l*9
2 楼
星期六收到的RFE
要求的交我老公5月到8月的工资单 晕倒了 他5月16号OPT生效 我的case6月20号USCIS
收到 怎么都是在90天内吧 怎么我当时file的时候F-2都是valid的吧
不过不敢不好好准备啊
就解释了一下 什么他没有工作啊 8月8号他的employer帮他file了COS F-1 to H1B啊
还特意说了在90天内啊 F-1是valid的啊
估计就是这个签证官不懂吧 就算之后我老公不能保持身份了 超过90天的话 和我的
case关系大吗？？ 求解啊
不过以后大家碰到F-2转F-1的时候 刚好另一个OPT 还是多准备一点 说明一下 也许签
证官就是不懂啊
还有 他要是问我要5月到8月的工资单 我当时是怎么都提交不出来的 才6月份啊 我提
交的时候
反正我是怕了他们这帮人了 太天马行空了
如果我理解有错 大家要告诉我啊
要求的交我老公5月到8月的工资单 晕倒了 他5月16号OPT生效 我的case6月20号USCIS
收到 怎么都是在90天内吧 怎么我当时file的时候F-2都是valid的吧
不过不敢不好好准备啊
就解释了一下 什么他没有工作啊 8月8号他的employer帮他file了COS F-1 to H1B啊
还特意说了在90天内啊 F-1是valid的啊
估计就是这个签证官不懂吧 就算之后我老公不能保持身份了 超过90天的话 和我的
case关系大吗？？ 求解啊
不过以后大家碰到F-2转F-1的时候 刚好另一个OPT 还是多准备一点 说明一下 也许签
证官就是不懂啊
还有 他要是问我要5月到8月的工资单 我当时是怎么都提交不出来的 才6月份啊 我提
交的时候
反正我是怕了他们这帮人了 太天马行空了
如果我理解有错 大家要告诉我啊
a*o
3 楼
【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: hopeusw (云子), 信区: Joke
标 题: Re: 柔妹子，真厉害。 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 2 16:35:06 2014, 美东)
看了这图,PROPOSAL也不写了,换了衣服去GYM
发信人: hopeusw (云子), 信区: Joke
标 题: Re: 柔妹子，真厉害。 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 2 16:35:06 2014, 美东)
看了这图,PROPOSAL也不写了,换了衣服去GYM
h*o
4 楼
芒果台实在是很恶心
c*a
5 楼
以前没有用过昆虫细胞,现在需要从SF9 细胞里表达蛋白并纯化. 之前试着用
lipofectamine
tranfect细胞, 没有收集到多少蛋白. 请求有经验的高手给个protocol或者方法,用什
么transfection
reagent比较好. 怎么lyse和纯化蛋白. 谢谢了.
lipofectamine
tranfect细胞, 没有收集到多少蛋白. 请求有经验的高手给个protocol或者方法,用什
么transfection
reagent比较好. 怎么lyse和纯化蛋白. 谢谢了.
s*u
6 楼
等到豁免完了就可以交485了
You need copy of I-797
【在 h**q 的大作中提到】
: 请问 排期到了该交485了但是J1豁免没完成怎么办？
: 是要打回去重新排队
: 还是等到豁免完了就可以交485了？
: 谢谢！
You need copy of I-797
【在 h**q 的大作中提到】
: 请问 排期到了该交485了但是J1豁免没完成怎么办？
: 是要打回去重新排队
: 还是等到豁免完了就可以交485了？
: 谢谢！
l*x
7 楼
不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职，只能说vtc那帮人真的不是不懂，是根本不愿
意懂，
比如我们的case，我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
结果签证官不知道是不会google rmb汇率，还是脑子哪根线搭错，认为你写在
affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”，然后还
自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?,说你看吧，你钱不够。连你提供的财产证明
看都不看
对于父母支持那块，签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
accessibility，真是彻底无语了。
本来不想发作
意懂，
比如我们的case，我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
结果签证官不知道是不会google rmb汇率，还是脑子哪根线搭错，认为你写在
affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”，然后还
自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?,说你看吧，你钱不够。连你提供的财产证明
看都不看
对于父母支持那块，签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
accessibility，真是彻底无语了。
本来不想发作
a*o
8 楼
有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
【在 a*o 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
: 发信人: hopeusw (云子), 信区: Joke
: 标 题: Re: 柔妹子，真厉害。 (转载)
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 2 16:35:06 2014, 美东)
: 看了这图,PROPOSAL也不写了,换了衣服去GYM
【在 a*o 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
: 发信人: hopeusw (云子), 信区: Joke
: 标 题: Re: 柔妹子，真厉害。 (转载)
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 2 16:35:06 2014, 美东)
: 看了这图,PROPOSAL也不写了,换了衣服去GYM
J*G
9 楼
费尽心机，结果把杨洋赔进去了。。。
J*n
10 楼
这个不用transfection reagent。
需要先制备P3 virus (就是P1 amplify三次)，sf9 cells很容易break，比E.coli更简
单。之后最好ultracentrifuge 40K, 1hour.
