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可做转化的微量质粒提取 Knockdown
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可做转化的微量质粒提取 Knockdown# Biology - 生物学
n*r
1
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r*n
2
谢谢先。
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l*s
3
《人民的名义》,当初看到这个片名第一感觉就是反腐的题材,上网一搜,果然如此,
最高人民检察院政治部、最高人民检察院反贪总局参与摄制。好长时间没有反腐题材的
影视剧出现,这类题材重新亮相,大概是因为这些年出现的老鼠太多了,到了该抓一抓
的时候。对于老鼠我是深恶痛绝的,因为我深受其害。
变岸多年来一直居住在自建房中,没那钱去买商品房。有一利必有一弊啊,这不老
鼠就常年的轻车熟路打洞穿墙而来,家里的粮食衣服毁损不少,那老鼠猖狂的很,此起
彼伏,大的到斤小的过两,一窝一窝的,终于到了让家人无法忍受的地步。一天父亲父
亲买了几个老鼠夹,捕鼠的工作就此进行。老鼠是抓了一些,可偏老父亲信佛,逮着了
又放到不远的一个学校去了。父亲说:“别到我家吃了,这儿有吃的,你到学校吃去吧
。”我听了一下子笑了,当时想 这些老鼠或许会长记性,不来了吧。可是家里的老鼠
并没有因此少过,捕鼠必须继续。一天又逮着了一个,大姐放到水里淹死了,告诉我老
鼠不能放,要不然别的老鼠不会长记性。想想她说的有道理,并且家里以后的确因此安
静不少。看来还是重典才能起到震慑作用,才能有朗朗乾坤、太平之世。否则奇奇怪怪
的事情是太多了,会屡禁不绝的。动不动就有性侵幼童案,过去怎么没有,因为过去小
于14岁就是强奸,按律得进去几年的;满大街都有疾驰如飞的汽车,因为撞死人了保险
公司赔,驾驶员损失的不过是来年保险金额增加而已。现在的贪官一抓就是涉亿,因为
现在很少有枪决了,所以出现了那么多的幺蛾子。
有了上面的经历,变岸对于抓贪是拍手称快的,对于《人民的名义》深有好感,更
何况是由陆毒舌饰演的。现在来谈回剧,开剧有两个情节最让我震撼,1.赵德汉被人举
报,侯亮平前来搜查,当这位腐败分子的面具被最终撕开,让人震惊的场景出现了,挂
布逐渐拉起,露出一整墙的钱,赵德汉说:被底下还有,被揭开后,那一床的钱,样样
刺激着人的神经。这些钱从哪来的,他怎么能够隐藏那么久。谈到钱的来源,与赵德汉
干系很深的丁义珍却在一个神秘人的指挥下成功出逃了。让视民们疑问的是这个神秘人
是谁,对于丁义珍抓捕的消息是如何泄漏的?参加省委汇报的总共就5人,稳定有人怀
疑李达康,李达康也有被怀疑的理由,毕竟开会期间他离开了一会,有作案时间。可后
来的剧情显示又似乎不是李达康。如果不是李达康,网友们,你们怀疑其余4人当中的
哪一个?如果不是这其中的5人,会是谁?卧底的抓捕人员,不无可能。剧情变得有趣
起来,扑朔迷离起来
2、让我震撼的另外一个情节就是大风服装厂被强拆的场面,黑社会冒充警察。强
拆见多了,网上的时有报道,后来因为国家严禁强拆,就越发被捂住的在悄悄的进行当
中。据传说有雇佣黑势力打骂恐吓的,但黑社会冒充警察的这种段位的第一次见识。变
岸马上也要被拆迁了,难免怕怕的,惶惶不可终日了。听过关于拆迁的许多故事,可现
在玩游戏到新段位了,黑社会开外挂都胆敢冒充警察了,公安的警车是怎么被这些人使
用的?警车也带外借?脑洞不敢开了。好在打怪的叔叔升级了,我们就坐看这些妖魔鬼
怪被绳之以法吧。
《人民的名义》实在是一部深得人心的好剧,人心向背,抓贪理当长期的不可或缺
的大力度的进行下去。
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C*W
4
黑白的女猫名字不雅,我就不说啦嘿嘿,7个月
灰色的男猫灰仔,3个月左右,刚领回来一周~~~
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C*X
5
我的机器有问题吗?我是国行机器,55555
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m*M
6
最近在筛选那个片段的knockdown效率最高。现在有将近上百个
片段(质粒)要筛选。原来少的时候都是用MIDI提取后,做细胞转化,再做QPCR来筛选
。现在上百个样品,都这样工作量大不说,还特别浪费。大家给推荐个小提质粒可以用
来转化细胞的KIT。谢谢
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E*e
7
WHICH SIZE?
PBK?
MACYS?
TARGET?

