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Cell signaling的抗体很难work啊
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Cell signaling的抗体很难work啊# Biology - 生物学
t*g
1
是eb3和eb2在吵架么??为毛呢?
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a*7
2
板上的朋友们一定记得我去年刚来时,奔的我家的侧院,一片荒地,种了一年的玫瑰,
果树等等等等,这个春天终于有些颜色了,上片片了
今年准备在这里弄个玫瑰园
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M*C
3
不知道在大家手上work的怎么样?买过好几种抗体。
在我手里,trouble很多啊,要么一堆杂带,没有特异带;要么背景很脏很黑,也看不
到特异带;要么带是白色的,并且结果也不是想要的。而类似的问题,我handle其他公
司的,失败率没这么高。测同一个蛋白,abcam的很好用,clean,结果正确。cell sig
的乱七八糟。trouble呢,公司都宣称在他们手里好用。
他们的western protocol是这样的,很不一般,大家觉得合理吗
Block: 5% Milk TBST (他们说不能用BSA)
一抗: 5% BSA TBST 稀释
二抗: 5% Milk TBST
平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block, 一抗直接在TBST. 二抗从来只
是TBST. work的抗体总是work了。
而cell sig 的, 有的抗体,即使完全按照他们的说法,甚至他们寄来 positive ctrl
, 也不work, 而他们的positive ctrl, 我用 abcam的抗体轻易检测出。 abcam 的
问题是现在卖的太贵。而cell sig的花了钱不work很不爽。
还有,每次troubleshooting他们几乎都是要颠覆别人所有的东西,我们用PVDF,他们说
要用nitrocellulose; 我们用AP二抗,他们说要用 HRP;我们用ECF,他们说用ECL. 而
事实上我们多年一直用PVDF AP ECF , 无数抗体都是work的。 糟糕的是, 即使你改
用 HRP,ECL,并不解决问题。
他们的抗体完全不像我曾经印象中的那么权威。 他们的的技术服务总是当别人不会做
western的样子,并且要颠覆别人work多年的方法,全部照他们的。浪费很多时间
trouble shooting。 而santa cruz我们一说不work,经常二话不说寄另外一个来。
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H*5
4
哈哈,是EB1来看笑话了吗
大概就是以前一直EB2比EB3快两三年,所以世界各国人民能申EB2就申EB2(要求硕士学
位或5年工作经验等要求)。
由于中国人的个体都很优秀,申EB2的人太多EB3太少,从去年起,EB3C的排期飞速前进
,甚至超过EB2C两三年。
这时美国移民律师协会发信说,可以给EB2C的人申请另一个EB3的I-140,同时保留EB2
的I-140,于是EB2C不少人就开始这样做。
EB3C本来要等“六七年”,在排期大幅前进后只要等“两年左右”,但EB2C降级为EB3
的人数会使得“两年左右”变长,于是EB3C就开骂EB2C了。
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n*1
5
好漂亮。第二张是牡丹么?话说这是什么地方啊,坡度这么大?
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e*s
6
我最近也有两个从Cell signaling抗体不好.
我一直蛮喜欢Cell signaling抗体的,总体非常Reliable.
不知道怎么,最近买了两个,一个Phospho抗体对Phosphorylated over un-
phosphorylated sample的选择性几乎没有。另一个,就是没有检测到我的蛋白。

sig

【在 M*******C 的大作中提到】
: 不知道在大家手上work的怎么样?买过好几种抗体。
: 在我手里,trouble很多啊,要么一堆杂带,没有特异带;要么背景很脏很黑,也看不
: 到特异带;要么带是白色的,并且结果也不是想要的。而类似的问题,我handle其他公
: 司的,失败率没这么高。测同一个蛋白,abcam的很好用,clean,结果正确。cell sig
: 的乱七八糟。trouble呢,公司都宣称在他们手里好用。
: 他们的western protocol是这样的,很不一般,大家觉得合理吗
: Block: 5% Milk TBST (他们说不能用BSA)
: 一抗: 5% BSA TBST 稀释
: 二抗: 5% Milk TBST
: 平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block, 一抗直接在TBST. 二抗从来只