要更具体的，上invitrogen或者BD Biosciences看看。他们产生P1 virus所用方法不同。
当然，比较新的BacMam就更简单了。
需要先制备P3 virus (就是P1 amplify三次)，sf9 cells很容易break，比E.coli更简
单。之后最好ultracentrifuge 40K, 1hour.
要更具体的，上invitrogen或者BD Biosciences看看。他们产生P1 virus所用方法不同。
当然，比较新的BacMam就更简单了。
l*9
11 楼
是啊 这些VO比我们学校的adviser 差多了
我们学校如果交人民币证明 都不需要自己换算了 adviser自己换算
而且这个RFE adviser也指导我怎么准备 她思路巨清楚 比VO头脑清楚多了
【在 l****x 的大作中提到】
: 不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职，只能说vtc那帮人真的不是不懂，是根本不愿
: 意懂，
: 比如我们的case，我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
: 结果签证官不知道是不会google rmb汇率，还是脑子哪根线搭错，认为你写在
: affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”，然后还
: 自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?,说你看吧，你钱不够。连你提供的财产证明
: 看都不看
: 对于父母支持那块，签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
: accessibility，真是彻底无语了。
: 本来不想发作
我们学校如果交人民币证明 都不需要自己换算了 adviser自己换算
而且这个RFE adviser也指导我怎么准备 她思路巨清楚 比VO头脑清楚多了
【在 l****x 的大作中提到】
: 不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职，只能说vtc那帮人真的不是不懂，是根本不愿
: 意懂，
: 比如我们的case，我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
: 结果签证官不知道是不会google rmb汇率，还是脑子哪根线搭错，认为你写在
: affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”，然后还
: 自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?,说你看吧，你钱不够。连你提供的财产证明
: 看都不看
: 对于父母支持那块，签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
: accessibility，真是彻底无语了。
: 本来不想发作
g*n
12 楼
不用搜索，gym里面那个只看姑娘不练功的好汉肯定就是云叫兽
【在 a*o 的大作中提到】
: 有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
【在 a*o 的大作中提到】
: 有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
p*2
13 楼
今天看得我一路紧张~~
n*d
14 楼
"P1 amplify三次"? 靠，有必要吗？
l*9
15 楼
自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?
笑死了啊
I-20上面不是有tuition books health insurance这些项目吗？？
一年都要交tuition 没有放假的啊
不知道他怎么想的
再说父母银行证明 不能用的话 我们干嘛要交这份材料啊 而且你好像还是学校帮着办
的 真是不愿意接受人家 这么多人同意的证明 非要相信自己的智商
【在 l****x 的大作中提到】
: 不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职，只能说vtc那帮人真的不是不懂，是根本不愿
: 意懂，
: 比如我们的case，我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
: 结果签证官不知道是不会google rmb汇率，还是脑子哪根线搭错，认为你写在
: affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”，然后还
: 自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?,说你看吧，你钱不够。连你提供的财产证明
: 看都不看
: 对于父母支持那块，签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
: accessibility，真是彻底无语了。
: 本来不想发作
笑死了啊
I-20上面不是有tuition books health insurance这些项目吗？？
一年都要交tuition 没有放假的啊
不知道他怎么想的
再说父母银行证明 不能用的话 我们干嘛要交这份材料啊 而且你好像还是学校帮着办
的 真是不愿意接受人家 这么多人同意的证明 非要相信自己的智商
【在 l****x 的大作中提到】
: 不知道叫他们vo是不是寒碜了这个官职，只能说vtc那帮人真的不是不懂，是根本不愿
: 意懂，
: 比如我们的case，我们提供的资金证明可是i20上要求的多多了
: 结果签证官不知道是不会google rmb汇率，还是脑子哪根线搭错，认为你写在
: affidavit上那句“保证有30000+支付学费”就是你“只有30000+支付学费”，然后还
: 自作聪明做了个乘法：30000/9*12=46000?,说你看吧，你钱不够。连你提供的财产证明
: 看都不看
: 对于父母支持那块，签证官可能是觉得父母的银行资金证明不能证明他们有direct
: accessibility，真是彻底无语了。
: 本来不想发作
h*w
16 楼
靠,这居然也转过来了...
