请教各位分子克隆大神一个胶回收的问题 - 未名空间MITBBS历史存档

请教各位分子克隆大神一个胶回收的问题# Biology - 生物学

S*h2014-04-20 07:04

1 楼

President Donald J. Trump signed the NASA Transition Authorization Act
of 2017, reaffirming our national commitment to the core mission of NASA.
https://www.youtube.com/watch?v=GArzzBiJy-E
从川普最近提出的预算计画可看出，川总把美国看成一个破产的公司处理。奥巴马八
年后，美国国债高达20兆美元，需要运用他破产重整的策略进行紧急处理。
川普破产重整要诀第一条就是把不会生钱，也没有生财濳力的项目全砍掉。例如
没用的地球暖化科研，一堆联邦社会福利补助。国家没钱，就不发福利了，就像科技
公司不赚钱就不再提供免费食堂一样。
破产重整第二条，把国家主力资源放在会制造就业，振兴经济，并且会生财的项目。例
如∶
1. 航太。NASA是科技业的龙头。2000年代美国的高科技产品，大多来自1980年NASA的
投入。
2. 军工业。扩大军费多买几架航母，F35飞机等。开国际保全公司，跟盟国收保护费
。卖武器给盟国。光靠这点就可以在完全不加税的状况下，为国库赚进大把银两。
3. 能源独立。放宽能源开发条例，鼓励绿化能跟传统能源开发，进而把美国转化为主
要能源生产国，取代中东国家，成为能源出口国。
川普本周宣布重启的NASA太空计画就是其中重要一环。美国的高科技经济发展与创新都
是从航空，太空工业，军用研究与发展出来的产品。这些高科技产品稳定后进入商业
化，带动了全美国人民的高科技产业制造了大量的工程发明，制造业，也开启了美国中
产阶级的就业和经济发展。
一个经济效应大约要三、五到十年才会反应出来。例如说美国在公元2000年的
高科技经济完全是靠雷根跟老布希1980到1990年代初的投资遗产。原来的军事研发，
到后来变成商业化，造成了美国高科技的发达。
比如说个人电脑，是1960年代，美国为了登入月球的研发产品。其他如行动电话、网
路、电子邮件、卫星导航系统、遥控设备、电子计算机、数据化的摄影器材、原子能
发电、喷射机，全都是军用研发出来后，再改进后运用为商业产品。

s*d2014-04-20 07:04

2 楼

刚收到银行对要买房子的Appraisal， value 居然和我们的成交价一样。
可之前我们的agent，不停的对我们说什么Appraisal value 肯定会比我们的成交价高
非常多，因为我们买到了最好的super good deal 啊什么的，还到处对别人包括对home
inspector说，到后来听得我们很烦好像我们捡了个天上的大馅饼似的
这闹了半天我们也就是出的market value，现在看见市场上房子还在一直跌，感觉心里
还是挺郁闷的，况且我们买的这个20年的房子几乎从没做过upgrade，搬进去还要花不
少钱，觉得当时应该再压一下价格的，可是脸皮太薄了
请问大家当时买房子时，银行的Appraisal value 和你买的价格差的多吗，是不是银行
趋向于把Appraisal value往成交价上靠呢？
感觉还没最后close呢，我这buyer's remorse 就已经开始了

k*z2014-04-20 07:04

3 楼

如题

x*e2014-04-20 07:04

4 楼

你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
00~200mg。
实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
情况吗？
在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

d*a2014-04-20 07:04

5 楼

NASA 2016年的预算是19.3 billion，老川批的NASA 2017年预算是19.5 billion。考虑
到通货膨胀，实质上并没有增加啊。
不过，相对NIH与DOE，NASA的预算情况是非常不错的了。这个时候，预算不被砍，就值
得庆祝了。

y*n2014-04-20 07:04

6 楼

那个就是按你成交价做的。
一般参考房都是选择最近成交的房子作为参考价，所以不要太当回事。
你只要与你相似的附近房子比就好了。低就是deal .

k*z2014-04-20 07:04

7 楼

没人去过吗？是不是1～3月？早上好还是傍晚好？

m*82014-04-20 07:04

8 楼

http://www.clontech.com/US/Products/Nucleic_Acid_Purification/D

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

b*d2014-04-20 07:04

9 楼

这是FY2018. Trump自己的budget是19.1 billion.这19.5是国会自己的数字。trump连
400 millions cut从国会都搞不下来。谁会信他能让国会把nih减20%？trump的budget
就是joke.

【在 d***a 的大作中提到】

: NASA 2016年的预算是19.3 billion，老川批的NASA 2017年预算是19.5 billion。考虑
: 到通货膨胀，实质上并没有增加啊。
: 不过，相对NIH与DOE，NASA的预算情况是非常不错的了。这个时候，预算不被砍，就值
: 得庆祝了。

m*i2014-04-20 07:04

10 楼

其实主要看你是不是喜欢这个房子。银行的Appraisal也主要是根据近期周围房子的售
价来估的，这个价格不是一成不变的。自己住喜欢最重要，否则那些买了不久就跌的人
岂不更冤死了。

