有没有人不能重复FEI ANN Ran的这个Cas9n在人干细胞里的运用# Biology - 生物学
l*n
1 楼
在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
？是时间太长了还是时间不够？
谢谢
？是时间太长了还是时间不够？
谢谢
c*6
2 楼
Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
specificity
作者
F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
Zhang, Feng Zhang
重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
。
specificity
作者
F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
Zhang, Feng Zhang
重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
。
a*3
3 楼
我以前经常做的，不知你买的是哪种。贴个图看看
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
:？是时间太长了还是时间不够？
:谢谢
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
:？是时间太长了还是时间不够？
:谢谢
V*g
4 楼
我成功过，不过是那种一直单细胞传代的干细胞，经典的干细胞adapted过后的
Subclone里成功了。
Subclone里成功了。
l*n
5 楼
【在 a****3 的大作中提到】
: 我以前经常做的，不知你买的是哪种。贴个图看看
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
: :在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
: :？是时间太长了还是时间不够？
: :谢谢
c*6
6 楼
你总共鉴定了多少个单克隆才成功的？ 我知道的一个马普实验室鉴定了2000个才成功
一个，而且还是仅仅在使用野生型Cas9的情况下。我自己鉴定了1000多个，野生型的
Cas9，没有
成功。 文章中高达十分之一的成功率是怎么得来的。https://www.nature.com/nprot/
journal/v8/n11/full/nprot.2013.143.html
另外，据Google Group上面的讨论，FEI ANN RAN 在Addgene上面所提供的PX459质粒居
然混有带有SNP的变种质粒，实验室的管理方面应该存在问题。
【在 V*****g 的大作中提到】
: 我成功过，不过是那种一直单细胞传代的干细胞，经典的干细胞adapted过后的
: Subclone里成功了。
一个，而且还是仅仅在使用野生型Cas9的情况下。我自己鉴定了1000多个，野生型的
Cas9，没有
成功。 文章中高达十分之一的成功率是怎么得来的。https://www.nature.com/nprot/
journal/v8/n11/full/nprot.2013.143.html
另外，据Google Group上面的讨论，FEI ANN RAN 在Addgene上面所提供的PX459质粒居
然混有带有SNP的变种质粒，实验室的管理方面应该存在问题。
【在 V*****g 的大作中提到】
: 我成功过，不过是那种一直单细胞传代的干细胞，经典的干细胞adapted过后的
: Subclone里成功了。
a*3
7 楼
像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
s*r
8 楼
用普通的cas9不就行了，别人表演了个花式技巧，你边上看看鼓鼓掌就好，自己上去非
要学就属于被人卖了还帮着数钱。
做genome editing用double nicking的都是闲的蛋疼，明明用个勺就能吃上饭，非要用
筷子，还他妈左右手各使一根
Yi
Cas9n
【在 c********6 的大作中提到】
: Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
: specificity
: 作者
: F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
: Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
: Zhang, Feng Zhang
: 重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
: 。
要学就属于被人卖了还帮着数钱。
做genome editing用double nicking的都是闲的蛋疼，明明用个勺就能吃上饭，非要用
筷子，还他妈左右手各使一根
Yi
Cas9n
【在 c********6 的大作中提到】
: Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
: specificity
: 作者
: F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
: Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
: Zhang, Feng Zhang
: 重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
: 。
a*g
9 楼
嗯，赞同哦
【在 a****3 的大作中提到】
: 像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
: 1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
: 2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
: 煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
: 水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
【在 a****3 的大作中提到】
: 像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
: 1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
: 2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
: 煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
: 水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
