logo
Redian新闻
>未名空间
>Biology - 生物学
>
求教各位用过Qiagen RNeasy kit的兄弟姐妹
avatar
求教各位用过Qiagen RNeasy kit的兄弟姐妹# Biology - 生物学
a*e
1 楼
basic information：
postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
引用 68， 比较少
只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
希望这次能过。
avatar
o*k
2 楼
如题，可怜的菜园，又被鹿儿们给扫荡了。顺便问如何有效防鹿。谢谢！
avatar
f*y
3 楼
请问这个kit的那个on column DNase digestion靠谱吗？
看到protocol上写的是先Dnase I 加buffer挂在柱子上，然后加样品洗脱
感觉样品和柱子接触充其量也就是10分钟不到，而且是室温，不知道DNA能不能除净啊？
以前没有这方面的经验，请大家帮忙指导，不胜感激。
avatar
c*g
4 楼
有一作nature 和science都搞不定？
为啥引用这么少

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
a*g
5 楼
铁丝网 lol

【在 o*********k 的大作中提到】
: 如题，可怜的菜园，又被鹿儿们给扫荡了。顺便问如何有效防鹿。谢谢！
avatar
w*a
6 楼
能除干净，偶以前经常用。
而且做过control，过不过这个柱子，区别还挺大。

啊？

【在 f****y 的大作中提到】
: 请问这个kit的那个on column DNase digestion靠谱吗？
: 看到protocol上写的是先Dnase I 加buffer挂在柱子上，然后加样品洗脱
: 感觉样品和柱子接触充其量也就是10分钟不到，而且是室温，不知道DNA能不能除净啊？
: 以前没有这方面的经验，请大家帮忙指导，不胜感激。
avatar
r*l
7 楼
bless,马上就时来运转了
avatar
T*m
8 楼
你和RNC多交流，她的后院也有很多鹿。

【在 o*********k 的大作中提到】
: 如题，可怜的菜园，又被鹿儿们给扫荡了。顺便问如何有效防鹿。谢谢！
avatar
s*9
9 楼
同意，这个步骤很重要。有没有加，有时候dissociation curve都不一样。

【在 w***a 的大作中提到】
: 能除干净，偶以前经常用。
: 而且做过control，过不过这个柱子，区别还挺大。
:
: 啊？
avatar
d*3
10 楼
Bless!
avatar
R*C
11 楼
6尺铁丝网，最好还有网盖
avatar
f*y
12 楼
非常感谢
我一开始以为要把样品和DNA酶一起在柱子上放15分钟，反复看发现就是先放酶然后直
接上样品过。有点不敢想象。

【在 w***a 的大作中提到】
: 能除干净，偶以前经常用。
: 而且做过control，过不过这个柱子，区别还挺大。
:
: 啊？
avatar
a*e
13 楼
eb1a 的时候，　pp 了，一个月前情况都很差，
而且现在比较我自己写的和律师写的，差距还是很明显。
郭律师的联系方式：http://www.lawofficeofdanielguo.com
avatar
p*y
14 楼
最好别吃了 也不差那点菜钱。吃出问题来就得不偿失了 个人意见仅供参考
avatar
Z*5
15 楼
我用过，不靠谱。 不如在反转录之前单独加一步除DNA的。
avatar
A*T
16 楼
bless

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
f*y
17 楼
求更多意见
avatar
l*t
18 楼
bless
avatar
s*9
19 楼
关键是取决于mRNA样品里能干扰最后结果的DNA相对量。要除干净DNA，又要防止DNaseI
残留，而且还减少mRNA降解，安全的方案是先用DNA-free kit除DNA（http://products.invitrogen.com/ivgn/product/AM1906），然后再用RNeasy kit纯化。
avatar
S*G
20 楼
没事的，一定过。

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
I*a
21 楼
用了很多，
有的干净有的不干净，
大多数要再除。
avatar
h*5
22 楼
Bless!

