求助：工业化蛋白纯化为什么不用tag？万分感谢# Biology - 生物学
h*e
1 楼
我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
d*n
2 楼
cost.
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
s*9
3 楼
哪些工业化的蛋白？
e*s
4 楼
专利费用？
o*u
5 楼
特异性蛋白酶的价格太高。工业化蛋白生产如果要酶切处理，成本可以是蛋白发酵粗提
成本的几十倍甚至上百倍。所以，不是不得已一般不会用的。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
成本的几十倍甚至上百倍。所以，不是不得已一般不会用的。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
b*n
6 楼
不知道工业化蛋白纯化怎么弄的
是不是盐析+离子交换柱？
感觉很多限制性内切酶的生产应该是用tag的吧
另外现在来自虾的碱性磷酸酶很少了，不少公司开发来自E. coli的重组蛋白
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
是不是盐析+离子交换柱？
感觉很多限制性内切酶的生产应该是用tag的吧
另外现在来自虾的碱性磷酸酶很少了，不少公司开发来自E. coli的重组蛋白
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
s*9
7 楼
我问过NEB的人，如果要用histag，他们得付专利费。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
s*9
8 楼
NEB大部分的限制性内切酶都是recombinant的，一般不带tag。
提纯是通常就是离子交换，分子筛和疏水作用，要2-6步达到95%的纯度。
【在 b******n 的大作中提到】
: 不知道工业化蛋白纯化怎么弄的
: 是不是盐析+离子交换柱？
: 感觉很多限制性内切酶的生产应该是用tag的吧
: 另外现在来自虾的碱性磷酸酶很少了，不少公司开发来自E. coli的重组蛋白
提纯是通常就是离子交换，分子筛和疏水作用，要2-6步达到95%的纯度。
【在 b******n 的大作中提到】
: 不知道工业化蛋白纯化怎么弄的
: 是不是盐析+离子交换柱？
: 感觉很多限制性内切酶的生产应该是用tag的吧
: 另外现在来自虾的碱性磷酸酶很少了，不少公司开发来自E. coli的重组蛋白
m*b
9 楼
发明his tag的人岂不是要恨死他们了
这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了
这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了
b*n
10 楼
好像清华罗永章的那个抗肿瘤药恩度就是包含his tag的
不知道有没有付专利
【在 m*b 的大作中提到】
: 发明his tag的人岂不是要恨死他们了
: 这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了
不知道有没有付专利
【在 m*b 的大作中提到】
: 发明his tag的人岂不是要恨死他们了
: 这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了
A*y
11 楼
Protein A uses proprietary secretion tag, you don't even have to lyse the
cells. Just scoop up the media and do a quick clean up. A lot of industrial
protein is made this way.
cells. Just scoop up the media and do a quick clean up. A lot of industrial
protein is made this way.
h*e
12 楼
谢谢各位的回复。
本人想自学这方面的知识，不知哪位能推荐一下这方面的经典书籍或文献？最好能有一
些实例。
万分感谢。
本人想自学这方面的知识，不知哪位能推荐一下这方面的经典书籍或文献？最好能有一
些实例。
万分感谢。
h*e
13 楼
his-tag和GST-tag的专利应该过期了吧。
【在 s******9 的大作中提到】
: 我问过NEB的人，如果要用histag，他们得付专利费。
【在 s******9 的大作中提到】
: 我问过NEB的人，如果要用histag，他们得付专利费。
m*c
14 楼
Tag的作用是用来提纯。对于产量低、纯化困难的旦白是有效的。但是对于production
level来说，还要考虑单位产量的问题，除纯度外。有Tag的就需要増加纯化部骤，因此
就会增加纯化过程中的损耗。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
level来说，还要考虑单位产量的问题，除纯度外。有Tag的就需要増加纯化部骤，因此
就会增加纯化过程中的损耗。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
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