【在 r***n 的大作中提到】
: 谢谢先。
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C*W
8


【在 C*****W 的大作中提到】
: 黑白的女猫名字不雅,我就不说啦嘿嘿,7个月
: 灰色的男猫灰仔,3个月左右,刚领回来一周~~~

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R*i
10
女儿现在用我单身时候的twin size,Bed Bath Beyond。
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b*y
11
女猫几岁啊?

【在 C*****W 的大作中提到】
: 黑白的女猫名字不雅,我就不说啦嘿嘿,7个月
: 灰色的男猫灰仔,3个月左右,刚领回来一周~~~

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m*M
12
非常感谢提供这么个信息。有RNA提取的柱子吗?如果有的话,RNA样品中也不含洗液吗
?我先定个质粒的看看。

【在 q***7 的大作中提到】
: 你可以试一试这个公司的小量质粒提取试剂盒。所提质粒不含洗液,可以用来做转化用
: 。效果非常好。要比Qiagen好多了。
: http://www.greenbioresearch.com/plasmid-dna-isolation-miniprep-

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r*n
13
twin size的就可以了。喜欢全棉的。

【在 E*********e 的大作中提到】
: WHICH SIZE?
: PBK?
: MACYS?
: TARGET?

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q*u
14
沙皮谷?沙屁股?傻屁股?啥屁股?

【在 C*****W 的大作中提到】
: 黑白的女猫名字不雅,我就不说啦嘿嘿,7个月
: 灰色的男猫灰仔,3个月左右,刚领回来一周~~~

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r*n
16
会不会太长。我们家的一直跟着我盖king size的,最近感觉有必要分被子盖。

【在 R*********i 的大作中提到】
: 女儿现在用我单身时候的twin size,Bed Bath Beyond。
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b*a
17
估计是第三个

【在 q**u 的大作中提到】
: 沙皮谷?沙屁股?傻屁股?啥屁股?
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q*7
18
你如果用的是Qiagen 或其他公司的柱子提的RNA,那你有没有考虑过RNA样品中的洗液
的影响?
尤其是RNA浓度低的样品。因为要调成和浓度高的样品一样的总量,所以要加的比较高
的体积。这样在反转录体系中这个低样品的洗液就多,抑制反转录酶的活性很强。所以
你虽然放了一样多的总RNA,但是大多都没有被反转录。当你所qPCR时,你这个样品的
Ct值会很高,意思就是表达很低。所以就是给你表达低的假现象。你做qPCR时,可以留
意一些低浓度样品的Ct值。很多人发表的qPCR的文章后来表明结果相反,有一些原因是
这些研究者没有考虑这个原因。
这是我给另外一个贴子的回复
Qiagen柱子提取的RNA总是含很多的洗液。后面会影响到反转录酶的活性。如果每个样
品的浓度不一样,你做qPCR时,要调成一样的浓度,这样你做反转录的每一个样品的反
应液里含有的洗液浓度就不一样。不一样的洗液浓度,抑制反转录酶的程度也不一样。
这样你最后出来的qPCR结果肯定不准确。有的样品里表达低,可能是因为洗液多而抑制
了反转录酶造成的,而不是真正的表达低。如果你同一组的样品,有的表达高,有的表
达低,一般都是这个原因造成的. 建议你试一试这个公司的KIT,而且还可以同时检测
小RNA。便宜又好用
http://www.greenbioresearch.com/mitotal-rnamini-using-qiagen-ki
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R*i
19
我丫头自己睡twin size的床,正好。也踢不了被子。

【在 r***n 的大作中提到】
: 会不会太长。我们家的一直跟着我盖king size的,最近感觉有必要分被子盖。
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r*e
20
哈哈哈,喜欢女猫猫
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s*s
21
用过最好的是roche的magna,应该是beads-base的,所以比较干净

【在 q***7 的大作中提到】
: 你如果用的是Qiagen 或其他公司的柱子提的RNA,那你有没有考虑过RNA样品中的洗液
: 的影响?
: 尤其是RNA浓度低的样品。因为要调成和浓度高的样品一样的总量,所以要加的比较高
: 的体积。这样在反转录体系中这个低样品的洗液就多,抑制反转录酶的活性很强。所以
: 你虽然放了一样多的总RNA,但是大多都没有被反转录。当你所qPCR时,你这个样品的
: Ct值会很高,意思就是表达很低。所以就是给你表达低的假现象。你做qPCR时,可以留
: 意一些低浓度样品的Ct值。很多人发表的qPCR的文章后来表明结果相反,有一些原因是
: 这些研究者没有考虑这个原因。
: 这是我给另外一个贴子的回复
: Qiagen柱子提取的RNA总是含很多的洗液。后面会影响到反转录酶的活性。如果每个样

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r*n
22
en,那我直接上大人的。

【在 R*********i 的大作中提到】
: 我丫头自己睡twin size的床,正好。也踢不了被子。
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N*E
23
LOL