H*i2014-04-20 07:04

11 楼

我习惯用zymo的kit，那个特别小的柱子，用10ul-20ul左右的buff洗脱。

b*02014-04-20 07:04

12 楼

Trump不是挺NASA的吗，为什么一定要搞掉这400米？

budget

【在 b*****d 的大作中提到】

: 这是FY2018. Trump自己的budget是19.1 billion.这19.5是国会自己的数字。trump连
: 400 millions cut从国会都搞不下来。谁会信他能让国会把nih减20%？trump的budget
: 就是joke.

s*d2014-04-20 07:04

13 楼

谢谢安慰！
看了一下，确实附近最近成交的房子成交价都很低，看来确实影响home value 啊，现
在只祈祷近几年不用搬家卖房，也就不再为这房价烦心了

【在 y******n 的大作中提到】

: 那个就是按你成交价做的。
: 一般参考房都是选择最近成交的房子作为参考价，所以不要太当回事。
: 你只要与你相似的附近房子比就好了。低就是deal .

x*e2014-04-20 07:04

14 楼

我用过一次zymo，比QIAGEN好用
效率大概有多高？

【在 H*******i 的大作中提到】

: 我习惯用zymo的kit，那个特别小的柱子，用10ul-20ul左右的buff洗脱。

d*a2014-04-20 07:04

15 楼

啊，是这样。我原来有点奇怪，老川居然一点都没有砍NASA的预算（不考虑通胀），
NIH被砍了那么多。
联邦预算中军费是大头（除了社保和medicare之外）。军费要涨54 billion，别的地方
只能是能砍就砍。

budget

【在 b*********0 的大作中提到】

: Trump不是挺NASA的吗，为什么一定要搞掉这400米？
:
: budget

s*d2014-04-20 07:04

16 楼

谢谢。你说的很对，我也觉得自己住也就不管那么多了
主要是当时一直被agent push 买房，买这个的时候也是因为觉得价格好，被他吹的好
像是很好的的deal才买的，现在看了appraisal发觉并不比别人买的便宜，所以心中有
些郁闷
看来要买房的，在这种市场情况下还是尽量压价吧，不要被agen牵着鼻子走

【在 m**i 的大作中提到】

: 其实主要看你是不是喜欢这个房子。银行的Appraisal也主要是根据近期周围房子的售
: 价来估的，这个价格不是一成不变的。自己住喜欢最重要，否则那些买了不久就跌的人
: 岂不更冤死了。

r*g2014-04-20 07:04

17 楼

直接切下来在dialysis tubing里面跑个人胶就行了
我一直用的原始办法很好用的

d*a2014-04-20 07:04

18 楼

国会是四月份开始讨论联邦预算？我觉得今年的讨论会很热闹。

budget

【在 b*****d 的大作中提到】

: 这是FY2018. Trump自己的budget是19.1 billion.这19.5是国会自己的数字。trump连
: 400 millions cut从国会都搞不下来。谁会信他能让国会把nih减20%？trump的budget
: 就是joke.

d*s2014-04-20 07:04

19 楼

应该还是比较容易查房价的，你看case shiller指数，算一下最高价05-06能卖多少，
然后现在指数跌了多少，再看你房价比最高跌了多少，就知道亏了还是没亏，不过未来
2年，再跌个8%-15%

home

【在 s******d 的大作中提到】

: 刚收到银行对要买房子的Appraisal， value 居然和我们的成交价一样。
: 可之前我们的agent，不停的对我们说什么Appraisal value 肯定会比我们的成交价高
: 非常多，因为我们买到了最好的super good deal 啊什么的，还到处对别人包括对home
: inspector说，到后来听得我们很烦好像我们捡了个天上的大馅饼似的
: 这闹了半天我们也就是出的market value，现在看见市场上房子还在一直跌，感觉心里
: 还是挺郁闷的，况且我们买的这个20年的房子几乎从没做过upgrade，搬进去还要花不
: 少钱，觉得当时应该再压一下价格的，可是脸皮太薄了
: 请问大家当时买房子时，银行的Appraisal value 和你买的价格差的多吗，是不是银行
: 趋向于把Appraisal value往成交价上靠呢？
: 感觉还没最后close呢，我这buyer's remorse 就已经开始了

Y*n2014-04-20 07:04

20 楼

Zymo is very good. They have 25 ug column too.

b*d2014-04-20 07:04

21 楼

4月讨论17年的budget,理论上是巴马的budget.他的这个要等到9月才讨论。国会已经说
了要另起炉灶，自己写自己的。

【在 d***a 的大作中提到】

: 国会是四月份开始讨论联邦预算？我觉得今年的讨论会很热闹。
:
: budget

s*d2014-04-20 07:04

22 楼

啊？未来2年，再跌个8%-15%？那岂不是大家现在买的都要亏大了，都应该再等一两
年再买房？
嗯，发现自从签了合同以后就不能来这个版看了，否则越看越郁闷

【在 d*****s 的大作中提到】

: 应该还是比较容易查房价的，你看case shiller指数，算一下最高价05-06能卖多少，
: 然后现在指数跌了多少，再看你房价比最高跌了多少，就知道亏了还是没亏，不过未来
: 2年，再跌个8%-15%
:
: home

t*k2014-04-20 07:04

23 楼

我一直用qiangen的没问题啊，1%的胶有点浓了，1K以上我都用0.8%，这样跑的时间短
，损失应该也少。融胶的时候有没有加NaAc？另外buffer要多加一点，宁可多离心几次。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

r*e2014-04-20 07:04

24 楼

NASA其实就是DoD的马甲吧

【在 d***a 的大作中提到】

: 啊，是这样。我原来有点奇怪，老川居然一点都没有砍NASA的预算（不考虑通胀），
: NIH被砍了那么多。
: 联邦预算中军费是大头（除了社保和medicare之外）。军费要涨54 billion，别的地方
: 只能是能砍就砍。
:
: budget

h*r2014-04-20 07:04

25 楼

A little bit lower house price is just one factor of real-state related
expense. The mortgage rate you have is historically good. Imagine a house
with somewhat lower price but somewhat higher mortgage rate, the monthly
payment wouldn't be much of a difference. You don't have to be troubled that
much.
;-)

