我建议你
: 用2A配合gibson,克隆方便,体积小

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Y*u
17
腿是盘不坏的, 大概需要点疼死算了的决心。。:)
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c*a
18
好主意!
F2A,E2A,P2A,T2A 的序列由长到短,哪个切割效率比较高?如果效率相当,我倾向于用
T2A,毕竟短一些。

【在 s******s 的大作中提到】
: 现成卖的不知道,不过表达四个以上的很正常,比如ips的vector. 问题是
: 每一个都装上下游序列实在太大了,而且克隆起来很不方遍。所以我建议你
: 用2A配合gibson,克隆方便,体积小

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t*g
19
开跨有人帮忙最好

【在 Y**u 的大作中提到】
: 腿是盘不坏的, 大概需要点疼死算了的决心。。:)
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y*m
20
heard of PCR cloning, clontech

【在 w********w 的大作中提到】
: 谢谢。好主意。类似的方法想过了, 就是不想太多的cloning, 最好有卖的现成的
: vector, 知道有同时表达2个的,不知道3个或以上的。

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L*s
21
双盘不双盘的,不要着急,慢慢来。双盘不行先单盘,单盘不行就先。。。那个,怎么
舒服怎么来。
关键是open hip,瑜伽里的pigeon pose,可以帮助。

【在 t******g 的大作中提到】
: 正在用力搞,
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x*e
22
有人试过植物里面好用么?
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t*g
23
非常感谢!!
散盘还凑合, 超过15分钟就不知道了。。。。
应该早点搞的。。。

【在 L**********s 的大作中提到】
: 双盘不双盘的,不要着急,慢慢来。双盘不行先单盘,单盘不行就先。。。那个,怎么
: 舒服怎么来。
: 关键是open hip,瑜伽里的pigeon pose,可以帮助。

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s*s
24
不记得了,就是四factor那种

【在 w********w 的大作中提到】
: 谢谢。可以考虑2A的方法。 不过ips vector你有名字 和相关信息吗?
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l*a
25
你双盘的目的是什么?

【在 t******g 的大作中提到】
: 正在用力搞,
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s*s
26
P2A,T2A都不错啊

【在 c**a 的大作中提到】
: 好主意!
: F2A,E2A,P2A,T2A 的序列由长到短,哪个切割效率比较高?如果效率相当,我倾向于用
: T2A,毕竟短一些。

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l*a
27
双盘很疼的情况对同一个人,要看在什么地点。
我有过疼死的经历,受不了放下来了。
受得了,一点不疼的情况,也不见得好,没啥好的。
我宁可去疼的地点打坐。
和地点,环境,相关。

【在 Y**u 的大作中提到】
: 腿是盘不坏的, 大概需要点疼死算了的决心。。:)
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w*w
28
就是有个问题这些放在任一express vector都行吧, 还有就是cleave后会留17-20aa

【在 s******s 的大作中提到】
: P2A,T2A都不错啊
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M*A
29
这脚丫子看上去很奇怪啊

【在 t******g 的大作中提到】
: 可能是这样的
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w*w
30
有vector的信息吗?谢谢

【在 y****m 的大作中提到】
: heard of PCR cloning, clontech
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l*a
31
原来是练瑜伽的。
不管练什么,都是想得到好处吧:)
其实双盘的动作不难,很多瑜伽动作难度很大。

【在 M*******A 的大作中提到】
: 这脚丫子看上去很奇怪啊
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l*a
32
果然是瑜伽。锻炼身体,挺好的:)

【在 L**********s 的大作中提到】
: 双盘不双盘的,不要着急,慢慢来。双盘不行先单盘,单盘不行就先。。。那个,怎么
: 舒服怎么来。
: 关键是open hip,瑜伽里的pigeon pose,可以帮助。

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t*g
33
我错了
天神坐应该是这样的

【在 M*******A 的大作中提到】
: 这脚丫子看上去很奇怪啊
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t*g
34
版主说要吃痛是指开胯的练习

