技术问题:Trizol抽提RNA做RNA-Seq,用DNase处理的问题# Biology - 生物学n*s2015-07-29 07:071 楼没有人干活,对于要做实验的法考题来说就是致命的尤其小学校,n流,找能干的学生基本没有指望,当地找的人,基本上是PI自己花钱花时间找闲杂人来做培训,而且培训后,也不一定有能力出活。是不是只能想办法海归了?
d*f2015-07-29 07:072 楼妻子外出跟同学一起吃饭,丈夫交代她早点回来;可妻子偏偏彻夜不归,打电话也不接。就为这点琐事,妻子第二天回家后,被其丈夫掐死。厦门中级法院一审判决,陈某犯故意杀人罪,判处无期徒刑,剥夺政治权利终身;赔偿附带民事经济损失人民币73万余元。昨日,这一判决正式生效。陈某今年27岁,漳州龙海人。去年12月2日晚,其妻子王某外出跟同学一起吃 饭,出门前,陈某交代妻子早点回来。但当晚10点多,陈某回到暂住处,却发现妻子仍未回家。这时,陈某给妻子打了几个电话,但每次电话接通后,都被妻子按断了;陈某就改发短信,但妻子连短信也没有回复,最后,其妻子的手机转入了来电提醒。次日凌晨1时30分许,王某还没有回来,陈某一生气,将家中的电视机屏幕砸了。次日上午8时多,陈某醒来发现妻子仍未回家,立即再给妻子打电话,但后者电话还是来电提醒。当日上午10时30分,陈某到妻子的单位接她回家。回家后,二人再次为彻夜不归这事吵了一架。当日下午4时30分,王某给她亲戚打电话说晚上要去她家吃饭,陈某问她“是不是今天晚上又不回来”,王某说“是,要不然你要怎样?”随后,二人再次吵起来。这次,陈某动手打了妻子,最终掐死了妻子。据陈某交代,他与妻子王某婚后经常因生活琐事吵架。判决后,陈某未提出上诉。
b*n2015-07-29 07:073 楼上网查了一些内容,发现相当一部分人推荐用DNase处理样品。我想能否在Trizol抽提中加chloroform离心后的水相中加DNase,然后再加0.5mlTrizol杀灭和去除DNase。不确定水相中的成分,DNase的活性如何,再用少量Trizol抽提是否能把DNase去除干净。或者用isopropanol沉淀后再加Dnase处理,再用Trizol去除DNase?这样沉淀的步骤对RNA的损失比较大。请大家发表一下意见。
g*t2015-07-29 07:074 楼学nieng教授找国内的大学远程指导,和做科研招自带干粮的访学招本科生志愿者了?【在 n**s 的大作中提到】: 没有人干活,对于要做实验的法考题来说就是致命的: 尤其小学校,n流,找能干的学生基本没有指望,当地找的人,基本上是PI自己花钱花: 时间找闲杂人来做培训,而且培训后,也不一定有能力出活。是不是只能想办法海归了?
x*e2015-07-29 07:076 楼其实更应该担心是DNAase能否起作用,如何检测DNase起作用。有时候问半天还不如自己做一下,生命短暂,用kit吧,尤其是你的样品是用来做RNA-seq。净。【在 b*****n 的大作中提到】: 上网查了一些内容,发现相当一部分人推荐用DNase处理样品。: 我想能否在Trizol抽提中加chloroform离心后的水相中加DNase,然后再加0.5ml: Trizol杀灭和去除DNase。: 不确定水相中的成分,DNase的活性如何,再用少量Trizol抽提是否能把DNase去除干净。: 或者用isopropanol沉淀后再加Dnase处理,再用Trizol去除DNase?这样沉淀的步骤对: RNA的损失比较大。: 请大家发表一下意见。
o*12015-07-29 07:077 楼干吗掐死人?脑子进水了?你也彻夜不归不就完了。30【在 d********f 的大作中提到】: 妻子外出跟同学一起吃饭,丈夫交代她早点回来;可妻子偏偏彻夜不归,打电话也不接: 。就为这点琐事,妻子第二天回家后,被其丈夫掐死。: 厦门中级法院一审判决,陈某犯故意杀人罪,判处无期徒刑,剥夺政治权利终身;赔偿: 附带民事经济损失人民币73万余元。昨日,这一判决正式生效。: 陈某今年27岁,漳州龙海人。去年12月2日晚,其妻子王某外出跟同学一起吃 饭,出门: 前,陈某交代妻子早点回来。但当晚10点多,陈某回到暂住处,却发现妻子仍未回家。: 这时,陈某给妻子打了几个电话,但每次电话接通后,都被妻子按断了;陈某就改发短: 信,但妻子连短信也没有回复,最后,其妻子的手机转入了来电提醒。次日凌晨1时30: 分许,王某还没有回来,陈某一生气,将家中的电视机屏幕砸了。次日上午8时多,陈: 某醒来发现妻子仍未回家,立即再给妻子打电话,但后者电话还是来电提醒。
s*s2015-07-29 07:078 楼你trizol, chloroform污染过的水相,DNase不太可能有活性。反正我都是用kit的。。。净。【在 b*****n 的大作中提到】: 上网查了一些内容,发现相当一部分人推荐用DNase处理样品。: 我想能否在Trizol抽提中加chloroform离心后的水相中加DNase,然后再加0.5ml: Trizol杀灭和去除DNase。: 不确定水相中的成分,DNase的活性如何,再用少量Trizol抽提是否能把DNase去除干净。: 或者用isopropanol沉淀后再加Dnase处理,再用Trizol去除DNase?这样沉淀的步骤对: RNA的损失比较大。: 请大家发表一下意见。
b*n2015-07-29 07:0710 楼今天试了一下,这样处理genome DNA全部去除干净,除了RNA量有点损失外,其它一切都好。【在 s******s 的大作中提到】: 你trizol, chloroform污染过的水相,DNase不太可能有活性。: 反正我都是用kit的。。。: : 净。
a*e2015-07-29 07:0712 楼哇靠,这还叫琐事30【在 d********f 的大作中提到】: 妻子外出跟同学一起吃饭,丈夫交代她早点回来;可妻子偏偏彻夜不归,打电话也不接: 。就为这点琐事,妻子第二天回家后,被其丈夫掐死。: 厦门中级法院一审判决,陈某犯故意杀人罪,判处无期徒刑,剥夺政治权利终身;赔偿: 附带民事经济损失人民币73万余元。昨日,这一判决正式生效。: 陈某今年27岁,漳州龙海人。去年12月2日晚,其妻子王某外出跟同学一起吃 饭,出门: 前,陈某交代妻子早点回来。但当晚10点多,陈某回到暂住处,却发现妻子仍未回家。: 这时,陈某给妻子打了几个电话,但每次电话接通后,都被妻子按断了;陈某就改发短: 信,但妻子连短信也没有回复,最后,其妻子的手机转入了来电提醒。次日凌晨1时30: 分许,王某还没有回来,陈某一生气,将家中的电视机屏幕砸了。次日上午8时多,陈: 某醒来发现妻子仍未回家,立即再给妻子打电话,但后者电话还是来电提醒。