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n*y
7
因为eb3排期远快于eb2,不少eb2降级到eb3以求早绿或者早拿ead/ap。
于是,有个别sb不爽,开始各种吓唬,造谣,道德压制,最奇葩的就是跑去请愿。一两
个月前,他们说不能免perm降级,这样违法且缺德,当时也搞了个请愿,想禁止降级。
结果,事实证明,降级可行,残酷地现实狠狠抽了这群人的嘴巴。
现在,他们见阻挠降级不行,改了新的理由,说同时占两条队是fraud,又是一轮吓唬
,造谣,道德压制,又有了一个新的请愿。。。
包括很多eb3在内的人们都看不过去这几个内斗积极分子,纷纷出来抽他们嘴巴,这就
是事情经过。。
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w*m
8
一看就是豪宅啊
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M*C
9
我这几年用他们的磷酸化抗体,有时work,有时不work,浪费了很多时间

【在 e****s 的大作中提到】
: 我最近也有两个从Cell signaling抗体不好.
: 我一直蛮喜欢Cell signaling抗体的,总体非常Reliable.
: 不知道怎么,最近买了两个,一个Phospho抗体对Phosphorylated over un-
: phosphorylated sample的选择性几乎没有。另一个,就是没有检测到我的蛋白。
:
: sig

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H*5
10
换个说法,EB1是超级联赛,EB2和EB3分别是甲乙级
本来在甲级踢球更好,所以大家都去,不行的再去踢乙级,如果在乙级踢得好,也可以
升级。
有个国家很奇怪,乙级竟然比甲级受到的优待更多,于是甲级球队纷纷降级,降级后的
排名在不少乙级球队的前面。而且如果哪天甲级受到的待遇更好,这些球队还能升级回
去,但普通的乙级就不行,于是乙级球队就开始骂这些降级的了。
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a*7
11
都是玫瑰,家里是坡地

【在 n****1 的大作中提到】
: 好漂亮。第二张是牡丹么?话说这是什么地方啊,坡度这么大?
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M*C
12
#9520 P-smad3, 这几年买过好多次,偶尔work,多数时候不work。
对了,他们的技术服务,总是叫你回答各种细节问题,完全无视别人用别的公司抗体可
以做出来,完全无视别人长期做各种抗体的western。
连cell lysate等方法。。。, 已经告诉他们,同样的sample,用abcam做出来了,他
们不管,还叫你sonication lysate之类。。

【在 e****s 的大作中提到】
: 我最近也有两个从Cell signaling抗体不好.
: 我一直蛮喜欢Cell signaling抗体的,总体非常Reliable.
: 不知道怎么,最近买了两个,一个Phospho抗体对Phosphorylated over un-
: phosphorylated sample的选择性几乎没有。另一个,就是没有检测到我的蛋白。
:
: sig

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t*g
13
你的总结真好,清晰简洁。语文肯定很好。

EB2
EB3

【在 H***5 的大作中提到】
: 哈哈,是EB1来看笑话了吗
: 大概就是以前一直EB2比EB3快两三年,所以世界各国人民能申EB2就申EB2(要求硕士学
: 位或5年工作经验等要求)。
: 由于中国人的个体都很优秀,申EB2的人太多EB3太少,从去年起,EB3C的排期飞速前进
: ,甚至超过EB2C两三年。
: 这时美国移民律师协会发信说,可以给EB2C的人申请另一个EB3的I-140,同时保留EB2
: 的I-140,于是EB2C不少人就开始这样做。
: EB3C本来要等“六七年”,在排期大幅前进后只要等“两年左右”,但EB2C降级为EB3
: 的人数会使得“两年左右”变长,于是EB3C就开骂EB2C了。

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n*1
14
那第二张是什么品种?耐寒不?我想种。
-----------------------

【在 a*******7 的大作中提到】
: 都是玫瑰,家里是坡地
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s*o
15
我用的感觉也不好,买了一个抗体,非特异性条带紧挨着目的条带,然后我又订了他们
该蛋白另外一个货号的抗体,结果给的是分子量差不多大的非特异条带。

sig

【在 M*******C 的大作中提到】
: 不知道在大家手上work的怎么样?买过好几种抗体。
: 在我手里,trouble很多啊,要么一堆杂带,没有特异带;要么背景很脏很黑,也看不
: 到特异带;要么带是白色的,并且结果也不是想要的。而类似的问题,我handle其他公
: 司的,失败率没这么高。测同一个蛋白,abcam的很好用,clean,结果正确。cell sig
: 的乱七八糟。trouble呢,公司都宣称在他们手里好用。
: 他们的western protocol是这样的,很不一般,大家觉得合理吗
: Block: 5% Milk TBST (他们说不能用BSA)
: 一抗: 5% BSA TBST 稀释
: 二抗: 5% Milk TBST
: 平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block, 一抗直接在TBST. 二抗从来只