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
f*y
23 楼
非常感谢楼上各位
avatar
g*e
24 楼
祝好运！

【在 h*****5 的大作中提到】
: Bless!
avatar
o*a
25 楼
不是先把样品挂上柱子再加DNaseI反应15分钟吗

【在 f****y 的大作中提到】
: 非常感谢
: 我一开始以为要把样品和DNA酶一起在柱子上放15分钟，反复看发现就是先放酶然后直
: 接上样品过。有点不敢想象。
avatar
b*r
26 楼
bless
avatar
t*8
27 楼
这个kit说可以不用加dnase,大部分dna已经除掉了，对pcr一般没有影响。我试过 RT前
加dnase 和不加，用SYBR Green做qpcr，没有什么区别。但不知道对microarry有影响
吗？

啊？

【在 f****y 的大作中提到】
: 请问这个kit的那个on column DNase digestion靠谱吗？
: 看到protocol上写的是先Dnase I 加buffer挂在柱子上，然后加样品洗脱
: 感觉样品和柱子接触充其量也就是10分钟不到，而且是室温，不知道DNA能不能除净啊？
: 以前没有这方面的经验，请大家帮忙指导，不胜感激。
avatar
n*e
28 楼
which IO did you get?
good luck

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
I*a
29 楼
不可能，

【在 t**********8 的大作中提到】
: 这个kit说可以不用加dnase,大部分dna已经除掉了，对pcr一般没有影响。我试过 RT前
: 加dnase 和不加，用SYBR Green做qpcr，没有什么区别。但不知道对microarry有影响
: 吗？
:
: 啊？
avatar
a*e
30 楼
#1244

【在 n****e 的大作中提到】
: which IO did you get?
: good luck
avatar
d*t
31 楼
取决于你的目标基因吧，本身高表达的基因ＤＮＡ的影响可以忽略不计，但是本身表达
很低的基因残留的ＤＮＡ影响是很明显的

【在 t**********8 的大作中提到】
: 这个kit说可以不用加dnase,大部分dna已经除掉了，对pcr一般没有影响。我试过 RT前
: 加dnase 和不加，用SYBR Green做qpcr，没有什么区别。但不知道对microarry有影响
: 吗？
:
: 啊？
avatar
I*n
32 楼
bless
请问这个时候郭律师再接你的case，你是全权委托他还是仅仅让润色petitionletter？
avatar
s*y
33 楼
看你的DNA 源头是什么，如果担心的是genomic DNA,这个处理还是比较彻底的，但是我
一般都会处理个２０分钟。
如果是plasmid DNA，只处理一次是肯定不够的，我以前做过测试，一定要重复处理三
次以上才行，就是每次处理２０分钟，然后离心，然后再加DNAseI 再处理２０分钟，
总共重复三次。

啊？

【在 f****y 的大作中提到】
: 请问这个kit的那个on column DNase digestion靠谱吗？
: 看到protocol上写的是先Dnase I 加buffer挂在柱子上，然后加样品洗脱
: 感觉样品和柱子接触充其量也就是10分钟不到，而且是室温，不知道DNA能不能除净啊？
: 以前没有这方面的经验，请大家帮忙指导，不胜感激。
avatar
a*e
34 楼
几乎全权委托，但因为我自己 DIY 过，所以是一起互相商量和反馈来写 PL.
然后增加了两封推荐信，没有增加其他新材料。

【在 I*****n 的大作中提到】
: bless
: 请问这个时候郭律师再接你的case，你是全权委托他还是仅仅让润色petitionletter？
avatar
h*y
35 楼
先用Trizol抽提RNA，加氯仿分层后，取水相，向其中加等量乙醇，然后过RNAeasy的柱
子。方便简单，无DNA污染。

啊？

【在 f****y 的大作中提到】
: 请问这个kit的那个on column DNase digestion靠谱吗？
: 看到protocol上写的是先Dnase I 加buffer挂在柱子上，然后加样品洗脱
: 感觉样品和柱子接触充其量也就是10分钟不到，而且是室温，不知道DNA能不能除净啊？
: 以前没有这方面的经验，请大家帮忙指导，不胜感激。
avatar
a*x
36 楼
所以说这些io都是高中没毕业的弱智，你4片paper抵得上20片灌水文章
bless

师的帮助还是很大

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
s*y
37 楼
哦，这个方法对含有Plasmid DNA 的细胞适用么？谢谢

【在 h******y 的大作中提到】
: 先用Trizol抽提RNA，加氯仿分层后，取水相，向其中加等量乙醇，然后过RNAeasy的柱
: 子。方便简单，无DNA污染。
:
: 啊？
avatar
I*n
38 楼
那你的NOID Response Package有授权书？