【在 l**a 的大作中提到】
: 双盘很疼的情况对同一个人,要看在什么地点。
: 我有过疼死的经历,受不了放下来了。
: 受得了,一点不疼的情况,也不见得好,没啥好的。
: 我宁可去疼的地点打坐。
: 和地点,环境,相关。

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M*A
35
这姿势看上去更奇怪啊,哈哈

【在 t******g 的大作中提到】
: 我错了
: 天神坐应该是这样的

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t*g
36
本质在于稳而能动
个人的flexibility都同
没啥奇怪, 哈哈

【在 M*******A 的大作中提到】
: 这姿势看上去更奇怪啊,哈哈
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L*s
37
分人,有些动作对有些人来说,难,对另外一些人来说,简直轻而易举。而同样一个人
,做同样的动作,今天容易明天难。要listen to your body,不要勉强。
至于痛的感觉,也是一样,要listen to your body,有时候确实是illusion,但是,
有时候硬撑的话,也会伤了身体。

【在 l**a 的大作中提到】
: 原来是练瑜伽的。
: 不管练什么,都是想得到好处吧:)
: 其实双盘的动作不难,很多瑜伽动作难度很大。

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L*s
38
别想那么多,船到桥头自然直。还没打坐呢,就老想着双盘单盘的,心思就已经乱了。

【在 t******g 的大作中提到】
: 非常感谢!!
: 散盘还凑合, 超过15分钟就不知道了。。。。
: 应该早点搞的。。。

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l*a
40
你说的是你的体会,和我想说的完全不同一回事。
在网络被误解很平常,我就不解释我的体会了。

【在 L**********s 的大作中提到】
: 分人,有些动作对有些人来说,难,对另外一些人来说,简直轻而易举。而同样一个人
: ,做同样的动作,今天容易明天难。要listen to your body,不要勉强。
: 至于痛的感觉,也是一样,要listen to your body,有时候确实是illusion,但是,
: 有时候硬撑的话,也会伤了身体。

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l*a
41
我再多说一句,跳舞,搞体操的,双盘很容易,
在某种环境下仍然会疼。
疼不在于开筋拉骨头,在于消业。我闭嘴了。所以和外界环境有关系。
闭嘴了。。。

【在 t******g 的大作中提到】
: 版主说要吃痛是指开胯的练习
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t*h
42
我前段时间也练习盘腿了几个月,有点进步,但也是双盘无能。近来打坐,走路多了点
,练习盘腿少了。看了你这贴子,又激起我练习盘腿的欲望了。。。

【在 t******g 的大作中提到】
: 正在用力搞,
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t*h
43
我练习盘腿是为了打坐时可以容易点,时间长点。还有听说对身体健康有帮助,就更有
动力了。
你认为这种想法有贪,对吗?你认为应该怎么对待更这个问题更合适呢?

【在 l**a 的大作中提到】
: 原来是练瑜伽的。
: 不管练什么,都是想得到好处吧:)
: 其实双盘的动作不难,很多瑜伽动作难度很大。

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t*g
44
从这个角度看, 也可以这么认为, 不过感觉太过执着了也是不行的吧?
一边拉, 一边想我在消业。。。。

【在 l**a 的大作中提到】
: 我再多说一句,跳舞,搞体操的,双盘很容易,
: 在某种环境下仍然会疼。
: 疼不在于开筋拉骨头,在于消业。我闭嘴了。所以和外界环境有关系。
: 闭嘴了。。。

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t*g
45
身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk

【在 t****h 的大作中提到】
: 我练习盘腿是为了打坐时可以容易点,时间长点。还有听说对身体健康有帮助,就更有
: 动力了。
: 你认为这种想法有贪,对吗?你认为应该怎么对待更这个问题更合适呢?

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t*g
47
慢慢来吧, 少量多次, 我的感觉是每次弄完要有感觉才行
不过要当心, 不要伤到knee , 这个是关键, 硬上会伤的,
网上说比较多人hip lower back 没开就硬上, 然后就有lotus knee了

【在 t****h 的大作中提到】
: 我前段时间也练习盘腿了几个月,有点进步,但也是双盘无能。近来打坐,走路多了点
: ,练习盘腿少了。看了你这贴子,又激起我练习盘腿的欲望了。。。

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t*h
48
可以双盘的外道而且可以如禅定的很多,难道就可以解脱了吗?
经书中有行者双腿被打折之后,一夜勤修,第二日证得阿罗汉的故事。不双盘就不能解
脱了吗?
还是去找个禅师修习吧!没有正见,修行很容易迷路哟!