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H*5
16
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b*7
17
太有钱了。
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s*y
18
我比较喜欢Santa Cruz, 虽然他们的产品质量很差,但是你只要吱一声说某某批产品不
好使,他们立刻会光速的给你送另外一批过来。根本就不会这么折腾你。
Cell Signaling 以及Sigma 都有这个坏毛病,就是你如果说东西不好用,他们不折磨
你个一两个月,是不会给你退换的。有一次我买了一个Sigma 的试剂,不好使就和他们
抱怨。然后他们源源不断的让我送各种证据,各种照片,各种Western blot, 我忍了两
个多星期,在第四次和他们通话的时候他们又要我做更多的对照试验,我终于忍不住就
失控了,骂他们说,这个实验我做了十几年了,试剂到底好不好使我是知道的,我买了
你们公司那么多产品,你看光是上个月我就买了3,4千的东西,我如果是想骗你们的钱
的话用得着等这么久么?骂了一通之后我说,你再不给我换的话我要和你们上司说。于
是他们就软了。

【在 M*******C 的大作中提到】
: #9520 P-smad3, 这几年买过好多次,偶尔work,多数时候不work。
: 对了,他们的技术服务,总是叫你回答各种细节问题,完全无视别人用别的公司抗体可
: 以做出来,完全无视别人长期做各种抗体的western。
: 连cell lysate等方法。。。, 已经告诉他们,同样的sample,用abcam做出来了,他
: 们不管,还叫你sonication lysate之类。。

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l*n
19
比喻的真好

【在 H***5 的大作中提到】
: 换个说法,EB1是超级联赛,EB2和EB3分别是甲乙级
: 本来在甲级踢球更好,所以大家都去,不行的再去踢乙级,如果在乙级踢得好,也可以
: 升级。
: 有个国家很奇怪,乙级竟然比甲级受到的优待更多,于是甲级球队纷纷降级,降级后的
: 排名在不少乙级球队的前面。而且如果哪天甲级受到的待遇更好,这些球队还能升级回
: 去,但普通的乙级就不行,于是乙级球队就开始骂这些降级的了。

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a*7
20
我去年买的,名字我倒忘了,只是看到花和颜色都不错,耐寒是肯定的

【在 n****1 的大作中提到】
: 那第二张是什么品种?耐寒不?我想种。
: -----------------------

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h*y
21
cell signaling的抗体大部分还是不错滴,重复性比较好。
Santa Cruz质量实在不敢恭维,您可多花钱也不远多费时间,不过实在找不到抗体,就
会试他们家的,种类还是多,换货的确很麻利。
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M*r
22
太经典了。当年郜林就是为了money从中超投奔了还在甲级的恒大。甲级本来认为自己
是中国足球的二等公民,结果来个能花钱的老板,弄得恒大的待遇比中超的还好。

【在 H***5 的大作中提到】
: 换个说法,EB1是超级联赛,EB2和EB3分别是甲乙级
: 本来在甲级踢球更好,所以大家都去,不行的再去踢乙级,如果在乙级踢得好,也可以
: 升级。
: 有个国家很奇怪,乙级竟然比甲级受到的优待更多,于是甲级球队纷纷降级,降级后的
: 排名在不少乙级球队的前面。而且如果哪天甲级受到的待遇更好,这些球队还能升级回
: 去,但普通的乙级就不行,于是乙级球队就开始骂这些降级的了。

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a*7
23
名字我找到了,twilight zone grandiflora

【在 n****1 的大作中提到】
: 那第二张是什么品种?耐寒不?我想种。
: -----------------------

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j*1
24
直接说那些抗体在什么样品上不work比抒情半天更有意义吧?
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g*y
25
赞。太能干了.顺便赞豪宅
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r*k
26
没错 经常出毛病 而且只是在一些细胞里面work。 而且要不就只work在human细胞。。
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p*y
27
太能干了。!
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n*1
28
谢谢。周末去找找。
------------------------------

【在 a*******7 的大作中提到】
: 名字我找到了,twilight zone grandiflora
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r*n
29
漂亮。好大的院子。狗狗是gsd吗?
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r*n
30
是要新辟一片玫瑰园吗?一定先上fence, 看你这大house 在山里,像有鹿出没的地方
。鹿最爱吃玫瑰嫩叶和花苞了,我的惨痛教训
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a*7
31
狗狗是黑背,我们有fence,鹿的危害还算好,呵呵

