3包子求助用PCR构建突变体库的问题# Biology - 生物学
m*g
1 楼
过节作了，用的是鸡，挺成功的。但是没有什么茶味，觉得熏料里没有茶叶问题也不大。
最大的收获是学会了炒椒盐，炒完我用blender又近一步打碎了，香啊。
最大的收获是学会了炒椒盐，炒完我用blender又近一步打碎了，香啊。
w*u
2 楼
RT~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
W*9
3 楼
RT
请高人指点，多谢！
请高人指点，多谢！
x*s
4 楼
就睡了一觉结果醒来后杯具了
j*o
5 楼
这样配置的桌面电脑，是不是只有 DELL才有了，做些简单的video编辑。
16GB of 1600MHz DDR3 memory and a midrange video card based on Nvidia’s
GeForce GTX 660 graphics processor. Dell stuck to the middle of the road for
storage, too, providing a 32GB solid-state drive as cache for a 2TB
mechanical hard drive
好像现在16G的内存也没多少吧。
16GB of 1600MHz DDR3 memory and a midrange video card based on Nvidia’s
GeForce GTX 660 graphics processor. Dell stuck to the middle of the road for
storage, too, providing a 32GB solid-state drive as cache for a 2TB
mechanical hard drive
好像现在16G的内存也没多少吧。
B*w
6 楼
RT
我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
3000）保持不变。不知道有什么好办法？
谢谢！
我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
3000）保持不变。不知道有什么好办法？
谢谢！
B*n
7 楼
椒盐的配比是？我平时的炒法好像有点不一样
i*g
8 楼
查前几天的文章 现在找到的连接一般都是40k 但是登录你的UA account后随便找一张
机票后就会出现65k+$50的offer
【在 w*******u 的大作中提到】
: RT~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
机票后就会出现65k+$50的offer
【在 w*******u 的大作中提到】
: RT~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
z*g
9 楼
拿绿卡后再要求涨工资
【在 W****9 的大作中提到】
: RT
: 请高人指点，多谢！
【在 W****9 的大作中提到】
: RT
: 请高人指点，多谢！
b*x
10 楼
这个要顶～
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
z*e
11 楼
只要愿意花钱，32gb轻松得很
m*p
12 楼
最直接的，epPCR
RT我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间的
1000-2000 DNA binding domain用PCR构建........
【在 B****w 的大作中提到】
: RT
:
: 我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
: 的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
: 3000）保持不变。不知道有什么好办法？
: 谢谢！
RT我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间的
1000-2000 DNA binding domain用PCR构建........
【在 B****w 的大作中提到】
: RT
:
: 我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
: 的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
: 3000）保持不变。不知道有什么好办法？
: 谢谢！
B*n
13 楼
我觉得 我下次做这个会先把茶叶泡一下，我觉得是干茶叶散发不出味道
b*k
14 楼
可是你点这个effer的链接进去后又成了40k。。。
【在 i****g 的大作中提到】
: 查前几天的文章 现在找到的连接一般都是40k 但是登录你的UA account后随便找一张
: 机票后就会出现65k+$50的offer
【在 i****g 的大作中提到】
: 查前几天的文章 现在找到的连接一般都是40k 但是登录你的UA account后随便找一张
: 机票后就会出现65k+$50的offer
W*9
15 楼
PWD评估比实际工资就高不到1000刀，请问是否需要改Job Desc? 是否影响PERM的正常
申请？
【在 z*******g 的大作中提到】
: 拿绿卡后再要求涨工资
申请？
【在 z*******g 的大作中提到】
