f*p
2 楼
蓝白菌落加起来30个左右，白色菌落总不够挑
连续三次都这样，请大家帮我分析一下原因？
连续三次都这样，请大家帮我分析一下原因？
g*r
3 楼
lol, 小人儿枕着呢。
b*n
4 楼
1. 感受态的问题，是自己制备的还是买的？
2. DNA purification有问题，比如说wash buffer没有处理干净，也就是说还有乙醇残
留，导致连接效率低，转化效率也低
3. 如果是chemical transformation，检查heat shock的温度是不是42度。如果是
electroporation transformation，是不是电击的时候time constant很低，甚至有arc
4. plate的antibiotics种类是不是对，浓度是不是正确
可能的问题很多，最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
很费时费力。
【在 f******p 的大作中提到】
: 蓝白菌落加起来30个左右，白色菌落总不够挑
: 连续三次都这样，请大家帮我分析一下原因？
2. DNA purification有问题，比如说wash buffer没有处理干净，也就是说还有乙醇残
留，导致连接效率低，转化效率也低
3. 如果是chemical transformation，检查heat shock的温度是不是42度。如果是
electroporation transformation，是不是电击的时候time constant很低，甚至有arc
4. plate的antibiotics种类是不是对，浓度是不是正确
可能的问题很多，最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
很费时费力。
【在 f******p 的大作中提到】
: 蓝白菌落加起来30个左右，白色菌落总不够挑
: 连续三次都这样，请大家帮我分析一下原因？
y*u
5 楼
Da PG
f*p
6 楼
非常感谢给出一些可能原因。上一个基因克隆的很顺利。换了个基因就开始出问题了。
1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧？
白斑的比例还可以，就是总体数量低。
3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧？
4. antibiotics没问题
还有可能是什么问题？LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
arc
【在 b******n 的大作中提到】
: 1. 感受态的问题，是自己制备的还是买的？
: 2. DNA purification有问题，比如说wash buffer没有处理干净，也就是说还有乙醇残
: 留，导致连接效率低，转化效率也低
: 3. 如果是chemical transformation，检查heat shock的温度是不是42度。如果是
: electroporation transformation，是不是电击的时候time constant很低，甚至有arc
: 4. plate的antibiotics种类是不是对，浓度是不是正确
: 可能的问题很多，最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
: 很费时费力。
1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧？
白斑的比例还可以，就是总体数量低。
3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧？
4. antibiotics没问题
还有可能是什么问题？LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
arc
【在 b******n 的大作中提到】
: 1. 感受态的问题，是自己制备的还是买的？
: 2. DNA purification有问题，比如说wash buffer没有处理干净，也就是说还有乙醇残
: 留，导致连接效率低，转化效率也低
: 3. 如果是chemical transformation，检查heat shock的温度是不是42度。如果是
: electroporation transformation，是不是电击的时候time constant很低，甚至有arc
: 4. plate的antibiotics种类是不是对，浓度是不是正确
: 可能的问题很多，最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
: 很费时费力。
S*y
7 楼
好大个靠枕，呵呵。
s*s
8 楼
啥叫不够挑？先抽几个看看
【在 f******p 的大作中提到】
: 蓝白菌落加起来30个左右，白色菌落总不够挑
: 连续三次都这样，请大家帮我分析一下原因？
【在 f******p 的大作中提到】
: 蓝白菌落加起来30个左右，白色菌落总不够挑
: 连续三次都这样，请大家帮我分析一下原因？
o*l
9 楼
lol
宝宝说：还是这个垫子最舒服，噢，雅。
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
宝宝说：还是这个垫子最舒服，噢，雅。
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
f*p
10 楼
我做多倍体，想每个种挑12个克隆测序
【在 s******s 的大作中提到】
: 啥叫不够挑？先抽几个看看
