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请教SF9 细胞的transfection方法
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请教SF9 细胞的transfection方法# Biology - 生物学
h*q
1
请问 排期到了该交485了但是J1豁免没完成怎么办?
是要打回去重新排队
还是等到豁免完了就可以交485了?
谢谢!
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l*9
2
星期六收到的RFE
要求的交我老公5月到8月的工资单 晕倒了 他5月16号OPT生效 我的case6月20号USCIS
收到 怎么都是在90天内吧 怎么我当时file的时候F-2都是valid的吧
不过不敢不好好准备啊
就解释了一下 什么他没有工作啊 8月8号他的employer帮他file了COS F-1 to H1B啊
还特意说了在90天内啊 F-1是valid的啊
估计就是这个签证官不懂吧 就算之后我老公不能保持身份了 超过90天的话 和我的
case关系大吗?? 求解啊
不过以后大家碰到F-2转F-1的时候 刚好另一个OPT 还是多准备一点 说明一下 也许签
证官就是不懂啊
还有 他要是问我要5月到8月的工资单 我当时是怎么都提交不出来的 才6月份啊 我提
交的时候
反正我是怕了他们这帮人了 太天马行空了
如果我理解有错 大家要告诉我啊
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a*o
3
【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: hopeusw (云子), 信区: Joke
标 题: Re: 柔妹子,真厉害。 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 2 16:35:06 2014, 美东)
看了这图,PROPOSAL也不写了,换了衣服去GYM
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h*o
4
芒果台实在是很恶心
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c*a
5
以前没有用过昆虫细胞,现在需要从SF9 细胞里表达蛋白并纯化. 之前试着用
lipofectamine
tranfect细胞, 没有收集到多少蛋白. 请求有经验的高手给个protocol或者方法,用什
么transfection
reagent比较好. 怎么lyse和纯化蛋白. 谢谢了.
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s*u
6
等到豁免完了就可以交485了
You need copy of I-797

【在 h**q 的大作中提到】
: 请问 排期到了该交485了但是J1豁免没完成怎么办?
: 是要打回去重新排队
: 还是等到豁免完了就可以交485了?
: 谢谢!

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l*x
7
不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职,只能说vtc那帮人真的不是不懂,是根本不愿
意懂,
比如我们的case,我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
结果签证官不知道是不会google rmb汇率,还是脑子哪根线搭错,认为你写在
affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”,然后还
自作聪明做了个乘法:30000/9*12=46000?,说你看吧,你钱不够。连你提供的财产证明
看都不看
对于父母支持那块,签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
accessibility,真是彻底无语了。
本来不想发作
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a*o
8
有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。

【在 a*o 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
: 发信人: hopeusw (云子), 信区: Joke
: 标 题: Re: 柔妹子,真厉害。 (转载)
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 2 16:35:06 2014, 美东)
: 看了这图,PROPOSAL也不写了,换了衣服去GYM

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J*G
9
费尽心机,结果把杨洋赔进去了。。。
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J*n
10
这个不用transfection reagent。
需要先制备P3 virus (就是P1 amplify三次),sf9 cells很容易break,比E.coli更简
单。之后最好ultracentrifuge 40K, 1hour.
要更具体的,上invitrogen或者BD Biosciences看看。他们产生P1 virus所用方法不同。
当然,比较新的BacMam就更简单了。
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l*9
11
是啊 这些VO比我们学校的adviser 差多了
我们学校如果交人民币证明 都不需要自己换算了 adviser自己换算
而且这个RFE adviser也指导我怎么准备 她思路巨清楚 比VO头脑清楚多了

【在 l****x 的大作中提到】
: 不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职,只能说vtc那帮人真的不是不懂,是根本不愿
: 意懂,
: 比如我们的case,我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
: 结果签证官不知道是不会google rmb汇率,还是脑子哪根线搭错,认为你写在
: affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”,然后还
: 自作聪明做了个乘法:30000/9*12=46000?,说你看吧,你钱不够。连你提供的财产证明
: 看都不看
: 对于父母支持那块,签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
: accessibility,真是彻底无语了。
: 本来不想发作

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g*n
12
不用搜索,gym里面那个只看姑娘不练功的好汉肯定就是云叫兽

