[请教]CRISPR_gRNA promoter的选择# Biology - 生物学
h*y
1 楼
485, 131 and 765 pending. 准备辞职回国工作了，准备AP批下来了再回美国travel
。请问这样从美国离境的时候没有
AP，回美国的时候拿AP入境的会有问题吗？
。请问这样从美国离境的时候没有
AP，回美国的时候拿AP入境的会有问题吗？
x*s
2 楼
1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
皮卡！皮卡丘！
就喜欢这种简单的美好！！
看到第几句你流泪了？
2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
皮卡！皮卡丘！
就喜欢这种简单的美好！！
看到第几句你流泪了？
C*n
3 楼
最近打算用CRISPR/Cas 在研究的物种里试试，因为该物种遗传学研究系统没有很完善
的构建起来，比如gene-knockout。
现在的情况是Due to somehow reason, 始终找不到reliable/active 的U6 promoter。
我在想之所以各种published 的方法里都用U6 promoter，是不是因为在Mammalian
cell 里，U6 promoter经常用来转录小RNA？
这里想请教各位有经验的大侠，有没有人试过用RNA polymerase II 来替代Pol III 作
为小RNA的promoter? 谢谢。
的构建起来，比如gene-knockout。
现在的情况是Due to somehow reason, 始终找不到reliable/active 的U6 promoter。
我在想之所以各种published 的方法里都用U6 promoter，是不是因为在Mammalian
cell 里，U6 promoter经常用来转录小RNA？
这里想请教各位有经验的大侠，有没有人试过用RNA polymerase II 来替代Pol III 作
为小RNA的promoter? 谢谢。
I*y
4 楼
AP 没批回国， 理论上， 你 放弃了 绿卡申请。
n*i
5 楼
俺一直在流泪——因为现在花粉过敏中。
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
s*s
6 楼
可以直接转RNA吗
【在 C****n 的大作中提到】
: 最近打算用CRISPR/Cas 在研究的物种里试试，因为该物种遗传学研究系统没有很完善
: 的构建起来，比如gene-knockout。
: 现在的情况是Due to somehow reason, 始终找不到reliable/active 的U6 promoter。
: 我在想之所以各种published 的方法里都用U6 promoter，是不是因为在Mammalian
: cell 里，U6 promoter经常用来转录小RNA？
: 这里想请教各位有经验的大侠，有没有人试过用RNA polymerase II 来替代Pol III 作
: 为小RNA的promoter? 谢谢。
【在 C****n 的大作中提到】
: 最近打算用CRISPR/Cas 在研究的物种里试试，因为该物种遗传学研究系统没有很完善
: 的构建起来，比如gene-knockout。
: 现在的情况是Due to somehow reason, 始终找不到reliable/active 的U6 promoter。
: 我在想之所以各种published 的方法里都用U6 promoter，是不是因为在Mammalian
: cell 里，U6 promoter经常用来转录小RNA？
: 这里想请教各位有经验的大侠，有没有人试过用RNA polymerase II 来替代Pol III 作
: 为小RNA的promoter? 谢谢。
h*y
7 楼
那我能不能quit我现在的job，在家里呆着(remotely work for the company in China
that I'm going to join)，wait
for my AP and move back when I get it?
Thanks a lot!
【在 I******y 的大作中提到】
: AP 没批回国， 理论上， 你 放弃了 绿卡申请。
that I'm going to join)，wait
for my AP and move back when I get it?
Thanks a lot!
【在 I******y 的大作中提到】
: AP 没批回国， 理论上， 你 放弃了 绿卡申请。
x*s
8 楼
抱抱
【在 n***i 的大作中提到】
: 俺一直在流泪——因为现在花粉过敏中。
【在 n***i 的大作中提到】
: 俺一直在流泪——因为现在花粉过敏中。
C*n
9 楼
没试过，microinjection 系统没有。 直接转single strand RNA 担心会降解，but it
's a good point.
【在 s*********s 的大作中提到】
: 可以直接转RNA吗
's a good point.
