求助个生化蛋白的奇怪问题。。。 - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

求助个生化蛋白的奇怪问题。。。

求助个生化蛋白的奇怪问题。。。# Biology - 生物学

s*r2013-07-22 07:07

1 楼

最近在做一个蛋白在细胞里的功能,分子量28kd,但是在做WB的时候总是出现两条带,上
面那条大小差不多28kd,下面挨着还有一条大概22kd的条带, 在wildtype细胞里两条带
强度基本一样.
一开始我认为下面那条可能是翻译后修饰或者剪切产物, 但是后来做的knockdown和
overexpression细胞系, 强度变化都出现在下面那条22kd的,28kd没变化. 最近刚做出
来的KO细胞系也符合这个,上面那条很浓,下面一点都没有. 我查了下文献,发现有篇文
章倒也提到了了两条带的问题,不过他只说简单说了有slow/fast migrating forms,没
有任何解释.
求问做生化蛋白的老手, 对这个有没有什么解释。

m*52013-07-22 07:07

2 楼

那条不变的就是非特异带，很常见

【在 s********r 的大作中提到】

: 最近在做一个蛋白在细胞里的功能,分子量28kd,但是在做WB的时候总是出现两条带,上
: 面那条大小差不多28kd,下面挨着还有一条大概22kd的条带, 在wildtype细胞里两条带
: 强度基本一样.
: 一开始我认为下面那条可能是翻译后修饰或者剪切产物, 但是后来做的knockdown和
: overexpression细胞系, 强度变化都出现在下面那条22kd的,28kd没变化. 最近刚做出
: 来的KO细胞系也符合这个,上面那条很浓,下面一点都没有. 我查了下文献,发现有篇文
: 章倒也提到了了两条带的问题,不过他只说简单说了有slow/fast migrating forms,没
: 有任何解释.
: 求问做生化蛋白的老手, 对这个有没有什么解释。

b*n2013-07-22 07:07

3 楼

非特异性条带的可能性比较大
如果是原核细胞中产生的重组蛋白作为抗原打动物产生的
那么非特异性的条带的可能性比较小
如果是直接哺乳动物细胞过量表达的重组蛋白或者endogenous protein提纯后作为抗原
注射动物产生的抗体，因为纯化工序的原因不是很纯，有少量背景蛋白存在，得到的血
清中非特异性条带可能性很大了
还有一种可能是同源区域，就是目的蛋白A的一部分序列在另外一个蛋白B也存在，或者
相近
你实在感兴趣做pull down然后割胶送去测序：）

【在 s********r 的大作中提到】