his-tagged蛋白纯化问题# Biology - 生物学
j*a
1 楼
有两个跨膜区,不可溶,大量存在内涵体中。问题在于,把蛋白分离出来很容易,产量
很高,电泳后蛋白大小正常,与理论值相符。
可是:
1. 和cobalt 或者镍resin混合后,混合物中出现很多块状物(聚集在一起,RESIN很难
沉下来,与溶液清晰分层)
2. 过柱子后,蛋白莫名其妙就消失了,看到的那些带比理论值小很多。比如,理论值
90kDa,那些小带只有40左右。
同时我们纯化去掉跨膜区的同一个蛋白,一点问题都没有。
很高,电泳后蛋白大小正常,与理论值相符。
可是:
1. 和cobalt 或者镍resin混合后,混合物中出现很多块状物(聚集在一起,RESIN很难
沉下来,与溶液清晰分层)
2. 过柱子后,蛋白莫名其妙就消失了,看到的那些带比理论值小很多。比如,理论值
90kDa,那些小带只有40左右。
同时我们纯化去掉跨膜区的同一个蛋白,一点问题都没有。