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截断性启动子报告基因实验疑惑求助
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截断性启动子报告基因实验疑惑求助# Biology - 生物学
b*8
1
又来请教各位大侠了,
我最近发现对一株细胞做某种处理后,一个基因(暂命名为A)的mRNA和protein都显著
下调,结果已经重复多次。现在推测这种处理因素可能会影响细胞株中A基因的转录,
于是构建了一系列逐渐缩短的启动子报告基因(基于pGL3-basic载体)和renilla载体
一起转染细胞。双荧光素酶报告基因分析发现从转录起始位点上游1000bp处开始,一直
到上游150bp,跟对照处理相比,处理组细胞的报告基因的活性一直都有显著下降。见
图A所示。但是当把所有组的报告基因活性都先被对照组pGL3-promoter的活性
normalise后,统计分析却显示到上游200bp时报告基因的活性就没有差异了。两张
figure都是在grapad prism里面用two way anova做的统计分析,结果却截然不同,这
关系到我接下来具体分析哪一个区域的问题,请大家帮我看看,到底哪一种统计方法更
合理?谢谢
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C*h
2
描述太混乱了。

【在 b**********8 的大作中提到】
: 又来请教各位大侠了,
: 我最近发现对一株细胞做某种处理后,一个基因(暂命名为A)的mRNA和protein都显著
: 下调,结果已经重复多次。现在推测这种处理因素可能会影响细胞株中A基因的转录,
: 于是构建了一系列逐渐缩短的启动子报告基因(基于pGL3-basic载体)和renilla载体
: 一起转染细胞。双荧光素酶报告基因分析发现从转录起始位点上游1000bp处开始,一直
: 到上游150bp,跟对照处理相比,处理组细胞的报告基因的活性一直都有显著下降。见
: 图A所示。但是当把所有组的报告基因活性都先被对照组pGL3-promoter的活性
: normalise后,统计分析却显示到上游200bp时报告基因的活性就没有差异了。两张
: figure都是在grapad prism里面用two way anova做的统计分析,结果却截然不同,这
: 关系到我接下来具体分析哪一个区域的问题,请大家帮我看看,到底哪一种统计方法更

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v*e
3
不是很了解你的领域,你得看看别人怎么做的,你那启动子报告基因的protocol怎么说
的。不太了解,只是觉得可能normalize之后的结果才是对的吧。
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b*8
4
不好意思,可能是我的表达能力不够,不过请大家耐心的看一下,然后参考我贴的示意
图,就能明白我的问题是什么了,谢谢!
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v*e
5

你那图,大部分人都看不了吧。改成jpg吧。

【在 b**********8 的大作中提到】
: 不好意思,可能是我的表达能力不够,不过请大家耐心的看一下,然后参考我贴的示意
: 图,就能明白我的问题是什么了,谢谢!

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m*5
6
其实大多promoter reporter就是扯淡的
特别是proximal promoter.很多时候regulation明明在distal
enhancer上,还煞有介事地在proximal promoter上研究半天
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