【在 t******g 的大作中提到】
: 身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
: http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
: 个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk

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t*h
49
http://www.hongshi.org.tw/writings.aspx?code=7F9983E37C2D41BD73
提舍是舍衛城中一個大家族的首長,他捨棄價值四億元的黃金而出家,住在遠離
人間的森林裡修行。他的弟婦派遣五百個強盜搜查森林,以便殺害他。
當強盜們圍繞著長老時,他問說:「居士們,你們為什麼來到這裡?」強盜
們回答說:「為了要殺你。」長老說:「在有擔保的情況下,請給我這一夜的生命。」
強盜們說:「沙門,在這樣的森林裡,誰能擔保你不會逃走呢?」於是長老拿起一塊大
石頭,將自己兩腿的骨頭都打斷,然後說:「居士們,這樣的擔保可以嗎?」知道長老
已經無法逃走,強盜們就暫時離開他,走到經行道的一端,燃起火堆,躺在地上睡覺。
當時長老精進地修行。如何修行呢?疏鈔中解釋說:長老不去注意因腿骨斷
折所產生的痛苦,壓抑著身體的痛苦,而思惟自己的戒行。由於他的戒行清淨,所以心
中生起愉悅與歡喜。由於愉悅與歡喜,身體的痛苦消失了。然後他修行止禪以培育定力
,再以該定力作為基礎,逐步地修行觀禪,在當天夜間的三個時段裡,他完成了沙門的
任務。在黎明的那一刻,他證悟了阿羅漢果,並且說出下列這些莊嚴的話:
「打斷我的雙腿給你們作為擔保,
我厭惡且不願以染污的心而死。」
如此思惟之後我見到諸法實相,
並且在黎明時證悟阿羅漢果位。
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t*g
50
如果你觉得我纠结于双盘(看我的帖子觉得是吗?), 那是说地有理。
正如我以前说的, 双盘可能更稳定些, 不然经书里也不会经常说跏趺坐。
至于网上有人说一定要双盘, 我没有资格评论, 我转过的帖子的例子里面, 散盘的
也可以的
你说的这个故事, 如果是对治我可能是纠结于双盘的思想, 或许是有效的,
(不过, 如何知道这个行者以前是如何盘腿的内?:D 所以说对治脱了环境也是一种偏颇
一夜勤修,第二日证得阿罗汉, 如果强调一夜, 似乎又是忽视了“以前”的用功了,
括弧里的不是对你说的)
下个礼拜会去葛因卡10日禅, 我明天以后基本就不上来了, WRON法友的10日禅应该是
礼拜天
出来, 我怕他出来到版上发感想, 对我有“影响“, LOL
如果你觉得我说的 “治苦”的思维不是正见, 求开启, 我的思维是从贴的link里面
来的
有偏差的可能性比较大, 我贴其中一段, 最后, 还是要感谢指点。
。。。。
2.1.1 四种姿势
我们以四种姿势观照身心:
行、住、坐、卧
在《大念处经》的纲要中有四种基本或主要的姿势,因为身比心容易观照,所以我们由
观身着
手。身比较容易观照的原因是 1)身较「粗显」,心较微细。2)四种姿势随时存在。(心
的所缘——如
听、看只有在某些时间起作用。)3)色身比其它所缘更容易观苦,因为我们观照四种姿
势时,苦总是
无法隐蔽的。
2.1.2 我们观照所需的工具:
1.精进
2.正念
3.正知
4.如理作意(如理思惟)
3
5.觉察力
精进是积极断烦恼。
正念是念住于四念处。
正知是可以启发智慧,袪除愚痴或邪见的清楚认知。
用三心观照各种姿势:
1)精进,不精进你就无法体会整个坐的色身。例如,妄想使你偏离了当下,精进心提起
正念正
知使你回到当下。
2)正念使你明白你坐的样子——姿势。
3)正知使你知道整个姿势即是坐的色身。
4)如理作意意即以正见将个人的注意力集中在某件事情上,诸如知道任何动作的原因或
坐的色
身的实际情况。如理作意提醒你不管饮食、沐浴、如厕或做其它任何事,你都是为了治
苦而做的,
不是为了寻乐而做的。如理作意也提醒你,变换姿势只是为了治苦而已。
5)觉察力是观照。它告诉你修得是否正确,觉察力可以使你知道是否偏离了当下。
2.1.3 中道
中道袪除或止息了喜欢或不喜欢,执取或厌恶。中道对于此修法是非常重要的。如果你
能具足
正念正知地活在当下,喜欢或不喜欢就无法生起了。
这也是为什么我们:
1)每当苦产生的时候,就要改变姿势来治苦,因为苦迫使色身变换姿势。你必须保持「
如理作
意」以防止烦恼介入。所以变换姿势的时候必须保持良好的如理作意和觉察力,才能使
你注意到修
行是否与烦恼相应。例如,坐的时候,我们感到有点痛,我们不喜欢这个姿势(起厌恶
心)因而起贪欲
想变换到一个新的姿势。唯独苦逼迫我们的时候,我们才可以改变姿势。
我们不要坐到疼痛完全消失,因为这样会产生烦恼——以为我可以控制疼痛的邪见(事
实上,身
心皆无法控制,它们是无我的)。然而有些修行者为了见到苦设法坐更久或者坐到疼痛
完全消失,但
是这种苦并不真实,因为这种苦是人为因素刻意造成的。有些修行者想坐更久是为了能
加深禅定,
因为他们认为这样能够引发智慧,但是这样做只是徒增烦恼而已。记住,四念处只是修
心而非修身;
如果心错了,身也会跟着做错的。例如,心里认为双跏趺坐比较容易见实相——心会令
身结双跏趺
坐。
2)不要想从任何姿势得到舒适或快乐。也不要觉得那一种姿势比另一种姿势好,因为每
一种姿
势都是不实的:无常、苦、无我的。
.....