【在 s*********s 的大作中提到】
: 可以直接转RNA吗
c*e
10 楼
神曲？
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
d*u
11 楼
你换H1试试呢？
x*s
12 楼
你丫这么没情调
【在 c********e 的大作中提到】
: 神曲？
【在 c********e 的大作中提到】
: 神曲？
s*g
13 楼
You could try using the native promoter of crRNA and tracrRNA in
Streptococcus pyogenes as used in the paper below.
http://nar.oxfordjournals.org/content/41/15/7429.long
The use of RNA POL II promoter for the expression of sgRNA has also been
reported.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24837679
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24770325
Streptococcus pyogenes as used in the paper below.
http://nar.oxfordjournals.org/content/41/15/7429.long
The use of RNA POL II promoter for the expression of sgRNA has also been
reported.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24837679
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24770325
c*e
14 楼
看到这句，终于哭了。。。
【在 x**********s 的大作中提到】
: 你丫这么没情调
【在 x**********s 的大作中提到】
: 你丫这么没情调
C*n
15 楼
这个考虑过，不过我想如果是这个话，所需要的工作和U6是一样的。得先证明我们这个
物种里的对应ortholog有活性。
【在 d****u 的大作中提到】
: 你换H1试试呢？
物种里的对应ortholog有活性。
【在 d****u 的大作中提到】
: 你换H1试试呢？
c*e
16 楼
看到第四句，还没有头绪。。就疯了。
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
C*n
17 楼
Thanks for your information.
Regarding the first strategy, I guess it's necessary to co-transform an
extra component, that is the corresponding bacterial polymerase, which may
work in our organism(eukaryote).
The second suggestion is very interesting, although it also needs an extra
factor, such as Csy4. I am gonna dip it up.
【在 s*****g 的大作中提到】
: You could try using the native promoter of crRNA and tracrRNA in
: Streptococcus pyogenes as used in the paper below.
: http://nar.oxfordjournals.org/content/41/15/7429.long
: The use of RNA POL II promoter for the expression of sgRNA has also been
: reported.
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24837679
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24770325
Regarding the first strategy, I guess it's necessary to co-transform an
extra component, that is the corresponding bacterial polymerase, which may
work in our organism(eukaryote).
The second suggestion is very interesting, although it also needs an extra
factor, such as Csy4. I am gonna dip it up.
【在 s*****g 的大作中提到】
: You could try using the native promoter of crRNA and tracrRNA in
: Streptococcus pyogenes as used in the paper below.
: http://nar.oxfordjournals.org/content/41/15/7429.long
: The use of RNA POL II promoter for the expression of sgRNA has also been
: reported.
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24837679
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24770325
n*i
18 楼
“丫”这个字充分表现了广大人民群众对版主的喜爱之情……
【在 x**********s 的大作中提到】
: 你丫这么没情调
【在 x**********s 的大作中提到】
: 你丫这么没情调
x*s
19 楼
至少我对橙子是无比喜爱的
【在 n***i 的大作中提到】
: “丫”这个字充分表现了广大人民群众对版主的喜爱之情……
【在 n***i 的大作中提到】
: “丫”这个字充分表现了广大人民群众对版主的喜爱之情……
c*e
20 楼
那你还说我！！
x*s
21 楼
哦，对，我赶紧去安慰一下xixi
她被我气的好几天没来了
【在 c********e 的大作中提到】
: 那你还说我！！
她被我气的好几天没来了
【在 c********e 的大作中提到】
: 那你还说我！！
l*u
22 楼
我喊了一声
【在 x**********s 的大作中提到】
: 哦，对，我赶紧去安慰一下xixi
: 她被我气的好几天没来了
【在 x**********s 的大作中提到】
: 哦，对，我赶紧去安慰一下xixi
: 她被我气的好几天没来了
w*r
23 楼
lol
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
【在 x**********s 的大作中提到】
: 1 皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡，皮卡皮，皮卡。
: 2 皮卡皮卡皮：“皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡皮。”
: 3 皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡？皮卡。皮卡皮卡皮卡皮？皮卡！
: 4 皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡，皮卡皮，皮卡皮卡皮卡。皮卡。
: 5 皮卡皮卡皮卡，皮卡。皮卡皮卡皮卡皮，皮皮，皮卡。
: 6 皮卡皮卡！皮卡。皮卡！皮卡。皮卡皮卡皮卡！皮卡？皮卡。
: 7 皮卡丘~~~~~~~~皮卡皮卡，皮卡，皮卡皮卡？皮卡皮！
: 8 皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡：皮卡皮卡。
: 9 皮卡皮卡皮卡：皮卡皮卡，皮卡皮卡。皮卡皮卡皮卡皮卡皮：皮卡。
: 10 皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡皮卡，皮卡皮卡！皮卡丘~！！！皮卡！皮卡皮皮！
S*e
24 楼
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