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实验结束：未能利用NgAgo敲除目的基因
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实验结束：未能利用NgAgo敲除目的基因# Biology - 生物学
v*e
1 楼
已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验，按照韩春雨提供的
Genbank号找到了序列，做了密码子优化，在蛋白N端加了V5标签，C端加了SV40核定位
信号，全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体，用包装的病毒转导
了A549细胞，可以检测到蛋白表达，克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系，
按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域，10
倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞，48小时后克隆转染细胞，一共筛选了36个克隆，未
见到任何RNASEL敲除的表型，大家看着办吧，我做不出来
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n*7
2 楼
花了多少时间
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s*y
3 楼
白瞎大把的时间和试剂，干点啥不好

10

【在 v********e 的大作中提到】
: 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验，按照韩春雨提供的
: Genbank号找到了序列，做了密码子优化，在蛋白N端加了V5标签，C端加了SV40核定位
: 信号，全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体，用包装的病毒转导
: 了A549细胞，可以检测到蛋白表达，克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系，
: 按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域，10
: 倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞，48小时后克隆转染细胞，一共筛选了36个克隆，未
: 见到任何RNASEL敲除的表型，大家看着办吧，我做不出来
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P*R
4 楼
你做这个实验花了多少钱，多少时间？
应该开个发票去函韩春雨实验室报销。这个家伙不是很有钱吗？

10

【在 v********e 的大作中提到】
: 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验，按照韩春雨提供的
: Genbank号找到了序列，做了密码子优化，在蛋白N端加了V5标签，C端加了SV40核定位
: 信号，全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体，用包装的病毒转导
: 了A549细胞，可以检测到蛋白表达，克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系，
: 按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域，10
: 倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞，48小时后克隆转染细胞，一共筛选了36个克隆，未
: 见到任何RNASEL敲除的表型，大家看着办吧，我做不出来
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n*g
6 楼
别嚷嚷了，给你一百万，重做一遍，记住要认真。
做出来了再给你5百万
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m*a
7 楼
Nostring, 你上次在博士蹲那顿晚饭还是别人付的钱，你能拿出一百万谁信？

【在 n******g 的大作中提到】
: 别嚷嚷了，给你一百万，重做一遍，记住要认真。
: 做出来了再给你5百万
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P*R
8 楼
晚饭哥，上次你蹭饭连小费都是别人给你垫的，你还好意思拿100万津巴布韦币来糊弄
人？

【在 n******g 的大作中提到】
: 别嚷嚷了，给你一百万，重做一遍，记住要认真。
: 做出来了再给你5百万
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F*8
9 楼
谢谢楼主在此分享结果。看来火锅哥，晚饭哥，都是瞎JB扯。晚饭哥还厚着脸皮出来混
，火锅哥脸皮没那么厚，吃了火锅就再没出现，ID自杀了吧？
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w*a
10 楼
看了晚饭哥，明白了什么叫脸皮比城墙厚
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P*R
11 楼
站在韩春雨/沈啸一边的都是这些无耻之尤。

【在 w****a 的大作中提到】
: 看了晚饭哥，明白了什么叫脸皮比城墙厚
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M*7
12 楼
楼主试试不戴手套，用矿泉水瓶装试剂，说不定就做出来了
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v*e
13 楼
合成基因花了900美元，做克隆包装病毒大概花销500美元，做细胞估计花费也有500美
元，从设计试验到完成总共计算有2个多月，没有全力去做，因为还有许多其他工作

【在 P****R 的大作中提到】
: 站在韩春雨/沈啸一边的都是这些无耻之尤。
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j*n
14 楼
哪里合成基因这么便宜？还做了密码子优化
我们找的dna2.0 稍微大点蛋白都要好几千刀
是用的genescript？他们的倒是便宜

【在 v********e 的大作中提到】
: 合成基因花了900美元，做克隆包装病毒大概花销500美元，做细胞估计花费也有500美
: 元，从设计试验到完成总共计算有2个多月，没有全力去做，因为还有许多其他工作
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x*n
15 楼
我是觉得这些重复都是无为的浪费，人家大可一句话说你技术不行把你抵挡回去，最好
还是派团队监视他自己做，如果他都做不出来看他怎么说

10

【在 v********e 的大作中提到】
: 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验，按照韩春雨提供的
: Genbank号找到了序列，做了密码子优化，在蛋白N端加了V5标签，C端加了SV40核定位
: 信号，全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体，用包装的病毒转导
: 了A549细胞，可以检测到蛋白表达，克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系，
: 按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域，10
: 倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞，48小时后克隆转染细胞，一共筛选了36个克隆，未
: 见到任何RNASEL敲除的表型，大家看着办吧，我做不出来
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H*N
16 楼
他们自己重复不出来也会有别的说辞。韩连试验记录都不肯晾，很说明问题。

【在 x*****n 的大作中提到】
: 我是觉得这些重复都是无为的浪费，人家大可一句话说你技术不行把你抵挡回去，最好
: 还是派团队监视他自己做，如果他都做不出来看他怎么说
:
: 10
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