求助一个qPCR计算基因拷贝数出现在的诡异问题# Biology - 生物学j*j2016-08-30 07:081 楼RT!产品是在实习期间做的,主要设计人。如果公司要拿去申请专利,可以要求挂在产品的发明人上吗?公司如果不同意,他们的做法合理吗?
S*y2016-08-30 07:082 楼我们用qPCR通过计算基因,来比较细菌的数目,一个是野生型,一个是突变体;有两对引物,一对是16s,一对是特异基因B的,用16s引物,野生型和突变体比较没问题,结果都正常;但是用基因B的引物,在突变体中比野生型高100000倍,检查各种情况,多次重复,基因B引物总是在突变体中比野生型高100000倍。
x*e2016-08-30 07:084 楼怎么可能。100000大概是16-17个cycle。你两个pcr的ct值能差那么多?【在 S**y 的大作中提到】: 我们用qPCR通过计算基因,来比较细菌的数目,: 一个是野生型,一个是突变体;: 有两对引物,一对是16s,一对是特异基因B的,: 用16s引物,野生型和突变体比较没问题,结果都正常;: 但是用基因B的引物,在突变体中比野生型高100000倍,: 检查各种情况,多次重复,基因B引物总是在突变体中比野生型高100000倍。
S*y2016-08-30 07:085 楼对,cq值就是差这么多,计算10^7的同样野生型和突变体的细菌数,pcr出来突变体是10^12个,用16s引物就没有这个问题。【在 x********e 的大作中提到】: 怎么可能。100000大概是16-17个cycle。你两个pcr的ct值能差那么多?
k*n2016-08-30 07:088 楼是做RT-qPCR 吗, 也许是RT的cDNA有问题, 换一个RT KIt 试试看。推荐Thermofisher 的Superscript IV 它相对于其它的RT盒子优势是比较明显的:sensitivity, robustness, representativity (低表达不会被弱化, 高表达不会被放大)。但是价格比较贵。
x*e2016-08-30 07:089 楼难道你wt的ct接近30或者30以上?【在 S**y 的大作中提到】: 对,cq值就是差这么多,: 计算10^7的同样野生型和突变体的细菌数,pcr出来突变体是10^12个,: 用16s引物就没有这个问题。