【在 s******s 的大作中提到】
: 啥叫不够挑？先抽几个看看
p*i
11 楼
垫子还是黄色的看着舒服。我们家那个是黑的，看着怪吓人的。
把你的黄垫子借我几天吧。
把你的黄垫子借我几天吧。
f*p
12 楼
恳请大家再帮忙找找原因。目前耗时耗力耗钱啊。
【在 f******p 的大作中提到】
: 我做多倍体，想每个种挑12个克隆测序
【在 f******p 的大作中提到】
: 我做多倍体，想每个种挑12个克隆测序
f*n
13 楼
哈哈，小家伙靠的很惬意。。。
h*y
14 楼
如果这是特例的话（比如你克隆其他基因都能拿到很多克隆），可能你要克隆的这段DN
A能产生对E coli有害的产物。用个ORFfinder试试分析一下。
【在 f******p 的大作中提到】
: 非常感谢给出一些可能原因。上一个基因克隆的很顺利。换了个基因就开始出问题了。
: 1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
: 2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧？
: 白斑的比例还可以，就是总体数量低。
: 3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧？
: 4. antibiotics没问题
: 还有可能是什么问题？LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
:
: arc
A能产生对E coli有害的产物。用个ORFfinder试试分析一下。
【在 f******p 的大作中提到】
: 非常感谢给出一些可能原因。上一个基因克隆的很顺利。换了个基因就开始出问题了。
: 1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
: 2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧？
: 白斑的比例还可以，就是总体数量低。
: 3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧？
: 4. antibiotics没问题
: 还有可能是什么问题？LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
:
: arc
s*r
15 楼
弟弟鼻子涂得啥蓝呼呼地……
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
f*p
16 楼
非常感谢你的建议
DN
【在 h******y 的大作中提到】
: 如果这是特例的话（比如你克隆其他基因都能拿到很多克隆），可能你要克隆的这段DN
: A能产生对E coli有害的产物。用个ORFfinder试试分析一下。
DN
【在 h******y 的大作中提到】
: 如果这是特例的话（比如你克隆其他基因都能拿到很多克隆），可能你要克隆的这段DN
: A能产生对E coli有害的产物。用个ORFfinder试试分析一下。
a*o
17 楼
你家宝宝跟他爹地长得也太像了吧
o*y
18 楼
呵呵，看把下家伙舒服的
Candy真是好脾气呀
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
Candy真是好脾气呀
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
w*k
19 楼
这个靠垫真不错
y*n
20 楼
高级垫子～
B*t
21 楼
哈哈哈哈
故意裁成这样的吧
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
故意裁成这样的吧
【在 K*H 的大作中提到】
: Candy在哪里藏着呢？
B*t
22 楼
这个我在很久以前就已经指出来了
第一眼就很像
【在 a***o 的大作中提到】
: 你家宝宝跟他爹地长得也太像了吧
第一眼就很像
【在 a***o 的大作中提到】
: 你家宝宝跟他爹地长得也太像了吧
a*o
23 楼
之前也觉得像，现在更是镇精了！！！！！
【在 B****t 的大作中提到】
: 这个我在很久以前就已经指出来了
: 第一眼就很像
【在 B****t 的大作中提到】
: 这个我在很久以前就已经指出来了
: 第一眼就很像
K*H
24 楼
你出机票钱就好了，我们要求不高
【在 p********i 的大作中提到】
: 垫子还是黄色的看着舒服。我们家那个是黑的，看着怪吓人的。
: 把你的黄垫子借我几天吧。
【在 p********i 的大作中提到】
: 垫子还是黄色的看着舒服。我们家那个是黑的，看着怪吓人的。
: 把你的黄垫子借我几天吧。
K*H
25 楼
那是pacifier
【在 s******r 的大作中提到】
: 弟弟鼻子涂得啥蓝呼呼地……
【在 s******r 的大作中提到】
: 弟弟鼻子涂得啥蓝呼呼地……
K*H
26 楼
为啥就没人觉得像我呢
真郁闷。。。
【在 a***o 的大作中提到】
: 之前也觉得像，现在更是镇精了！！！！！
真郁闷。。。
【在 a***o 的大作中提到】
: 之前也觉得像，现在更是镇精了！！！！！
s*r
27 楼
shyshyshy
run
【在 K*H 的大作中提到】
: 那是pacifier
run
【在 K*H 的大作中提到】
: 那是pacifier
a*e
28 楼
hahah靠垫真高级呀
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