c*6
10 楼
就算用普通的Cas9在人的干细胞都是效率极低的。
【在 s******r 的大作中提到】
: 用普通的cas9不就行了，别人表演了个花式技巧，你边上看看鼓鼓掌就好，自己上去非
: 要学就属于被人卖了还帮着数钱。
: 做genome editing用double nicking的都是闲的蛋疼，明明用个勺就能吃上饭，非要用
: 筷子，还他妈左右手各使一根
:
: Yi
: Cas9n
【在 s******r 的大作中提到】
: 用普通的cas9不就行了，别人表演了个花式技巧，你边上看看鼓鼓掌就好，自己上去非
: 要学就属于被人卖了还帮着数钱。
: 做genome editing用double nicking的都是闲的蛋疼，明明用个勺就能吃上饭，非要用
: 筷子，还他妈左右手各使一根
:
: Yi
: Cas9n
l*n
11 楼
如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
烤的话，时间和温度多少？
谢谢
【在 a****3 的大作中提到】
: 像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
: 1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
: 2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
: 煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
: 水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
烤的话，时间和温度多少？
谢谢
【在 a****3 的大作中提到】
: 像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
: 1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
: 2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
: 煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
: 水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
c*6
12 楼
有猫腻啊
a*3
13 楼
烤箱时，我是放玻璃烤盘垫上锡纸，把sausage 排放在锡纸上，同时会放蘑菇，小西红
柿，锡纸要留长一倍的样子，这样烤的时候会包住肉肠和菜。温度不记得了，按说明上
的就行。烤好后，会有不少汁水，我会再加工，把肉肠切小段儿，和蘑菇、西红柿（已
经考破了、也会出不少水）放意大利面里，如果愿意，还可以加些意大利pasta sauce。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
柿，锡纸要留长一倍的样子，这样烤的时候会包住肉肠和菜。温度不记得了，按说明上
的就行。烤好后，会有不少汁水，我会再加工，把肉肠切小段儿，和蘑菇、西红柿（已
经考破了、也会出不少水）放意大利面里，如果愿意，还可以加些意大利pasta sauce。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
c*6
14 楼
大家都只敢拣韩春雨这种软柿子捏，真low
a*3
15 楼
我不是为做意肠汉堡做Italian sausage的，没有试过。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
c*6
16 楼
查了很多文献，确实没有几篇文献重复出来，反而是用plasmid做donor的文章越来越多
Yi
Cas9n
【在 c********6 的大作中提到】
: Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
: specificity
: 作者
: F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
: Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
: Zhang, Feng Zhang
: 重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
: 。
Yi
Cas9n
【在 c********6 的大作中提到】
: Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
: specificity
: 作者
: F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
: Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
: Zhang, Feng Zhang
: 重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
: 。
h*r
17 楼
这种香肠我没用烤箱烤过。一般是用平底锅煎，偶尔烧烤。
它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
妨试试。
【在 l******n 的大作中提到】
它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
妨试试。
【在 l******n 的大作中提到】
a*3
18 楼
我也经常用Johnsonvill这个牌子的意大利肉肠，今天在店里看到Premio这个牌子，特
意买了一包六根儿的。
改明儿做了汇报一下。
[在 hair (飘飘) 的大作中提到：]
:这种香肠我没用烤箱烤过。一般是用平底锅煎，偶尔烧烤。
:它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
:Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
:妨试试。
意买了一包六根儿的。
改明儿做了汇报一下。
[在 hair (飘飘) 的大作中提到：]
:这种香肠我没用烤箱烤过。一般是用平底锅煎，偶尔烧烤。
:它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
:Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
:妨试试。
x*2
19 楼
无脑空气炸锅，扔进去，360F，5-8分钟，就可以了。
我上周刚这样吃掉一包
我上周刚这样吃掉一包
h*r
20 楼
哈，你这个广告做的好。
空气炸锅能炸裹浆的东西不？比如天妇罗？能的话我也买一个。
【在 x****2 的大作中提到】
: 无脑空气炸锅，扔进去，360F，5-8分钟，就可以了。
: 我上周刚这样吃掉一包
空气炸锅能炸裹浆的东西不？比如天妇罗？能的话我也买一个。
【在 x****2 的大作中提到】