【在 s******d 的大作中提到】

: 啊？未来2年，再跌个8%-15%？那岂不是大家现在买的都要亏大了，都应该再等一两
: 年再买房？
: 嗯，发现自从签了合同以后就不能来这个版看了，否则越看越郁闷

D*s2014-04-20 07:04

26 楼

Qiagen的胶回收系统有问题，回收效率很低，原因不是很明了。但是有个改进方法你可
以试试，就是不用50度融化胶块，就室温融化（放到那种旋转的设备上），大概10-20
分钟就能完全溶掉，回收效率会大大提高。
另外就是多加一点溶液溶胶。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

b*d2014-04-20 07:04

27 楼

不算。doe里面管nuclear weapon算dod 马甲。管理人员是将军，doe部长只是名义领导。

【在 r***e 的大作中提到】

: NASA其实就是DoD的马甲吧

d*s2014-04-20 07:04

28 楼

本来就是这样，这个市场，难道买房的时候不做好打算会亏？很多有家庭的人没有办法
，按照华人传统一定要买房，否则家里女主人就会抱怨，所以亏就亏了，算是结婚成本。

【在 s******d 的大作中提到】

: 啊？未来2年，再跌个8%-15%？那岂不是大家现在买的都要亏大了，都应该再等一两
: 年再买房？
: 嗯，发现自从签了合同以后就不能来这个版看了，否则越看越郁闷

x*e2014-04-20 07:04

29 楼

如果条带单一，直接加2倍体积乙醇， 1/10 3M 醋酸钠， -20 》20分钟，14000*15min
, 4 degree,离心；沉淀（看不到也不要紧，小心吸去上清即可）再用70乙醇1ml洗一遍
（14000*10min, 4）,RT放10分钟，加10-20ul 水，个人觉得最后的浓度比Kit回收的
要高。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

s*d2014-04-20 07:04

30 楼

Thank you very much for the comforting words!
I locked the rate at 4.75% for 30yr though, not the lowest. But you are
right I shouldn't be troubled too much, I should look at the positive side
in the future.
I hope I will pass the buyer's remorse stage very soon and start to enjoy
my new house.

that

【在 h**********r 的大作中提到】

: A little bit lower house price is just one factor of real-state related
: expense. The mortgage rate you have is historically good. Imagine a house
: with somewhat lower price but somewhat higher mortgage rate, the monthly
: payment wouldn't be much of a difference. You don't have to be troubled that
: much.
: ;-)

s*s2014-04-20 07:04

31 楼

Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化

20

【在 D***s 的大作中提到】

: Qiagen的胶回收系统有问题，回收效率很低，原因不是很明了。但是有个改进方法你可
: 以试试，就是不用50度融化胶块，就室温融化（放到那种旋转的设备上），大概10-20
: 分钟就能完全溶掉，回收效率会大大提高。
: 另外就是多加一点溶液溶胶。
:
: 概1

s*d2014-04-20 07:04

32 楼

你说的对，自住房是不能老算着亏不亏。
嗯，我家可能也象你说的那样，本来LG不想买，租的房子很好，也不急的，是我催着买
房，所以现在很怕刚买就跌的厉害，被LG抱怨。希望以后住进去喜欢，也就不纠结这个
房价了。

本。

【在 d*****s 的大作中提到】

: 本来就是这样，这个市场，难道买房的时候不做好打算会亏？很多有家庭的人没有办法
: ，按照华人传统一定要买房，否则家里女主人就会抱怨，所以亏就亏了，算是结婚成本。

x*e2014-04-20 07:04

33 楼

离心的时候DNA会从agarose gel里跑出来？

15min

【在 x*****e 的大作中提到】

: 如果条带单一，直接加2倍体积乙醇， 1/10 3M 醋酸钠， -20 》20分钟，14000*15min
: , 4 degree,离心；沉淀（看不到也不要紧，小心吸去上清即可）再用70乙醇1ml洗一遍
: （14000*10min, 4）,RT放10分钟，加10-20ul 水，个人觉得最后的浓度比Kit回收的
: 要高。
:
: 概1

d*s2014-04-20 07:04

34 楼

这个还是要打入结婚成本，算是你老公送你的礼物，亏得越多，这个礼物也贵重。
不过如果你在DE的话，估计房价还没有调整结束，毕竟DE房价最高峰其实在07年，没跌
多久，比最高峰就跌了百分之10几。