【在 a***e 的大作中提到】
: 几乎全权委托，但因为我自己 DIY 过，所以是一起互相商量和反馈来写 PL.
: 然后增加了两封推荐信，没有增加其他新材料。
avatar
h*y
39 楼
plasmid DNA也是DNA，应该可以的。
用Trizol要舍得，取水相别贪心。

【在 s******y 的大作中提到】
: 哦，这个方法对含有Plasmid DNA 的细胞适用么？谢谢
avatar
Y*Z
40 楼
BLESS
avatar
s*y
41 楼
这个你确定么？
我以前用简单的Qiagen RNA extraction kit 的时候是不能排除掉plasmid的，
因为plasmid上没有核蛋白结合着，所以不会和蛋白一起变性沉下来。
不过因为我从来不用Trizol （窘了个窘），所以对此没有经验。

【在 h******y 的大作中提到】
: plasmid DNA也是DNA，应该可以的。
: 用Trizol要舍得，取水相别贪心。
avatar
a*e
42 楼
yeah.

【在 I*****n 的大作中提到】
: 那你的NOID Response Package有授权书？
avatar
h*y
43 楼
DNA不是因为和蛋白结合着才被分开的。Trizol是酸性的，这种pH情况下DNA进入有机相
和中间相，RNA进入水相。当然如果Trizol量不够，DNA量太多的时候也会进入水相。所
以说不要省Trizol。

【在 s******y 的大作中提到】
: 这个你确定么？
: 我以前用简单的Qiagen RNA extraction kit 的时候是不能排除掉plasmid的，
: 因为plasmid上没有核蛋白结合着，所以不会和蛋白一起变性沉下来。
: 不过因为我从来不用Trizol （窘了个窘），所以对此没有经验。
avatar
F*p
44 楼
郭律师又来了。
avatar
s*y
45 楼
谢谢

【在 h******y 的大作中提到】
: DNA不是因为和蛋白结合着才被分开的。Trizol是酸性的，这种pH情况下DNA进入有机相
: 和中间相，RNA进入水相。当然如果Trizol量不够，DNA量太多的时候也会进入水相。所
: 以说不要省Trizol。
avatar
p*g
46 楼
ahche你来凑这个热闹干啥？ faculty--eb1b才是快通道哈

师的帮助还是很大

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
D*o
47 楼
有时候中间相很容易被枪头吸到，这种情况下可不可以再用一次Trizol分离水相？
谢谢

【在 h******y 的大作中提到】
: DNA不是因为和蛋白结合着才被分开的。Trizol是酸性的，这种pH情况下DNA进入有机相
: 和中间相，RNA进入水相。当然如果Trizol量不够，DNA量太多的时候也会进入水相。所
: 以说不要省Trizol。
avatar
a*e
48 楼
开始做薄厚的时候我也是这么想的，结果找了两年都没找到教职，然后发现身份快没了。

【在 p*******g 的大作中提到】
: ahche你来凑这个热闹干啥？ faculty--eb1b才是快通道哈
:
: 师的帮助还是很大
avatar
l*1
49 楼
舍不得中间相 做啥RNA isolation?
use Trizol again is not suggested.

【在 D****o 的大作中提到】
: 有时候中间相很容易被枪头吸到，这种情况下可不可以再用一次Trizol分离水相？
: 谢谢
avatar
g*7
50 楼
郭律师有没有免你的律师费?
你为他做了广告.还不知道过没过.

师的帮助还是很大

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
l*1
51 楼
Trizol will cause cancer
so pls do same protection as you do lentivirus transfection assay,
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31796109.html
7th floor

【在 s******y 的大作中提到】
: 这个你确定么？
: 我以前用简单的Qiagen RNA extraction kit 的时候是不能排除掉plasmid的，
: 因为plasmid上没有核蛋白结合着，所以不会和蛋白一起变性沉下来。
: 不过因为我从来不用Trizol （窘了个窘），所以对此没有经验。
avatar
D*9
52 楼
People may wonder why people with Nature and Science publications still got
NOID. There are many contributing factors, which include the IO, petition
letter, supporting documents and etc.
His DIY petition letter shares common issues with other DIY letters. Just
name a few here:
1. Lack of good organization (simple list v. sectional structure)
2. Lack of good presentation of supporting materials (See Exhibit v. in-
depth explanation)
A good attorney normally can improve the DIY petition letter b

