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密度梯度离心但是不分层怎么办！！？大神救命

密度梯度离心但是不分层怎么办！！？大神救命# Biology - 生物学

m*i2015-05-26 07:05

1 楼

我们是政治庇护，上移民法庭的时候赢了官司，但后来移民局提出上诉，我们却输了。
今年我去申请工卡的时候却拿到了两年制的A5卡，听别人说这个就可以申请绿卡，但是
我很困惑我们已经输了，请问一下我们可以去申请绿卡吗，有没有被遣返的危险，还有
如果可以申请绿卡是不是要填I485？谢谢大家

r*k2015-05-26 07:05

2 楼

最近小弟小extract early endosome。用不同浓度的sucrose 但是在超速离心管里面
加入不同浓度的sucrose以后根本就不分层呀？这到底是怎么回事谢谢谢谢谢谢谢谢

T*i2015-05-26 07:05

3 楼

加每一层的时候不够小心呗。梯度差别小的话，可以从低往高加，用一个细长枪头或针
头往管底注入，慢慢的。

【在 r******k 的大作中提到】

: 最近小弟小extract early endosome。用不同浓度的sucrose 但是在超速离心管里面
: 加入不同浓度的sucrose以后根本就不分层呀？这到底是怎么回事谢谢谢谢谢谢谢谢

v*m2015-05-26 07:05

4 楼

有仪器做连续蔗糖梯度的，类似层析用的梯度混合仪。手工重复性差很多。

【在 T****i 的大作中提到】

: 加每一层的时候不够小心呗。梯度差别小的话，可以从低往高加，用一个细长枪头或针
: 头往管底注入，慢慢的。

T*i2015-05-26 07:05

5 楼

Gradient master, 还可以自动收集fraction。就是用的少的话不值得买。

【在 v**********m 的大作中提到】

: 有仪器做连续蔗糖梯度的，类似层析用的梯度混合仪。手工重复性差很多。

r*k2015-05-26 07:05

6 楼

我是非常小心的加的但是还是没有分层。我是从40。6%， 35%， 25% 然后剩下的用
buffer补齐。只有40.6%% 到35%可以看到但是35%到25%看不到。。。。。。

【在 T****i 的大作中提到】

: 加每一层的时候不够小心呗。梯度差别小的话，可以从低往高加，用一个细长枪头或针
: 头往管底注入，慢慢的。

T*i2015-05-26 07:05

7 楼

那只好买gradient master了。要不你看看可不可以用optiprep 代替sucrose。

【在 r******k 的大作中提到】

: 我是非常小心的加的但是还是没有分层。我是从40。6%， 35%， 25% 然后剩下的用
: buffer补齐。只有40.6%% 到35%可以看到但是35%到25%看不到。。。。。。

T*i2015-05-26 07:05

8 楼

那只好买gradient master了。要不你看看可不可以用optiprep 代替sucrose。

【在 r******k 的大作中提到】

: 我是非常小心的加的但是还是没有分层。我是从40。6%， 35%， 25% 然后剩下的用
: buffer补齐。只有40.6%% 到35%可以看到但是35%到25%看不到。。。。。。

n*e2015-05-26 07:05

9 楼

应该没问题。可以尝试从上面加或者从下面加。就算看不到也继续离心。拿一个
管 load一个dye 比如说comassi blue之类的离心后看dye的分布确定剃度

【在 r******k 的大作中提到】

: 我是非常小心的加的但是还是没有分层。我是从40。6%， 35%， 25% 然后剩下的用
: buffer补齐。只有40.6%% 到35%可以看到但是35%到25%看不到。。。。。。

r*k2015-05-26 07:05

10 楼

Hi您好
我没太明白怎么把commase blue 加进去？

【在 n********e 的大作中提到】

: 应该没问题。可以尝试从上面加或者从下面加。就算看不到也继续离心。拿一个
: 管 load一个dye 比如说comassi blue之类的离心后看dye的分布确定剃度

r*k2015-05-26 07:05

11 楼

如果没有分层会不会是因为细胞量有点少？我用的10cm的dish的细胞。

d*m2015-05-26 07:05

12 楼

手艺赶不上就上仪器吧，那个弄连续密度梯度的仪器很好用，重复性也好

【在 r******k 的大作中提到】

: 我是非常小心的加的但是还是没有分层。我是从40。6%， 35%， 25% 然后剩下的用
: buffer补齐。只有40.6%% 到35%可以看到但是35%到25%看不到。。。。。。

s*y2015-05-26 07:05

13 楼

梯度没做好呗。作这个东西的时候一定要把离心管固定好，然后用很长的针头慢慢的（
注意，一定要慢慢的）把高浓度的溶液往底部加。
先做几次练习，练到你能肉眼看到各种分层的地步，再做你的实验。
另外，我记得有些公司是卖哪种分层溶液的，买回来后在管子里离心上一个晚上就会形
成一个自动的连续分层。不过我记不住是哪个公司的了。这个实验我是在研究生的时候
做的了。

【在 r******k 的大作中提到】