问个RNAseq检测mRNA变化的问题。# Biology - 生物学E*e2015-10-03 07:101 楼如果没有, 会有什么后果? 主要是弄个family room 或guest room, 方便双方父母过来探亲.如果必须办, 需要多长时间,要交什么费吗?多少?谢谢
E*e2015-10-03 07:105 楼其实我不想要permit. 弄个room就是方便自己, 住的舒服一点. 也不指望以后卖的话,多卖钱.谢谢.【在 c*******u 的大作中提到】: 具体问你们county或者city吧。
s*y2015-10-03 07:108 楼不能用那些RNA 保存试剂先处理一下细胞么?【在 O**********a 的大作中提到】: 细胞要从老鼠里面分出来,耗时很久;然后digest、FACS分选,最后到裂解细胞;要把: 细胞折磨4-5h。: 这个过程mRNA表达谱会有比较大的变动吧?
H*72015-10-03 07:109 楼permit又不花钱,何乐而不搞?【在 E**********e 的大作中提到】: 其实我不想要permit. 弄个room就是方便自己, 住的舒服一点. 也不指望以后卖的话,: 多卖钱.: 谢谢.
a*s2015-10-03 07:1011 楼好像婚姻之外搞个小三。【在 E**********e 的大作中提到】: 其实我不想要permit. 弄个room就是方便自己, 住的舒服一点. 也不指望以后卖的话,: 多卖钱.: 谢谢.
O*a2015-10-03 07:1012 楼就是从杀老鼠分离tissue到酶解,再到FACS获得细胞,最后能裂解细胞,动作快也需要3-4h。你说的RNA保存试剂是什么?【在 s******y 的大作中提到】: 不能用那些RNA 保存试剂先处理一下细胞么?
s*y2015-10-03 07:1015 楼Such as RNAlater, DNA/RNA Shield, etc.?【在 O**********a 的大作中提到】: 就是从杀老鼠分离tissue到酶解,再到FACS获得细胞,最后能裂解细胞,动作快也需要: 3-4h。: 你说的RNA保存试剂是什么?
l*y2015-10-03 07:1017 楼放冰上几小时还好都是这么做的,但是要facs要处理就不好说了得看要做的是什么,有个control做横向比较的话可能问题不大,比如说比较wt和mut老鼠里同一种细胞,处理过程一样的话应该可以。如果就是把某种细胞sort出来看看啥表达啥不表达,这个得想其他办法好好validate的
O*a2015-10-03 07:1018 楼哎,我就是后者啊,sort出来看表达谱,没有KO对照。怎么横向比较啊?同时测sort出来的negative细胞?感觉还是不行啊。[在 liphy (liphy) 的大作中提到:]:放冰上几小时还好都是这么做的,但是要facs要处理就不好说了:得看要做的是什么,有个control做横向比较的话可能问题不大,比如说比较wt和mut老鼠里同一种细胞,处理过程一样的话应该可以。如果就是把某种细胞sort出来看看啥表达啥不表达,这个得想其他办法好好validate的:...........
r*m2015-10-03 07:1019 楼组织切出来后直接扔进液氮,然后加buffer RLT homogenize。。。要sorting的话,那个过程无论如何对基因表达有影响,测到的是细胞在sorting这种非自然的环境下的stress response。。。
y*i2015-10-03 07:1021 楼所有Buffer里面加 actinomycin【在 O**********a 的大作中提到】: 细胞要从老鼠里面分出来,耗时很久;然后digest、FACS分选,最后到裂解细胞;要把: 细胞折磨4-5h。: 这个过程mRNA表达谱会有比较大的变动吧?
l*y2015-10-03 07:1022 楼neg的没什么用也得做,看看能不能去掉点处理产生的表达变化重点是有没有想过表达谱里想看的是什么基因,有没有好的下游验证的手段只是瞎蒙的话又不差钱的就先做了再说吧,再多想也是纸上谈兵mut【在 O**********a 的大作中提到】: 哎,我就是后者啊,sort出来看表达谱,没有KO对照。: 怎么横向比较啊?同时测sort出来的negative细胞?感觉还是不行啊。: [在 liphy (liphy) 的大作中提到:]: :放冰上几小时还好都是这么做的,但是要facs要处理就不好说了: :得看要做的是什么,有个control做横向比较的话可能问题不大,比如说比较wt和mut: 老鼠里同一种细胞,处理过程一样的话应该可以。如果就是把某种细胞sort出来看看啥: 表达啥不表达,这个得想其他办法好好validate的: :...........
t*52015-10-03 07:1023 楼这个是真有影响的,如果看ribosome的谱在处理前与后明显有差别,但大家都默认这种差别影响不大,可变的方法是有人用0.1% formaldehyde固定后再处理【在 O**********a 的大作中提到】: 细胞要从老鼠里面分出来,耗时很久;然后digest、FACS分选,最后到裂解细胞;要把: 细胞折磨4-5h。: 这个过程mRNA表达谱会有比较大的变动吧?