【在 a*o 的大作中提到】
: 有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
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p*2
13
今天看得我一路紧张~~
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n*d
14
"P1 amplify三次"? 靠,有必要吗?
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l*9
15
自作聪明做了个乘法:30000/9*12=46000?
笑死了啊
I-20上面不是有tuition books health insurance这些项目吗??
一年都要交tuition 没有放假的啊
不知道他怎么想的
再说父母银行证明 不能用的话 我们干嘛要交这份材料啊 而且你好像还是学校帮着办
的 真是不愿意接受人家 这么多人同意的证明 非要相信自己的智商

【在 l****x 的大作中提到】
: 不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职,只能说vtc那帮人真的不是不懂,是根本不愿
: 意懂,
: 比如我们的case,我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
: 结果签证官不知道是不会google rmb汇率,还是脑子哪根线搭错,认为你写在
: affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”,然后还
: 自作聪明做了个乘法:30000/9*12=46000?,说你看吧,你钱不够。连你提供的财产证明
: 看都不看
: 对于父母支持那块,签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
: accessibility,真是彻底无语了。
: 本来不想发作

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h*w
16
靠,这居然也转过来了...
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m*9
17
结局不错。

【在 p*******2 的大作中提到】
: 今天看得我一路紧张~~
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c*a
18
要用virus吗, 我们现在没有任何virus系统,只能做transfection

同。

【在 J********n 的大作中提到】
: 这个不用transfection reagent。
: 需要先制备P3 virus (就是P1 amplify三次),sf9 cells很容易break,比E.coli更简
: 单。之后最好ultracentrifuge 40K, 1hour.
: 要更具体的,上invitrogen或者BD Biosciences看看。他们产生P1 virus所用方法不同。
: 当然,比较新的BacMam就更简单了。

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d*h
19
Re~~
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M*s
20
信息时代。。。

【在 h*****w 的大作中提到】
: 靠,这居然也转过来了...
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s*o
21
其實我不討厭楊洋,為啥大家都這麼恨她呢
當然,我最愛狗狗!
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a*n
22
transfection用293T吧
sf9是做病毒比较好

【在 c**a 的大作中提到】
: 要用virus吗, 我们现在没有任何virus系统,只能做transfection
:
: 同。

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b*n
23
我替教授补个图

【在 a*o 的大作中提到】
: 有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
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y*1
24
一开始喜欢她, 后来越来越不喜欢她。
唱着唱着就开始掉嗓子,
鸡皮疙瘩都蹦出来了。
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c*a
25
是, 但如果 不得不在 sf9 上做transfection呢, 有没有好的建议啊

【在 a*****n 的大作中提到】
: transfection用293T吧
: sf9是做病毒比较好

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g*n
26
好人,我给你mark上。收藏这种图片比收可乐盖子啤酒罐子强多了,延年益寿。

【在 b*****n 的大作中提到】
: 我替教授补个图
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J*G
27
我就看了个开头,中间没看,等再看到的时候,小段又要终极pk了,我的心一直往下沉
。杨洋先唱的,我觉得唱得不错,更替小段担心了。。。不过小段只唱了一句夜夜夜,
我就知道小段会赢,因为莫名地她一唱我眼睛一热就流泪了。。。
小段唱歌就是有把你唱哭的功力。

【在 p*******2 的大作中提到】
: 今天看得我一路紧张~~
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s*r
28
试一试High-Five 细胞,单层,转染方便
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b*n
29
多谢金币兄

【在 g******n 的大作中提到】
: 好人,我给你mark上。收藏这种图片比收可乐盖子啤酒罐子强多了,延年益寿。
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J*G
30
我也不讨厌杨洋,不过挺讨厌某些杨洋的粉丝的。

【在 s******o 的大作中提到】
: 其實我不討厭楊洋,為啥大家都這麼恨她呢
: 當然,我最愛狗狗!

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a*n
31
先克隆到bac-to-bac里面,用DH10Bac制作bacmid,用Cellfectin吧bacmid转进sf9,获
得P1 virus,然后amplify到P3。
P1和P2不是不可以用,只是titer很低。直接large scale结果相当烂。
P3收集多了,测过titer不错之后,可以用作seed做large scale(试过roller bottle
啥的,200mL)。
看似前期麻烦,但是比死命转不进去强多了。
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