g*0
2 楼
现在都是e-filing, 还是regular filing?
我的律师用的是regular filing （Eb1-b). 有经验的能不能给扫个盲。两个区别大吗
？是不是e-filing 好一点。我属于TSC.
我的律师用的是regular filing （Eb1-b). 有经验的能不能给扫个盲。两个区别大吗
？是不是e-filing 好一点。我属于TSC.
s*8
3 楼
刚开始做p53的一点调控，看了很多文章，想重复一下1个实验, p53 half life
我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
请求建议
我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
请求建议
h*f
4 楼
申的什么卡？什么时候申的？
t*6
5 楼
If you are in TSC, then it does not matter
r*e
6 楼
哈哈，p53在293T中被stabilized by sv40 t-antigen.
做p53非常tricky，要读很多文献，先掌握基本情况。
新手不建议跳坑。
ml.
【在 s******8 的大作中提到】
: 刚开始做p53的一点调控，看了很多文章，想重复一下1个实验, p53 half life
: 我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
: 我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
: 是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
: 请求建议
做p53非常tricky，要读很多文献，先掌握基本情况。
新手不建议跳坑。
ml.
【在 s******8 的大作中提到】
: 刚开始做p53的一点调控，看了很多文章，想重复一下1个实验, p53 half life
: 我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
: 我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
: 是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
: 请求建议
i*g
7 楼
cong
baozi
【在 S*********2 的大作中提到】
: Re, thanks for sharing from you!
baozi
【在 S*********2 的大作中提到】
: Re, thanks for sharing from you!
s*8
8 楼
现在是非要碰这个呀， 有什么建议吗？
什么cell line好做p53啊？
什么cell line好做p53啊？
w*c
9 楼
cong
j*n
10 楼
我做了几个细胞株大概都是4-6小时之间
你要是做癌细胞可要小心了 不少癌细胞株 尤其是乳腺癌的 表达极少 或突变检测不到
你要是做癌细胞可要小心了 不少癌细胞株 尤其是乳腺癌的 表达极少 或突变检测不到
S*2
11 楼
chase sapphire preferred
不过。。我师姐和我一起打电话，结果她被拒了！
【在 h****f 的大作中提到】
: 申的什么卡？什么时候申的？
不过。。我师姐和我一起打电话，结果她被拒了！
【在 h****f 的大作中提到】
: 申的什么卡？什么时候申的？
r*e
12 楼
很多做p53的人用U2OS。
p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。
【在 s******8 的大作中提到】
: 现在是非要碰这个呀， 有什么建议吗？
: 什么cell line好做p53啊？
p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。
【在 s******8 的大作中提到】
: 现在是非要碰这个呀， 有什么建议吗？
: 什么cell line好做p53啊？
a*t
13 楼
cong
【在 S*********2 的大作中提到】
: Re, thanks for sharing from you!
【在 S*********2 的大作中提到】
: Re, thanks for sharing from you!
l*1
14 楼
Re LZ:
try Stem Cell line: H9 hESCs
cited from
Das B. et al. (2012)
HIF-2a Suppresses p53 to Enhance the Stemness and Regenerative
Potential of Human Embryonic Stem Cells.
Stem Cells. 30: 1685-95.
>
hESC Culture and Induction of Hypoxia
Due permissions were obtained to culture hESCs both at Department
of Medicine, Stanford University (Stem Cell Research
Oversight protocol #285, director: BD) and at Department of
Laboratory Medicine and Pathobiology, Hospital for Sick Children.
BGO1 and H9 hESCs (WiCell Inc., Madison, WI, www.wi
cell.org) were expanded on Mitomycin-C (10 lg/ml; Sigma)-inactivated
mouse embryonic fibroblast (MEF) feeders, cultured in
knockout Dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12 with
20% knockout serum replacement (KOSR, #12660012, and
#10828-028; Invitrogen Life Technologies, Grand Island, NY),
and 4 ng/ml FGF-2 (#PHG0024, Gibco, Life Technologies,
Grand Island, NY, www.invitrogen.com) as described elsewhere
[23, 24].
web link:
HTTP: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22689594
----
【在 r***e 的大作中提到】
: 很多做p53的人用U2OS。
: p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。
try Stem Cell line: H9 hESCs
cited from
Das B. et al. (2012)
HIF-2a Suppresses p53 to Enhance the Stemness and Regenerative
Potential of Human Embryonic Stem Cells.
Stem Cells. 30: 1685-95.
>
hESC Culture and Induction of Hypoxia
Due permissions were obtained to culture hESCs both at Department
of Medicine, Stanford University (Stem Cell Research
Oversight protocol #285, director: BD) and at Department of
Laboratory Medicine and Pathobiology, Hospital for Sick Children.
BGO1 and H9 hESCs (WiCell Inc., Madison, WI, www.wi
cell.org) were expanded on Mitomycin-C (10 lg/ml; Sigma)-inactivated
mouse embryonic fibroblast (MEF) feeders, cultured in
knockout Dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12 with
20% knockout serum replacement (KOSR, #12660012, and
#10828-028; Invitrogen Life Technologies, Grand Island, NY),
and 4 ng/ml FGF-2 (#PHG0024, Gibco, Life Technologies,
Grand Island, NY, www.invitrogen.com) as described elsewhere
[23, 24].
web link:
HTTP: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22689594
----
【在 r***e 的大作中提到】
: 很多做p53的人用U2OS。
: p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。
F*1
15 楼
别老打，不会给封了？
i*g
16 楼
p53这个蛋白被做烂了
几乎每一个氨基酸都被摸过了
前几年，还有个尾巴lys的methylation(acetylation) 还发了一篇 N or S article，
你可以想象被研究到什么程度
几乎每一个氨基酸都被摸过了
前几年，还有个尾巴lys的methylation(acetylation) 还发了一篇 N or S article，
你可以想象被研究到什么程度
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