【在 s******d 的大作中提到】

: 你说的对，自住房是不能老算着亏不亏。
: 嗯，我家可能也象你说的那样，本来LG不想买，租的房子很好，也不急的，是我催着买
: 房，所以现在很怕刚买就跌的厉害，被LG抱怨。希望以后住进去喜欢，也就不纠结这个
: 房价了。
:
: 本。

x*e2014-04-20 07:04

35 楼

你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
80%以上。但是我一般只能回收30%

Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
20

【在 s******s 的大作中提到】

: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
:
: 20

b*d2014-04-20 07:04

36 楼

不要把Apprsaisal value太当真，很多银行就是按照Sale Price来做的。

home

【在 s******d 的大作中提到】

: 刚收到银行对要买房子的Appraisal， value 居然和我们的成交价一样。
: 可之前我们的agent，不停的对我们说什么Appraisal value 肯定会比我们的成交价高
: 非常多，因为我们买到了最好的super good deal 啊什么的，还到处对别人包括对home
: inspector说，到后来听得我们很烦好像我们捡了个天上的大馅饼似的
: 这闹了半天我们也就是出的market value，现在看见市场上房子还在一直跌，感觉心里
: 还是挺郁闷的，况且我们买的这个20年的房子几乎从没做过upgrade，搬进去还要花不
: 少钱，觉得当时应该再压一下价格的，可是脸皮太薄了
: 请问大家当时买房子时，银行的Appraisal value 和你买的价格差的多吗，是不是银行
: 趋向于把Appraisal value往成交价上靠呢？
: 感觉还没最后close呢，我这buyer's remorse 就已经开始了

l*y2014-04-20 07:04

37 楼

80%达不到，能有50%差不多了，简单点就开始多弄点dna去跑胶

达到

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
: 80%以上。但是我一般只能回收30%
:
: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
: 20

K*n2014-04-20 07:04

38 楼

我自己遇到的情况跟你很类似。我的房子比较旧，没有upgrade，但是学区好，周围环
境更好，agent和我上网study的结果都显示我这成交价无论从单价还是总价来说都是好
deal，但银行派来的appraisal给评估出的价格还是跟我们的成交价一样，一分钱都没
多算。
我认为这种appraisal方法可能只考虑周围同类型房子的售价，而完全不考虑每个房子
的位置（比如是否在cul-de-sac、是否幽静、是否紧挨大片绿地，比如我自己的房子）
。如果纯粹只比较各自有几间bed、几间bath、有无fireplace、厨房是不是大理石台面
，这对有些房子是不公平的。
如果appraisal估出来的价格比较低，估价师一般不会马上汇报给银行，他会先跟买家
通气，问买家成交价是多少，若相差不大，他就在估价报告写上与成交价一样的价格，
这样让买卖交易能进行下去，这点倒是还比较人性化。我想lz和我就是遇到了这种情况
。但以我自己的案例来说，因为周边环境有加分作用，我的房子肯定不止估价报告给出
的那个价格。

【在 s******d 的大作中提到】

: 谢谢。你说的很对，我也觉得自己住也就不管那么多了
: 主要是当时一直被agent push 买房，买这个的时候也是因为觉得价格好，被他吹的好
: 像是很好的的deal才买的，现在看了appraisal发觉并不比别人买的便宜，所以心中有
: 些郁闷
: 看来要买房的，在这种市场情况下还是尽量压价吧，不要被agen牵着鼻子走

s*s2014-04-20 07:04

39 楼

80%没有，有50%就多加点被

【在 l***y 的大作中提到】

: 80%达不到，能有50%差不多了，简单点就开始多弄点dna去跑胶
:
: 达到

K*n2014-04-20 07:04

40 楼

那是说中西部吧？在俺们南加门儿都没有
南加未来趋势，涨比跌的可能性大

【在 s******d 的大作中提到】

: 啊？未来2年，再跌个8%-15%？那岂不是大家现在买的都要亏大了，都应该再等一两
: 年再买房？
: 嗯，发现自从签了合同以后就不能来这个版看了，否则越看越郁闷

D*s2014-04-20 07:04

41 楼

没测过，不过感觉低于50%

达到

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
: 80%以上。但是我一般只能回收30%
:
: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
: 20

h*n2014-04-20 07:04

42 楼

本来就要有这个估算啊。谁还能保证自己买到最低价啊？所以要打算多住几年才买啊
。不能想着过2，3年就卖还不用亏钱那种行情了。

【在 s******d 的大作中提到】

: 啊？未来2年，再跌个8%-15%？那岂不是大家现在买的都要亏大了，都应该再等一两
: 年再买房？
: 嗯，发现自从签了合同以后就不能来这个版看了，否则越看越郁闷