【在 t******h 的大作中提到】
: 可以双盘的外道而且可以如禅定的很多,难道就可以解脱了吗?
: 经书中有行者双腿被打折之后,一夜勤修,第二日证得阿罗汉的故事。不双盘就不能解
: 脱了吗?
: 还是去找个禅师修习吧!没有正见,修行很容易迷路哟!

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t*h
51
下载了,感觉挺有帮助的。谢谢。

[发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]

【在 t******g 的大作中提到】
: 身念处的说法, 你可以视作为 “治苦”
: http://www.dhammatalks.net/Chinese/Achaan_Naeb_Vipassana_Bhavan
: 个人意见,仅供参考, 没有老师,自己禅修是个risk

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t*g
52
共勉

【在 t****h 的大作中提到】
: 下载了,感觉挺有帮助的。谢谢。
:
: [发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]

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l*o
53

你是该闭嘴了,以免误导他人。
业障,之业在于无明,障则在于喜好,并不在于腿。修在于行住坐卧,禅亦不在坐,去
业需破无明,除障在于无我,并非跏趺坐这种姿势能消灭无量劫的业障。

【在 l**a 的大作中提到】
: 我再多说一句,跳舞,搞体操的,双盘很容易,
: 在某种环境下仍然会疼。
: 疼不在于开筋拉骨头,在于消业。我闭嘴了。所以和外界环境有关系。
: 闭嘴了。。。

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t*g
54
我明白她的意思, 你二人说地都有道理, 其实不冲突的
不过她说地有点不清楚, 所以容易引起误解

【在 l*****o 的大作中提到】
:
: 你是该闭嘴了,以免误导他人。
: 业障,之业在于无明,障则在于喜好,并不在于腿。修在于行住坐卧,禅亦不在坐,去
: 业需破无明,除障在于无我,并非跏趺坐这种姿势能消灭无量劫的业障。

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j*g
55
头大坐起来痛。
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