【在 r******n 的大作中提到】
: 是要新辟一片玫瑰园吗?一定先上fence, 看你这大house 在山里,像有鹿出没的地方
: 。鹿最爱吃玫瑰嫩叶和花苞了,我的惨痛教训

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y*2
32
期待玫瑰园,那景象想着就美 :)

【在 a*******7 的大作中提到】
: 板上的朋友们一定记得我去年刚来时,奔的我家的侧院,一片荒地,种了一年的玫瑰,
: 果树等等等等,这个春天终于有些颜色了,上片片了
: 今年准备在这里弄个玫瑰园

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l*d
33
耗子真大,地更大!
安MM太能干了,景仰中。。。。。。

【在 a*******7 的大作中提到】
: 板上的朋友们一定记得我去年刚来时,奔的我家的侧院,一片荒地,种了一年的玫瑰,
: 果树等等等等,这个春天终于有些颜色了,上片片了
: 今年准备在这里弄个玫瑰园

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f*g
34
看样子夏天了,都?
花花很漂亮,狗狗很帅。

【在 a*******7 的大作中提到】
: 板上的朋友们一定记得我去年刚来时,奔的我家的侧院,一片荒地,种了一年的玫瑰,
: 果树等等等等,这个春天终于有些颜色了,上片片了
: 今年准备在这里弄个玫瑰园

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a*7
35
不过工程量有点大

【在 y****2 的大作中提到】
: 期待玫瑰园,那景象想着就美 :)
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a*7
36
活干不完,这就是地大的好处,省了健身器材

【在 l*********d 的大作中提到】
: 耗子真大,地更大!
: 安MM太能干了,景仰中。。。。。。

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a*7
37
是呀,很热了

【在 f******g 的大作中提到】
: 看样子夏天了,都?
: 花花很漂亮,狗狗很帅。

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a*7
38
和你比差远了

【在 p*****y 的大作中提到】
: 太能干了。!
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a*7
39
谢谢

【在 g********y 的大作中提到】
: 赞。太能干了.顺便赞豪宅
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a*7
40
借你吉言

【在 b********7 的大作中提到】
: 太有钱了。
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D*1
41
玫瑰漂亮。。。
你家院子实在太大了,要是我肯定不敢计划自己搞,太需要精力和毅力了

【在 a*******7 的大作中提到】
: 板上的朋友们一定记得我去年刚来时,奔的我家的侧院,一片荒地,种了一年的玫瑰,
: 果树等等等等,这个春天终于有些颜色了,上片片了
: 今年准备在这里弄个玫瑰园

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a*7
42
是呀,先自己种种,最后还是要请专业公司来做

【在 D*******1 的大作中提到】
: 玫瑰漂亮。。。
: 你家院子实在太大了,要是我肯定不敢计划自己搞,太需要精力和毅力了

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l*d
43
还是自己慢慢弄,有成就些!

【在 a*******7 的大作中提到】
: 是呀,先自己种种,最后还是要请专业公司来做
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r*s
44
地大,阳光多,羡慕!赞能干!
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m*e
45
豪宅
这张看着很舒服
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y*8
46
好出彩啊,房子花花狗狗都很豪很靓很帅!
你的城堡菜园子咋样了?
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a*7
47
花草树木自己种些,做水泥砖之类的还是要请专业公司了

【在 l*********d 的大作中提到】
: 还是自己慢慢弄,有成就些!
avatar
a*7
48
谢谢

【在 r*******s 的大作中提到】
: 地大,阳光多,羡慕!赞能干!
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a*7
49
这是大门进来的地方,车道旁边准备在种些花

【在 m********e 的大作中提到】
: 豪宅
: 这张看着很舒服

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a*7
50
谢谢,我们的狗狗倒是真的漂亮,走哪里都有人夸,那块长城菜地去年完成了它的使命
,现在是地鼠和松鼠的乐园,我今年在侧院又开了一块,不知能否保住,准备按版上朋
友教的方子,大战松鼠

【在 y*****8 的大作中提到】
: 好出彩啊,房子花花狗狗都很豪很靓很帅!
: 你的城堡菜园子咋样了?

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r*7
51
Nice pic
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k*s
52
好漂亮的花,好豪的宅
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f*p
53
考大妈,这次你出轨时间太长了。罚你裸奔三日!!!

【在 k****s 的大作中提到】
: 好漂亮的花,好豪的宅
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