s*n2014-04-20 07:04

43 楼

试试Life Tech的Size Select，不用切胶，直接吸就得到

b*d2014-04-20 07:04

44 楼

hehe, 这里的好区基本上都没怎么跌。

【在 K****n 的大作中提到】

: 那是说中西部吧？在俺们南加门儿都没有
: 南加未来趋势，涨比跌的可能性大

d*n2014-04-20 07:04

45 楼

我一直用qiagen的盒子，开始出现过这样的问题，但后来解决问题后，DNA回收基本没
出现过什么问题。解决如下：
1. 不要按说明书的那个比例加溶解液，只要加1~1.5倍的体积即可。这是因为3倍体积
过多的体积会dilute DNA，DNA与柱子结合是浓度依赖性的，所以浓度越高越好。我只
在第一次成果gel的重量，but never did it again. 目测体积即可，大部分gel淹了就
行。只要略延长incubion时间，用手指多弹几次，都能溶解。
2. 3M 醋酸钠(pH5.01)是必须的，（有时候，还吸1~2ul到试纸条上确认ph在酸性范围
内）。要保证黄色。由于上面的溶解液不是按标准的，所以酸度会被稀释。所以，无论
怎么样，“ 1/10 3M 醋酸钠” 只会有益无害。
3. Add ~50% isopropanol and mix well.
4. 低速过柱，5000~8000gx30sec, 防止过快，DNA没有足够的机会结合柱子.
5. 洗柱后，20000gx2min充分干燥柱子。防止残留成分改变H2O的成分而影响elution。
大概这样，你可以试试看。个人认为qiagen也许不是最好的，但如果你用qiagen连正常
的dna都提取不出来，你换试剂盒估计也同样做不出来。所以先试试看这个，看是否能
解决你的问题。

15min

【在 x*****e 的大作中提到】

: 如果条带单一，直接加2倍体积乙醇， 1/10 3M 醋酸钠， -20 》20分钟，14000*15min
: , 4 degree,离心；沉淀（看不到也不要紧，小心吸去上清即可）再用70乙醇1ml洗一遍
: （14000*10min, 4）,RT放10分钟，加10-20ul 水，个人觉得最后的浓度比Kit回收的
: 要高。
:
: 概1

g*d2014-04-20 07:04

46 楼

The bank's appraisal value is rarely larger than your contract price. The
appraiser always adjust the value to your contract price if the appraisal
value is larger. However, if it is significantly lower, they do not adjust
and they will tell the real value.
The Bank's appraisal is for protection of the bank. They do not want to have
too higher value which might make the seller withdraw from selling.
if lower than the contract value, the bank would not make you the loan.

h*r2014-04-20 07:04

47 楼

化完胶之后，一定要等solution凉下来，再loading到柱子上。着急的话在冰上放一小
会儿。另外loading在柱子上放一小会儿，等吸附平衡。加NaAC好用，大多数时候偷懒
没加。
想增加回收率的话，可以考虑一下稍微共加热一下elution buffer。然后还是放一下会
儿。
总之就是偏酸吸附，偏碱解附；低温吸附，高温解附；高盐吸附，低盐解附。

R*n2014-04-20 07:04

48 楼

银行股价一般不会高过你的买价，除非他们想卖home equity loan给你，但这现在已经
很少了，因为他们不想担风险。这个估价只要不低于你的买价就行（确保能贷到款），
根本不能作为参考。而且估价低还有一个好处就是如果你想appeal property tax,可以
作为一个依据。

s*s2014-04-20 07:04

49 楼

嗯。有很多小trick，其实qiagen都build-in在qiacube里面了，
所以qiacube抽的东西就是质量好，手工不行。我们一直怀疑qiagen
有点温控和转速的小秘密不肯公布

【在 h**********r 的大作中提到】

: 化完胶之后，一定要等solution凉下来，再loading到柱子上。着急的话在冰上放一小
: 会儿。另外loading在柱子上放一小会儿，等吸附平衡。加NaAC好用，大多数时候偷懒
: 没加。
: 想增加回收率的话，可以考虑一下稍微共加热一下elution buffer。然后还是放一下会
: 儿。
: 总之就是偏酸吸附，偏碱解附；低温吸附，高温解附；高盐吸附，低盐解附。

g*d2014-04-20 07:04

50 楼

ding

j*x2014-04-20 07:04

51 楼

没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。

s*e2014-04-20 07:04

52 楼

原来如此，我们的agent还在合同上写，如果评估价比我们的出价低可以退出不买。
想想还是挺不错的。

x*e2014-04-20 07:04

53 楼

我order了GeneJet. 正好今天有人来推销,给我了zymo的sample,这两天准备都试试,比
较一下效率

【在 j****x 的大作中提到】

: 没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
: 比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。

x*e2014-04-20 07:04

54 楼

thx
NaAc和预热EB我是知道的, 温度的trick第一次听说。说不定就是这个问题。QIAGEN
PCR clean up我用着倒是一点问题都没有。

【在 h**********r 的大作中提到】

: 化完胶之后，一定要等solution凉下来，再loading到柱子上。着急的话在冰上放一小
: 会儿。另外loading在柱子上放一小会儿，等吸附平衡。加NaAC好用，大多数时候偷懒
: 没加。
: 想增加回收率的话，可以考虑一下稍微共加热一下elution buffer。然后还是放一下会
: 儿。
: 总之就是偏酸吸附，偏碱解附；低温吸附，高温解附；高盐吸附，低盐解附。

c*r2014-04-20 07:04

55 楼

用过这个，个人感觉比Qiagen好。回收率50%以上吧。

【在 j****x 的大作中提到】

: 没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
: 比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。

n*e2014-04-20 07:04

56 楼

我的经验是QIAGEN融解胶的时候室温+vortex,EB不预热显著提高回收率（2%胶回收~
200bp带）。

s*n2014-04-20 07:04

57 楼

好帖 mark

x*e2014-04-20 07:04

58 楼

搜了一下qiacube,吓尿了

【在 s******s 的大作中提到】

: 嗯。有很多小trick，其实qiagen都build-in在qiacube里面了，
: 所以qiacube抽的东西就是质量好，手工不行。我们一直怀疑qiagen
: 有点温控和转速的小秘密不肯公布

s*s2014-04-20 07:04

59 楼

这玩意儿异常好用，当然速度未必比你手动快，但是省力啊。
缺点是，质量太差，经常这个哪个问题，要叫人来修。

【在 x********e 的大作中提到】

: 搜了一下qiacube,吓尿了

j*x2014-04-20 07:04

60 楼

当初放弃qiatube转投另一个系统的主要原因是通量太低，后来居然出了个qiacube HT.
..

