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冷冻包埋胚胎看YFP的问题求助

冷冻包埋胚胎看YFP的问题求助# Biology - 生物学

s*u2013-11-11 08:11

1 楼

请大家不吝祝福，希望我的485顺利通过
Time Line
EB1A 140
5/28 file date
6/15 RD
11/16 AD
485
11/23 mailed out
12/6 check was cashed
大家一直纠结最近I485 邮寄地址问题，我问过律师，今天我的支票也被cash了，但还
没有收到recipt,我确认地址是根据485表上的地址。我的140是在TSC批准的，所以485
也要寄到TSC。我是用FEDEX寄的，用的地址是：
USCIS
Attn:AOS
2501 S State Hwy, 121 business suite 400
Lewiswille, TX

D*a2013-11-11 08:11

2 楼

我打算做冷冻胚胎切片。以前是sucrose/gelatine包埋，现在是冷冻剂包埋，用的是
FSC22 leica，哪种好呢？另外如果我直接包埋有什么需要注意的事项吗？没做过。
以前用的是sucrose之后 sucrose/gelatine包埋。好处就是冷冻之前完全透明，可以切
割，到时候冷冻之后不用一个劲的摇手柄找tissue。坏处呢就是我没做过我现在这种，
不知道37度一天对YFP荧光有没有影响。
sucrose之后直接OCT包埋有什么优点呢？现在实验室用的是冷冻剂包埋（FSC22 leica
），对我的好处就是protocol半现成（paper上扒下来的），可以直接跟以前的图对比
。话说OCT是什么的缩写？FSC22是不是一种OCT，还是OCT有特指？
多谢指教！

b*02013-11-11 08:11

3 楼

bless

【在 s********u 的大作中提到】

: 请大家不吝祝福，希望我的485顺利通过
: Time Line
: EB1A 140
: 5/28 file date
: 6/15 RD
: 11/16 AD
: 485
: 11/23 mailed out
: 12/6 check was cashed
: 大家一直纠结最近I485 邮寄地址问题，我问过律师，今天我的支票也被cash了，但还

H*N2013-11-11 08:11

4 楼

OCT stands for optimum cutting temperature, is Tissue-Tek's brand name. We
use it to embed GFP-expressing tissue all the time and the signals are
maintained well. We never treat the tissues at 37 C though.

l*62013-11-11 08:11

5 楼

bless

D*a2013-11-11 08:11

6 楼

我以前用的是TomatoRed在brain里那个红通通啊换了YFP 换了organ 换了年龄我也
不敢瞎搞啊

【在 H****N 的大作中提到】

: OCT stands for optimum cutting temperature, is Tissue-Tek's brand name. We
: use it to embed GFP-expressing tissue all the time and the signals are
: maintained well. We never treat the tissues at 37 C though.

d*l2013-11-11 08:11

7 楼

bless
How long you get your approval notice?

D*a2013-11-11 08:11

8 楼

请问从sucrose里面捞出来就可以用包埋剂冷冻吗，我看有的地方说要泡一泡sucrose/
包埋剂

【在 H****N 的大作中提到】

e*c2013-11-11 08:11

9 楼

bless.
Did you PP for your I-140?

【在 s********u 的大作中提到】

n*w2013-11-11 08:11

10 楼

可以直接包埋的，不一定要泡一泡。

【在 D*a 的大作中提到】

: 请问从sucrose里面捞出来就可以用包埋剂冷冻吗，我看有的地方说要泡一泡sucrose/
: 包埋剂

c*62013-11-11 08:11

11 楼

bless!

z*u2013-11-11 08:11

12 楼

可以固定后直接OCT包埋。不过sucrose， OCT浸泡后再包埋形态会更好。sample不会是
透明的，PFA固定后都是有些褐色的，很容易就知道切到哪里了。
37度一天对荧光没有任何影响。别说一天了。。我的需要脱钙的sample经常室温EDTA脱
钙个把星期都没问题。 TdTomato非常稳定。 YFP我不太喜欢，也不是很熟悉其稳定性
。

v*i2013-11-11 08:11

13 楼

Bless

【在 s********u 的大作中提到】

D*a2013-11-11 08:11

14 楼

谢谢！

【在 n***w 的大作中提到】

: 可以直接包埋的，不一定要泡一泡。

l*t2013-11-11 08:11

15 楼

bless

D*a2013-11-11 08:11

16 楼

谢谢！就是说用sucrose跟OCT混起来泡一下更好，泡多长时间呢？

【在 z****u 的大作中提到】

: 可以固定后直接OCT包埋。不过sucrose， OCT浸泡后再包埋形态会更好。sample不会是
: 透明的，PFA固定后都是有些褐色的，很容易就知道切到哪里了。
: 37度一天对荧光没有任何影响。别说一天了。。我的需要脱钙的sample经常室温EDTA脱
: 钙个把星期都没问题。 TdTomato非常稳定。 YFP我不太喜欢，也不是很熟悉其稳定性
: 。