f*p
2 楼
蓝白菌落加起来30个左右,白色菌落总不够挑
连续三次都这样,请大家帮我分析一下原因?
连续三次都这样,请大家帮我分析一下原因?
g*r
3 楼
lol, 小人儿枕着呢。
b*n
4 楼
1. 感受态的问题,是自己制备的还是买的?
2. DNA purification有问题,比如说wash buffer没有处理干净,也就是说还有乙醇残
留,导致连接效率低,转化效率也低
3. 如果是chemical transformation,检查heat shock的温度是不是42度。如果是
electroporation transformation,是不是电击的时候time constant很低,甚至有arc
4. plate的antibiotics种类是不是对,浓度是不是正确
可能的问题很多,最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
很费时费力。
【在 f******p 的大作中提到】
: 蓝白菌落加起来30个左右,白色菌落总不够挑
: 连续三次都这样,请大家帮我分析一下原因?
2. DNA purification有问题,比如说wash buffer没有处理干净,也就是说还有乙醇残
留,导致连接效率低,转化效率也低
3. 如果是chemical transformation,检查heat shock的温度是不是42度。如果是
electroporation transformation,是不是电击的时候time constant很低,甚至有arc
4. plate的antibiotics种类是不是对,浓度是不是正确
可能的问题很多,最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
很费时费力。
【在 f******p 的大作中提到】
: 蓝白菌落加起来30个左右,白色菌落总不够挑
: 连续三次都这样,请大家帮我分析一下原因?
y*u
5 楼
Da PG
f*p
6 楼
非常感谢给出一些可能原因。上一个基因克隆的很顺利。换了个基因就开始出问题了。
1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧?
白斑的比例还可以,就是总体数量低。
3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧?
4. antibiotics没问题
还有可能是什么问题?LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
arc
【在 b******n 的大作中提到】
: 1. 感受态的问题,是自己制备的还是买的?
: 2. DNA purification有问题,比如说wash buffer没有处理干净,也就是说还有乙醇残
: 留,导致连接效率低,转化效率也低
: 3. 如果是chemical transformation,检查heat shock的温度是不是42度。如果是
: electroporation transformation,是不是电击的时候time constant很低,甚至有arc
: 4. plate的antibiotics种类是不是对,浓度是不是正确
: 可能的问题很多,最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
: 很费时费力。
1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧?
白斑的比例还可以,就是总体数量低。
3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧?
4. antibiotics没问题
还有可能是什么问题?LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
arc
【在 b******n 的大作中提到】
: 1. 感受态的问题,是自己制备的还是买的?
: 2. DNA purification有问题,比如说wash buffer没有处理干净,也就是说还有乙醇残
: 留,导致连接效率低,转化效率也低
: 3. 如果是chemical transformation,检查heat shock的温度是不是42度。如果是
: electroporation transformation,是不是电击的时候time constant很低,甚至有arc
: 4. plate的antibiotics种类是不是对,浓度是不是正确
: 可能的问题很多,最好找老手一步一步教你和帮你trouble shooting。没经验自己分析
: 很费时费力。
S*y
7 楼
好大个靠枕,呵呵。
p*i
11 楼
垫子还是黄色的看着舒服。我们家那个是黑的,看着怪吓人的。
把你的黄垫子借我几天吧。
把你的黄垫子借我几天吧。
f*n
13 楼
哈哈,小家伙靠的很惬意。。。
h*y
14 楼
如果这是特例的话(比如你克隆其他基因都能拿到很多克隆),可能你要克隆的这段DN
A能产生对E coli有害的产物。用个ORFfinder试试分析一下。
【在 f******p 的大作中提到】
: 非常感谢给出一些可能原因。上一个基因克隆的很顺利。换了个基因就开始出问题了。
: 1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
: 2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧?
: 白斑的比例还可以,就是总体数量低。
: 3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧?
: 4. antibiotics没问题
: 还有可能是什么问题?LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
:
: arc
A能产生对E coli有害的产物。用个ORFfinder试试分析一下。
【在 f******p 的大作中提到】
: 非常感谢给出一些可能原因。上一个基因克隆的很顺利。换了个基因就开始出问题了。
: 1. 我是买的感受态细菌。JM109, >10*8
: 2. 直接克隆的PCR产物。上一个基因就这样, 挺顺利的。再说这个只影响白斑数量吧?
: 白斑的比例还可以,就是总体数量低。
: 3. 确定是42度。这个也只影响白斑数量吧?
: 4. antibiotics没问题
: 还有可能是什么问题?LB agar两年前的。但两个月前克隆另一个基因还很好啊。
:
: arc
a*o
17 楼
你家宝宝跟他爹地长得也太像了吧
w*k
19 楼
这个靠垫真不错
y*n
20 楼
高级垫子~
a*e
28 楼
hahah靠垫真高级呀
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