【在 s******s 的大作中提到】

: 这玩意儿异常好用，当然速度未必比你手动快，但是省力啊。
: 缺点是，质量太差，经常这个哪个问题，要叫人来修。

x*e2014-04-20 07:04

61 楼

汇报一下进展~
PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
的量有区别,其他步骤都一样。
zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
时候全飘了。

【在 x********e 的大作中提到】

: 我order了GeneJet. 正好今天有人来推销,给我了zymo的sample,这两天准备都试试,比
: 较一下效率

g*52014-04-20 07:04

62 楼

haoren, zan

【在 x********e 的大作中提到】

: 汇报一下进展~
: PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
: 的量有区别,其他步骤都一样。
: zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
: 时候全飘了。

s*s2014-04-20 07:04

63 楼

Qiagene的应该挺好的

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

l*a2014-04-20 07:04

64 楼

用过很多家从来没有达到过50%以上回收率。基本上都是在1/6到1/3左右。
所以我觉得不错了。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

m*z2014-04-20 07:04

65 楼

我已经把kit从genejet全部换成了zymo的，优势有几点
1.操作时间和操作量至少减半，要是经常做几十个sample的感觉上区别就大了。
2.小体积elute优势太大了，我可以回收genotyping的胶条带送去测序。
3.价格不错
不明白qiagen这样的公司怎么还能活着，也许习惯是可怕的。

【在 x********e 的大作中提到】

: 汇报一下进展~
: PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
: 的量有区别,其他步骤都一样。
: zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
: 时候全飘了。

m*z2014-04-20 07:04

66 楼

另外楼主的情况有可能是溶胶buffer PH不对导致挂柱不好，或者因片段较大需要在
elute的时候
加热EB以及延长时间。
以前用过qiagen的kit，回收效率80%是能达到的，用dna ladder测试的

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

q*72014-04-20 07:04

67 楼

Much better than Qiagen kit and any other kits on the market.
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification

m*82014-04-20 07:04

68 楼

zymo

q*72014-04-20 07:04

69 楼

强烈推荐这个公司的胶回收和PCR纯化２合１KIT，可以提高克隆效率，价格巨便宜
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification

x*e2014-04-20 07:04

70 楼

你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
00~200mg。
实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
情况吗？
在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

m*82014-04-20 07:04

71 楼

http://www.clontech.com/US/Products/Nucleic_Acid_Purification/D

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

H*i2014-04-20 07:04

72 楼

我习惯用zymo的kit，那个特别小的柱子，用10ul-20ul左右的buff洗脱。

x*e2014-04-20 07:04

73 楼

我用过一次zymo，比QIAGEN好用
效率大概有多高？

【在 H*******i 的大作中提到】

: 我习惯用zymo的kit，那个特别小的柱子，用10ul-20ul左右的buff洗脱。

r*g2014-04-20 07:04

74 楼

直接切下来在dialysis tubing里面跑个人胶就行了
我一直用的原始办法很好用的

Y*n2014-04-20 07:04

75 楼

Zymo is very good. They have 25 ug column too.

t*k2014-04-20 07:04

76 楼

我一直用qiangen的没问题啊，1%的胶有点浓了，1K以上我都用0.8%，这样跑的时间短
，损失应该也少。融胶的时候有没有加NaAc？另外buffer要多加一点，宁可多离心几次。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

D*s2014-04-20 07:04

77 楼

Qiagen的胶回收系统有问题，回收效率很低，原因不是很明了。但是有个改进方法你可
以试试，就是不用50度融化胶块，就室温融化（放到那种旋转的设备上），大概10-20
分钟就能完全溶掉，回收效率会大大提高。
另外就是多加一点溶液溶胶。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

x*e2014-04-20 07:04

78 楼

如果条带单一，直接加2倍体积乙醇， 1/10 3M 醋酸钠， -20 》20分钟，14000*15min
, 4 degree,离心；沉淀（看不到也不要紧，小心吸去上清即可）再用70乙醇1ml洗一遍
（14000*10min, 4）,RT放10分钟，加10-20ul 水，个人觉得最后的浓度比Kit回收的
要高。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

s*s2014-04-20 07:04

79 楼

Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化

20

【在 D***s 的大作中提到】

: Qiagen的胶回收系统有问题，回收效率很低，原因不是很明了。但是有个改进方法你可
: 以试试，就是不用50度融化胶块，就室温融化（放到那种旋转的设备上），大概10-20
: 分钟就能完全溶掉，回收效率会大大提高。
: 另外就是多加一点溶液溶胶。
:
: 概1