: 无脑空气炸锅，扔进去，360F，5-8分钟，就可以了。
: 我上周刚这样吃掉一包
l*n
21 楼
在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
？是时间太长了还是时间不够？
谢谢
？是时间太长了还是时间不够？
谢谢
a*3
22 楼
我以前经常做的，不知你买的是哪种。贴个图看看
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
:？是时间太长了还是时间不够？
:谢谢
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
:？是时间太长了还是时间不够？
:谢谢
l*n
23 楼
【在 a****3 的大作中提到】
: 我以前经常做的，不知你买的是哪种。贴个图看看
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
: :在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
: :？是时间太长了还是时间不够？
: :谢谢
a*3
24 楼
像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
l*n
25 楼
如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
烤的话，时间和温度多少？
谢谢
【在 a****3 的大作中提到】
: 像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
: 1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
: 2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
: 煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
: 水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
烤的话，时间和温度多少？
谢谢
【在 a****3 的大作中提到】
: 像是那种season好的，生肉香肠。我一般就是
: 1）在锅里煎熟了，同时会放些蘑菇、西红柿填味儿；
: 2）烤箱里烤，香肠、蘑菇、西红柿啥的，要用锡纸包好
: 煎到或烤到一定程度，香肠会涨起来，可以用小刀在每个香肠身上划个口子，香肠的汁
: 水会出来，非常香。我一般买hot Italian sausage 辣味的。
: [在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
a*3
26 楼
烤箱时，我是放玻璃烤盘垫上锡纸，把sausage 排放在锡纸上，同时会放蘑菇，小西红
柿，锡纸要留长一倍的样子，这样烤的时候会包住肉肠和菜。温度不记得了，按说明上
的就行。烤好后，会有不少汁水，我会再加工，把肉肠切小段儿，和蘑菇、西红柿（已
经考破了、也会出不少水）放意大利面里，如果愿意，还可以加些意大利pasta sauce。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
柿，锡纸要留长一倍的样子，这样烤的时候会包住肉肠和菜。温度不记得了，按说明上
的就行。烤好后，会有不少汁水，我会再加工，把肉肠切小段儿，和蘑菇、西红柿（已
经考破了、也会出不少水）放意大利面里，如果愿意，还可以加些意大利pasta sauce。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
a*3
27 楼
我不是为做意肠汉堡做Italian sausage的，没有试过。
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
[在 letusrun (Run Run Run) 的大作中提到：]
:如果汁水都流出来了，香肠会不会更干。我烤的时候也是划个口子。
:你烤熟的， 跟costco food court 买的意香肠汉堡，口感一样还是会干一点？
:烤的话，时间和温度多少？
:谢谢
h*r
28 楼
这种香肠我没用烤箱烤过。一般是用平底锅煎，偶尔烧烤。
它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
妨试试。
【在 l******n 的大作中提到】
它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
妨试试。
【在 l******n 的大作中提到】
a*3
29 楼
我也经常用Johnsonvill这个牌子的意大利肉肠，今天在店里看到Premio这个牌子，特
意买了一包六根儿的。
改明儿做了汇报一下。
[在 hair (飘飘) 的大作中提到：]
:这种香肠我没用烤箱烤过。一般是用平底锅煎，偶尔烧烤。
:它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
:Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
:妨试试。
意买了一包六根儿的。
改明儿做了汇报一下。
[在 hair (飘飘) 的大作中提到：]
:这种香肠我没用烤箱烤过。一般是用平底锅煎，偶尔烧烤。
:它很粗不容易做透，而且调味一般，肉质偏干，我不常买。有时候Costco有
:Johnsonvill 牌子的香肠，这个品质好很多。普通的Grocery Store里也很常见。你不
:妨试试。
x*2
30 楼
无脑空气炸锅，扔进去，360F，5-8分钟，就可以了。
我上周刚这样吃掉一包
我上周刚这样吃掉一包
h*r
31 楼
哈，你这个广告做的好。
空气炸锅能炸裹浆的东西不？比如天妇罗？能的话我也买一个。
【在 x****2 的大作中提到】
: 无脑空气炸锅，扔进去，360F，5-8分钟，就可以了。
: 我上周刚这样吃掉一包
空气炸锅能炸裹浆的东西不？比如天妇罗？能的话我也买一个。
【在 x****2 的大作中提到】
: 无脑空气炸锅，扔进去，360F，5-8分钟，就可以了。
: 我上周刚这样吃掉一包
a*y
32 楼
烤之前用牙签戳几个洞，洞越多出来的油越多，不要放在铺了锡纸的盘子里，那样会泡
在油里，肉里胡来的血沫会沾在上面，最好吊起来烤，不行就用个rack架起来，下面用
盘子接油
【在 l******n 的大作中提到】
: 在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
: ？是时间太长了还是时间不够？
: 谢谢
在油里，肉里胡来的血沫会沾在上面，最好吊起来烤，不行就用个rack架起来，下面用
盘子接油
【在 l******n 的大作中提到】
: 在costco买了意香肠，375F, 15-20分钟，皮是变黄褐色了，但是好干，问题出在哪里
: ？是时间太长了还是时间不够？
: 谢谢
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