: 拿绿卡后再要求涨工资
p*o
16 楼
笑了，谢谢
t*z
17 楼
我的个人电脑就32G，我还准备等内存降价了插满64G呢，真不算什么。
s*n
18 楼
在#1000和#2000左右处引入限制性酶切位点，切掉#1000-2000的片段作为载体，用
epPCR扩增#1000-2000这个片段，酶切后再连上之前的载体就可以了。
【在 B****w 的大作中提到】
: RT
:
: 我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
: 的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
: 3000）保持不变。不知道有什么好办法？
: 谢谢！
epPCR扩增#1000-2000这个片段，酶切后再连上之前的载体就可以了。
【在 B****w 的大作中提到】
: RT
:
: 我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
: 的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
: 3000）保持不变。不知道有什么好办法？
: 谢谢！
w*o
19 楼
我做的也挺成功的，就是没有茶香，熏的味道也不重
i*d
20 楼
关键在于UA帐号里必须已经有一定的里程了，才有65k
如果你的mileage是0，就只有40k
如果你的mileage是0，就只有40k
f*7
21 楼
不用改，拿到绿卡后工资到了PW 就可以了
n*i
22 楼
哎，这不是蔡桃桂吗，RIVER 543？
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
q*x
23 楼
我公司配的机器12核，32G内存。
【在 t*****z 的大作中提到】
: 我的个人电脑就32G，我还准备等内存降价了插满64G呢，真不算什么。
【在 t*****z 的大作中提到】
: 我的个人电脑就32G，我还准备等内存降价了插满64G呢，真不算什么。
H*i
24 楼
按照楼上方法
可以用BsaI或者同类酶设计酶切位点，这样对你的基因功能没有影响。
可以用BsaI或者同类酶设计酶切位点，这样对你的基因功能没有影响。
C*u
25 楼
我做的油茶香，多方茶叶
我做的也挺成功的，就是没有茶香，熏的味道也不重
【在 w*******o 的大作中提到】
: 我做的也挺成功的，就是没有茶香，熏的味道也不重
我做的也挺成功的，就是没有茶香，熏的味道也不重
【在 w*******o 的大作中提到】
: 我做的也挺成功的，就是没有茶香，熏的味道也不重
x*g
26 楼
俺有70k+里程，点进去还是40k。
【在 i********d 的大作中提到】
: 关键在于UA帐号里必须已经有一定的里程了，才有65k
: 如果你的mileage是0，就只有40k
【在 i********d 的大作中提到】
: 关键在于UA帐号里必须已经有一定的里程了，才有65k
: 如果你的mileage是0，就只有40k
b*n
27 楼
工资不够也没关系，不过你需要向移民局证明两件事：
1、你的雇主有支付这个差额的能力。比如现在的利润大于这个差额，或者净资产高于
这个差额；
2、绿卡拿到后，你的雇主愿意支付要求的工资
如果你雇主愿意大力支持，那是最重要的。
1、你的雇主有支付这个差额的能力。比如现在的利润大于这个差额，或者净资产高于
这个差额；
2、绿卡拿到后，你的雇主愿意支付要求的工资
如果你雇主愿意大力支持，那是最重要的。
h*k
28 楼
我怎么觉得是男的
t*t
29 楼
公司的12核才32G? 我这里的都是96的...
【在 q****x 的大作中提到】
: 我公司配的机器12核，32G内存。
【在 q****x 的大作中提到】
: 我公司配的机器12核，32G内存。
s*n
30 楼
还有一个更简单的方法就是先用epPCR扩增#1000-2000的片段，然后用这个产物作
primer，直接扩增整个质粒，第二步要用高保真的酶，就相当于QuikChange
primer，直接扩增整个质粒，第二步要用高保真的酶，就相当于QuikChange
d*e
31 楼
有啥细节要注意的么
x*g
32 楼
60k的链接倒是还可以用。
【在 x******g 的大作中提到】
: 俺有70k+里程，点进去还是40k。
【在 x******g 的大作中提到】
: 俺有70k+里程，点进去还是40k。
W*9
33 楼
多谢！
【在 b****n 的大作中提到】
: 工资不够也没关系，不过你需要向移民局证明两件事：
: 1、你的雇主有支付这个差额的能力。比如现在的利润大于这个差额，或者净资产高于
: 这个差额；
: 2、绿卡拿到后，你的雇主愿意支付要求的工资
: 如果你雇主愿意大力支持，那是最重要的。
【在 b****n 的大作中提到】
: 工资不够也没关系，不过你需要向移民局证明两件事：
: 1、你的雇主有支付这个差额的能力。比如现在的利润大于这个差额，或者净资产高于
: 这个差额；
: 2、绿卡拿到后，你的雇主愿意支付要求的工资
: 如果你雇主愿意大力支持，那是最重要的。
m*r
34 楼
嗯，应该是男的
【在 h*****k 的大作中提到】
: 我怎么觉得是男的
【在 h*****k 的大作中提到】
: 我怎么觉得是男的
q*x
35 楼
是有点不够，得找经理加点。
【在 t****t 的大作中提到】
: 公司的12核才32G? 我这里的都是96的...
【在 t****t 的大作中提到】
: 公司的12核才32G? 我这里的都是96的...