x*e2014-04-20 07:04

80 楼

离心的时候DNA会从agarose gel里跑出来？

15min

【在 x*****e 的大作中提到】

: 如果条带单一，直接加2倍体积乙醇， 1/10 3M 醋酸钠， -20 》20分钟，14000*15min
: , 4 degree,离心；沉淀（看不到也不要紧，小心吸去上清即可）再用70乙醇1ml洗一遍
: （14000*10min, 4）,RT放10分钟，加10-20ul 水，个人觉得最后的浓度比Kit回收的
: 要高。
:
: 概1

x*e2014-04-20 07:04

81 楼

你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
80%以上。但是我一般只能回收30%

Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
20

【在 s******s 的大作中提到】

: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
:
: 20

l*y2014-04-20 07:04

82 楼

80%达不到，能有50%差不多了，简单点就开始多弄点dna去跑胶

达到

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
: 80%以上。但是我一般只能回收30%
:
: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
: 20

s*s2014-04-20 07:04

83 楼

80%没有，有50%就多加点被

【在 l***y 的大作中提到】

: 80%达不到，能有50%差不多了，简单点就开始多弄点dna去跑胶
:
: 达到

D*s2014-04-20 07:04

84 楼

没测过，不过感觉低于50%

达到

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
: 80%以上。但是我一般只能回收30%
:
: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
: 20

s*n2014-04-20 07:04

85 楼

试试Life Tech的Size Select，不用切胶，直接吸就得到

d*n2014-04-20 07:04

86 楼

我一直用qiagen的盒子，开始出现过这样的问题，但后来解决问题后，DNA回收基本没
出现过什么问题。解决如下：
1. 不要按说明书的那个比例加溶解液，只要加1~1.5倍的体积即可。这是因为3倍体积
过多的体积会dilute DNA，DNA与柱子结合是浓度依赖性的，所以浓度越高越好。我只
在第一次成果gel的重量，but never did it again. 目测体积即可，大部分gel淹了就
行。只要略延长incubion时间，用手指多弹几次，都能溶解。
2. 3M 醋酸钠(pH5.01)是必须的，（有时候，还吸1~2ul到试纸条上确认ph在酸性范围
内）。要保证黄色。由于上面的溶解液不是按标准的，所以酸度会被稀释。所以，无论
怎么样，“ 1/10 3M 醋酸钠” 只会有益无害。
3. Add ~50% isopropanol and mix well.
4. 低速过柱，5000~8000gx30sec, 防止过快，DNA没有足够的机会结合柱子.
5. 洗柱后，20000gx2min充分干燥柱子。防止残留成分改变H2O的成分而影响elution。
大概这样，你可以试试看。个人认为qiagen也许不是最好的，但如果你用qiagen连正常
的dna都提取不出来，你换试剂盒估计也同样做不出来。所以先试试看这个，看是否能
解决你的问题。

15min

【在 x*****e 的大作中提到】

: 如果条带单一，直接加2倍体积乙醇， 1/10 3M 醋酸钠， -20 》20分钟，14000*15min
: , 4 degree,离心；沉淀（看不到也不要紧，小心吸去上清即可）再用70乙醇1ml洗一遍
: （14000*10min, 4）,RT放10分钟，加10-20ul 水，个人觉得最后的浓度比Kit回收的
: 要高。
:
: 概1

h*r2014-04-20 07:04

87 楼

化完胶之后，一定要等solution凉下来，再loading到柱子上。着急的话在冰上放一小
会儿。另外loading在柱子上放一小会儿，等吸附平衡。加NaAC好用，大多数时候偷懒
没加。
想增加回收率的话，可以考虑一下稍微共加热一下elution buffer。然后还是放一下会
儿。
总之就是偏酸吸附，偏碱解附；低温吸附，高温解附；高盐吸附，低盐解附。

s*s2014-04-20 07:04

88 楼

嗯。有很多小trick，其实qiagen都build-in在qiacube里面了，
所以qiacube抽的东西就是质量好，手工不行。我们一直怀疑qiagen
有点温控和转速的小秘密不肯公布

【在 h**********r 的大作中提到】

: 化完胶之后，一定要等solution凉下来，再loading到柱子上。着急的话在冰上放一小
: 会儿。另外loading在柱子上放一小会儿，等吸附平衡。加NaAC好用，大多数时候偷懒
: 没加。
: 想增加回收率的话，可以考虑一下稍微共加热一下elution buffer。然后还是放一下会
: 儿。
: 总之就是偏酸吸附，偏碱解附；低温吸附，高温解附；高盐吸附，低盐解附。

j*x2014-04-20 07:04

89 楼

没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。

x*e2014-04-20 07:04

90 楼

我order了GeneJet. 正好今天有人来推销,给我了zymo的sample,这两天准备都试试,比
较一下效率

【在 j****x 的大作中提到】

: 没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
: 比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。

x*e2014-04-20 07:04

91 楼

thx
NaAc和预热EB我是知道的, 温度的trick第一次听说。说不定就是这个问题。QIAGEN
PCR clean up我用着倒是一点问题都没有。

【在 h**********r 的大作中提到】

: 化完胶之后，一定要等solution凉下来，再loading到柱子上。着急的话在冰上放一小
: 会儿。另外loading在柱子上放一小会儿，等吸附平衡。加NaAC好用，大多数时候偷懒
: 没加。
: 想增加回收率的话，可以考虑一下稍微共加热一下elution buffer。然后还是放一下会
: 儿。
: 总之就是偏酸吸附，偏碱解附；低温吸附，高温解附；高盐吸附，低盐解附。