【在 g******7 的大作中提到】
: 郭律师有没有免你的律师费?
: 你为他做了广告.还不知道过没过.
:
: 师的帮助还是很大
avatar
b*b
53 楼
100%干净是不可能的，但是相对来说还是很干净的。我得用nested PCR才能扩出
genomic DNA来。如果你PCR的两条引物在不同的exons上的话，就更不用担心了。

啊？

【在 f****y 的大作中提到】
: 请问这个kit的那个on column DNase digestion靠谱吗？
: 看到protocol上写的是先Dnase I 加buffer挂在柱子上，然后加样品洗脱
: 感觉样品和柱子接触充其量也就是10分钟不到，而且是室温，不知道DNA能不能除净啊？
: 以前没有这方面的经验，请大家帮忙指导，不胜感激。
avatar
k*g
54 楼
写得不错。兵来将挡。佩服你的淡定。

got
50%.
(

【在 D**9 的大作中提到】
: People may wonder why people with Nature and Science publications still got
: NOID. There are many contributing factors, which include the IO, petition
: letter, supporting documents and etc.
: His DIY petition letter shares common issues with other DIY letters. Just
: name a few here:
: 1. Lack of good organization (simple list v. sectional structure)
: 2. Lack of good presentation of supporting materials (See Exhibit v. in-
: depth explanation)
: A good attorney normally can improve the DIY petition letter b
avatar
z*6
55 楼
学习了，刚刚order了Qiagen的kit... 最近在做，一直用的Trizol，发现味道太大而且
提小组织感觉yield不是很好...
avatar
H*e
56 楼
What is NOID?
avatar
A*y
57 楼
Actuallly in my experience, it is very good at getting rid of DNA without
the DNase step. However, I still do it though. The old kit instruction (7+
year) actually tell you to do the DNase step for 30 minutes in 37C. The
new Qiagen kit told you not to do it.

【在 I***a 的大作中提到】
: 不可能，
avatar
t*t
58 楼
Notice of Intent to Deny

【在 H****e 的大作中提到】
: What is NOID?
avatar
g*5
59 楼
thank sunny. learn a trick here.

【在 s******y 的大作中提到】
: 看你的DNA 源头是什么，如果担心的是genomic DNA,这个处理还是比较彻底的，但是我
: 一般都会处理个２０分钟。
: 如果是plasmid DNA，只处理一次是肯定不够的，我以前做过测试，一定要重复处理三
: 次以上才行，就是每次处理２０分钟，然后离心，然后再加DNAseI 再处理２０分钟，
: 总共重复三次。
:
: 啊？
avatar
A*T
60 楼
bless
应该能过

师的帮助还是很大

【在 a***e 的大作中提到】
: basic information：
: postdoc, 一篇N, 一篇S，还有两篇第一作者的文章 (IF5, IF8)
: 引用 68， 比较少
: 只有十次专业杂志评论，无大众媒体报道
: 最先 DIY eb1a, 被 NOID, 不承认 contribution & media report.
: 后来在本版看到加州的郭律师对EB1/RFE很有经验，就决定把我的case交给他。郭律师的帮助还是很大
: 的，回email 和 电话 非常及时，很负责任。PL比我自己写的好多了。
: 希望这次能过。
avatar
y*y
61 楼
bless!
avatar
s*h
62 楼
BLESS!
avatar
c*a
63 楼
Good luck!!!
相关阅读
寻求一种检测knock-out与wildtype属于同一个strain的方法。Help! How does lymph node macrophage uptake of lipids?请教RNA-seq 软件的安装调试的问题！张旭等发现调控大脑发育新机理请教一个关于homodimer的问题急问搜索 RAR responding site比较权威的database察其言而观其行（二）中国很多大学都不逊色于美国顶尖大学，除了学术水平。药厂逐渐抛弃化学专业，转向生物？请教一下Ubiquitination怎末没有把sunnyday给炸出来察其言而观其行 （一）Debate between Sydney Brenner and Denis Noble@SBMC 2012有什么软件可以simulate 四倍体的genotype大家应该集体抵制苦逼型PIAction Urged to Curb Racial Bias in NIH Grantsprimer extension 时 太多 K band 怎么办关于施一公： 想了想，我还是决定转帖一下CHIP qpcr中的 negative control （mock antibody）订抗体求教
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章，不代表同意其说法或描述，仅为提供更多信息，也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责，与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿，如发现稿件侵权，或作者不愿在本网发表文章，请版权拥有者通知本网处理。