B*w
36 楼
包子已发请查收！
w*4
37 楼
我弄出来表皮倒是有颜色，但软塌塌的，没有烤鸭的焦香，而且没啥味道，郁闷
s*u
38 楼
这个问题解决了么？我那个有50刀credit的也是一进去就变成40000了
V*8
39 楼
今天都和周立波干上了
z*r
40 楼
上ebay搞一个二手hp z800。我当时双路x5520,96GB ram,2x400GB hdd, nvidia fx580,
1100w，只要1200。机器刚过三年的质保。
你可以找找那些靠谱的卖家。我找的那个人是texas的。
1100w，只要1200。机器刚过三年的质保。
你可以找找那些靠谱的卖家。我找的那个人是texas的。
B*w
41 楼
刚刚试了一下！好像不行呀！出来的都是Smear.用的酶是phusion, 94度变性，72度退
火延伸。
【在 s********n 的大作中提到】
: 还有一个更简单的方法就是先用epPCR扩增#1000-2000的片段，然后用这个产物作
: primer，直接扩增整个质粒，第二步要用高保真的酶，就相当于QuikChange
火延伸。
【在 s********n 的大作中提到】
: 还有一个更简单的方法就是先用epPCR扩增#1000-2000的片段，然后用这个产物作
: primer，直接扩增整个质粒，第二步要用高保真的酶，就相当于QuikChange
B*e
42 楼
用滚油把皮烫脆。
【在 w*****4 的大作中提到】
: 我弄出来表皮倒是有颜色，但软塌塌的，没有烤鸭的焦香，而且没啥味道，郁闷
T*0
43 楼
呵呵
r*i
44 楼
工作用本：hp 8570w mobile workstation, 3840QM, 32GB, dreamcolor
for
【在 j******o 的大作中提到】
: 这样配置的桌面电脑，是不是只有 DELL才有了，做些简单的video编辑。
: 16GB of 1600MHz DDR3 memory and a midrange video card based on Nvidia’s
: GeForce GTX 660 graphics processor. Dell stuck to the middle of the road for
: storage, too, providing a 32GB solid-state drive as cache for a 2TB
: mechanical hard drive
: 好像现在16G的内存也没多少吧。
for
【在 j******o 的大作中提到】
: 这样配置的桌面电脑，是不是只有 DELL才有了，做些简单的video编辑。
: 16GB of 1600MHz DDR3 memory and a midrange video card based on Nvidia’s
: GeForce GTX 660 graphics processor. Dell stuck to the middle of the road for
: storage, too, providing a 32GB solid-state drive as cache for a 2TB
: mechanical hard drive
: 好像现在16G的内存也没多少吧。
w*4
45 楼
我是后来把锡纸弄掉又高火烤了几分钟，不过感觉还是不够焦。不知道这个熏鸡（或熏
鸭）是不是应该焦皮的？
【在 B********e 的大作中提到】
:
: 用滚油把皮烫脆。
鸭）是不是应该焦皮的？
【在 B********e 的大作中提到】
:
: 用滚油把皮烫脆。
i*a
46 楼
理发师手艺不错啊到: 】
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
j*o
47 楼
这个是hot deal啊，我去找找了。
fx580,
【在 z**********r 的大作中提到】
: 上ebay搞一个二手hp z800。我当时双路x5520,96GB ram,2x400GB hdd, nvidia fx580,
: 1100w，只要1200。机器刚过三年的质保。
: 你可以找找那些靠谱的卖家。我找的那个人是texas的。
fx580,
【在 z**********r 的大作中提到】
: 上ebay搞一个二手hp z800。我当时双路x5520,96GB ram,2x400GB hdd, nvidia fx580,
: 1100w，只要1200。机器刚过三年的质保。
: 你可以找找那些靠谱的卖家。我找的那个人是texas的。
B*e
48 楼
从电视上面看到的来说，应该不焦。
【在 w*****4 的大作中提到】
: 我是后来把锡纸弄掉又高火烤了几分钟，不过感觉还是不够焦。不知道这个熏鸡（或熏
: 鸭）是不是应该焦皮的？
h*e
49 楼
书页的图片没剪出来。
j*o
50 楼
笔记本就不考虑了，散热的问题很多。谢谢。
【在 r***i 的大作中提到】
: 工作用本：hp 8570w mobile workstation, 3840QM, 32GB, dreamcolor
:
: for
【在 r***i 的大作中提到】
: 工作用本：hp 8570w mobile workstation, 3840QM, 32GB, dreamcolor
:
: for
G*s
51 楼
我们家也做了，我也感觉没味儿，但是客人看着我们从烤箱拿出，打开锡纸，心里还是
挺开心的，所以吃掉了大半。
剩下的ld给弄成丝，用辣椒炒了炒，很好吃
挺开心的，所以吃掉了大半。
剩下的ld给弄成丝，用辣椒炒了炒，很好吃
k*e
52 楼
正宗的双平头，板书头，学生头，文科头。
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
【在 x**********s 的大作中提到】
: 就睡了一觉结果醒来后杯具了
a*u
53 楼
workstation至少要上ecc条子吧...
GeForce显卡再汗一个~
GeForce显卡再汗一个~
e*d
54 楼
Lenovo Thinkstation D30
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