c*r2014-04-20 07:04

92 楼

用过这个，个人感觉比Qiagen好。回收率50%以上吧。

【在 j****x 的大作中提到】

: 没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
: 比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。

n*e2014-04-20 07:04

93 楼

我的经验是QIAGEN融解胶的时候室温+vortex,EB不预热显著提高回收率（2%胶回收~
200bp带）。

s*n2014-04-20 07:04

94 楼

好帖 mark

x*e2014-04-20 07:04

95 楼

搜了一下qiacube,吓尿了

【在 s******s 的大作中提到】

: 嗯。有很多小trick，其实qiagen都build-in在qiacube里面了，
: 所以qiacube抽的东西就是质量好，手工不行。我们一直怀疑qiagen
: 有点温控和转速的小秘密不肯公布

s*s2014-04-20 07:04

96 楼

这玩意儿异常好用，当然速度未必比你手动快，但是省力啊。
缺点是，质量太差，经常这个哪个问题，要叫人来修。

【在 x********e 的大作中提到】

: 搜了一下qiacube,吓尿了

j*x2014-04-20 07:04

97 楼

当初放弃qiatube转投另一个系统的主要原因是通量太低，后来居然出了个qiacube HT.
..

【在 s******s 的大作中提到】

: 这玩意儿异常好用，当然速度未必比你手动快，但是省力啊。
: 缺点是，质量太差，经常这个哪个问题，要叫人来修。

x*e2014-04-20 07:04

98 楼

汇报一下进展~
PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
的量有区别,其他步骤都一样。
zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
时候全飘了。

【在 x********e 的大作中提到】

: 我order了GeneJet. 正好今天有人来推销,给我了zymo的sample,这两天准备都试试,比
: 较一下效率

g*52014-04-20 07:04

99 楼

haoren, zan

【在 x********e 的大作中提到】

: 汇报一下进展~
: PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
: 的量有区别,其他步骤都一样。
: zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
: 时候全飘了。

s*s2014-04-20 07:04

100 楼

Qiagene的应该挺好的

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

l*a2014-04-20 07:04

101 楼

用过很多家从来没有达到过50%以上回收率。基本上都是在1/6到1/3左右。
所以我觉得不错了。

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

m*z2014-04-20 07:04

102 楼

我已经把kit从genejet全部换成了zymo的，优势有几点
1.操作时间和操作量至少减半，要是经常做几十个sample的感觉上区别就大了。
2.小体积elute优势太大了，我可以回收genotyping的胶条带送去测序。
3.价格不错
不明白qiagen这样的公司怎么还能活着，也许习惯是可怕的。

【在 x********e 的大作中提到】

: 汇报一下进展~
: PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
: 的量有区别,其他步骤都一样。
: zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
: 时候全飘了。

m*z2014-04-20 07:04

103 楼

另外楼主的情况有可能是溶胶buffer PH不对导致挂柱不好，或者因片段较大需要在
elute的时候
加热EB以及延长时间。
以前用过qiagen的kit，回收效率80%是能达到的，用dna ladder测试的

概1

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
: 我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
: 00~200mg。
: 实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
: 新kit）大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
: 情况吗？
: 在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
: ，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~

q*72014-04-20 07:04

104 楼

Much better than Qiagen kit and any other kits on the market.
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification

m*82014-04-20 07:04

105 楼

zymo

q*72014-04-20 07:04

106 楼

强烈推荐这个公司的胶回收和PCR纯化２合１KIT，可以提高克隆效率，价格巨便宜
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification

g*52014-04-20 07:04

107 楼

recently try zymo one, but not very good.

g*52014-04-20 07:04

108 楼

recently try zymo one, but not very good.

l*a2014-04-20 07:04

109 楼

我一般拿到15% 到30%，取决于load的sample有多浓。

达到

【在 x********e 的大作中提到】

: 你们胶回收都能达到多少的recover rate？基本上kit都会说自己的recover rate能达到
: 80%以上。但是我一般只能回收30%
:
: Qiagen胶回收的最大问题不是回收效率，是脏。
: 我都是30+50 elute两次下来，再过一遍minElute浓缩纯化
: 20

g*52014-04-20 07:04

110 楼

use this method and got 30% back.

【在 d********n 的大作中提到】

: 我一直用qiagen的盒子，开始出现过这样的问题，但后来解决问题后，DNA回收基本没
: 出现过什么问题。解决如下：
: 1. 不要按说明书的那个比例加溶解液，只要加1~1.5倍的体积即可。这是因为3倍体积
: 过多的体积会dilute DNA，DNA与柱子结合是浓度依赖性的，所以浓度越高越好。我只
: 在第一次成果gel的重量，but never did it again. 目测体积即可，大部分gel淹了就
: 行。只要略延长incubion时间，用手指多弹几次，都能溶解。
: 2. 3M 醋酸钠(pH5.01)是必须的，（有时候，还吸1~2ul到试纸条上确认ph在酸性范围
: 内）。要保证黄色。由于上面的溶解液不是按标准的，所以酸度会被稀释。所以，无论
: 怎么样，“ 1/10 3M 醋酸钠” 只会有益无害。
: 3. Add ~50% isopropanol and mix well.

s*82014-04-20 07:04

111 楼

mark学习了