【在 q**u 的大作中提到】
: 沙皮谷?沙屁股?傻屁股?啥屁股?
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t*t
24
请问您这评论有conflict of interest吗?
楼主虽然写的是转化(transformation),但说的应该是转染(transfection).这个kit提
的质粒能用来做转染吗?产品介绍上反正是没说。

【在 q***7 的大作中提到】
: 你如果用的是Qiagen 或其他公司的柱子提的RNA,那你有没有考虑过RNA样品中的洗液
: 的影响?
: 尤其是RNA浓度低的样品。因为要调成和浓度高的样品一样的总量,所以要加的比较高
: 的体积。这样在反转录体系中这个低样品的洗液就多,抑制反转录酶的活性很强。所以
: 你虽然放了一样多的总RNA,但是大多都没有被反转录。当你所qPCR时,你这个样品的
: Ct值会很高,意思就是表达很低。所以就是给你表达低的假现象。你做qPCR时,可以留
: 意一些低浓度样品的Ct值。很多人发表的qPCR的文章后来表明结果相反,有一些原因是
: 这些研究者没有考虑这个原因。
: 这是我给另外一个贴子的回复
: Qiagen柱子提取的RNA总是含很多的洗液。后面会影响到反转录酶的活性。如果每个样

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m*h
25
这个跟谁很像的

【在 C*****W 的大作中提到】

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m*M
26
谢谢各位的回复非常感谢。谢谢TYZHET细心指点用词不当。是的应该是转染(
transfection)。
用bead提质粒太贵,操作还不方便。
刚刚定了那个qq007哥们推荐的提质粒和Gel/PCR二合一kits。和Qiagen的相比便宜很多
,将近一半。有了测试结果给大家汇报一下。
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C*W
27
女猫7个月多一点,体格满大的哈~~~

【在 b***y 的大作中提到】
: 女猫几岁啊?
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C*W
28
嘿嘿是傻屁股,被你猜到了

【在 q**u 的大作中提到】
: 沙皮谷?沙屁股?傻屁股?啥屁股?
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C*W
29
哪个呀~~~

【在 m***h 的大作中提到】
: 这个跟谁很像的
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C*W
30
嘿嘿谢谢你啦,悄悄说我也更喜欢女猫呢,养她的时间久一点~

【在 r******e 的大作中提到】
: 哈哈哈,喜欢女猫猫
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C*W
31
傻屁股被楼上几位猜到名字,羞跑~~~
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A*t
32
你叫她傻屁股的时候她有反应么?
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f*n
33
弓虽

【在 q**u 的大作中提到】
: 沙皮谷?沙屁股?傻屁股?啥屁股?
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c*e
34
啊呀,灰仔就是Stella的小兄弟啊。

【在 C*****W 的大作中提到】
: 黑白的女猫名字不雅,我就不说啦嘿嘿,7个月
: 灰色的男猫灰仔,3个月左右,刚领回来一周~~~

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C*W
35
恩有的,叫的时间长了她知道在叫她:-p

【在 A****t 的大作中提到】
: 你叫她傻屁股的时候她有反应么?
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C*W
36
哈哈,是你头像里的猫猫吧~握爪握爪~~

【在 c*******e 的大作中提到】
: 啊呀,灰仔就是Stella的小兄弟啊。
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m*O
37
说说嘛
好可爱

【在 C*****W 的大作中提到】
: 黑白的女猫名字不雅,我就不说啦嘿嘿,7个月
: 灰色的男猫灰仔,3个月左右,刚领回来一周~~~

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u*g
38
我不厚道的笑了
傻屁股真美,圆溜溜的大眼睛,至于屁股傻不傻我看不到 -_-|||

【在 C*****W 的大作中提到】
: 嘿嘿是傻屁股,被你猜到了
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A*R
39
Cute!
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w*k
40
haha, cute
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c*e
41
对哈对哈
我发现男猫和女猫果然气质不同

【在 C*****W 的大作中提到】
: 哈哈,是你头像里的猫猫吧~握爪握爪~~
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C*W
42
是傻屁股,傻屁股掩面逃走……

【在 m*****O 的大作中提到】
: 说说嘛
: 好可爱

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C*W
43
哈哈傻屁股羞羞,其实不傻,我老取笑她哈哈~~~

【在 u********g 的大作中提到】
: 我不厚道的笑了
: 傻屁股真美,圆溜溜的大眼睛,至于屁股傻不傻我看不到 -_-|||

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C*W
44
stella看起来也很乖的样子呢,灰仔也很乖的,喜欢趴人身上撒娇睡大觉
不过玩起来真是生龙活虎啊…………

【在 c*******e 的大作中提到】
: 对哈对哈
: 我发现男猫和女猫果然气质不同

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