m*9
17 楼
结局不错。
【在 p*******2 的大作中提到】
: 今天看得我一路紧张~~
【在 p*******2 的大作中提到】
: 今天看得我一路紧张~~
c*a
18 楼
要用virus吗, 我们现在没有任何virus系统,只能做transfection
同。
【在 J********n 的大作中提到】
: 这个不用transfection reagent。
: 需要先制备P3 virus (就是P1 amplify三次)，sf9 cells很容易break，比E.coli更简
: 单。之后最好ultracentrifuge 40K, 1hour.
: 要更具体的，上invitrogen或者BD Biosciences看看。他们产生P1 virus所用方法不同。
: 当然，比较新的BacMam就更简单了。
同。
【在 J********n 的大作中提到】
: 这个不用transfection reagent。
: 需要先制备P3 virus (就是P1 amplify三次)，sf9 cells很容易break，比E.coli更简
: 单。之后最好ultracentrifuge 40K, 1hour.
: 要更具体的，上invitrogen或者BD Biosciences看看。他们产生P1 virus所用方法不同。
: 当然，比较新的BacMam就更简单了。
d*h
19 楼
Re~~
M*s
20 楼
信息时代。。。
【在 h*****w 的大作中提到】
: 靠,这居然也转过来了...
【在 h*****w 的大作中提到】
: 靠,这居然也转过来了...
s*o
21 楼
其實我不討厭楊洋，為啥大家都這麼恨她呢
當然，我最愛狗狗！
當然，我最愛狗狗！
a*n
22 楼
transfection用293T吧
sf9是做病毒比较好
【在 c**a 的大作中提到】
: 要用virus吗, 我们现在没有任何virus系统,只能做transfection
:
: 同。
sf9是做病毒比较好
【在 c**a 的大作中提到】
: 要用virus吗, 我们现在没有任何virus系统,只能做transfection
:
: 同。
b*n
23 楼
我替教授补个图
【在 a*o 的大作中提到】
: 有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
【在 a*o 的大作中提到】
: 有事儿要找云叫兽的请到gym人肉搜索。
y*1
24 楼
一开始喜欢她， 后来越来越不喜欢她。
唱着唱着就开始掉嗓子，
鸡皮疙瘩都蹦出来了。
唱着唱着就开始掉嗓子，
鸡皮疙瘩都蹦出来了。
c*a
25 楼
是, 但如果 不得不在 sf9 上做transfection呢, 有没有好的建议啊
【在 a*****n 的大作中提到】
: transfection用293T吧
: sf9是做病毒比较好
【在 a*****n 的大作中提到】
: transfection用293T吧
: sf9是做病毒比较好
g*n
26 楼
好人，我给你mark上。收藏这种图片比收可乐盖子啤酒罐子强多了，延年益寿。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 我替教授补个图
【在 b*****n 的大作中提到】
: 我替教授补个图
J*G
27 楼
我就看了个开头，中间没看，等再看到的时候，小段又要终极pk了，我的心一直往下沉
。杨洋先唱的，我觉得唱得不错，更替小段担心了。。。不过小段只唱了一句夜夜夜，
我就知道小段会赢，因为莫名地她一唱我眼睛一热就流泪了。。。
小段唱歌就是有把你唱哭的功力。
【在 p*******2 的大作中提到】
: 今天看得我一路紧张~~
。杨洋先唱的，我觉得唱得不错，更替小段担心了。。。不过小段只唱了一句夜夜夜，
我就知道小段会赢，因为莫名地她一唱我眼睛一热就流泪了。。。
小段唱歌就是有把你唱哭的功力。
【在 p*******2 的大作中提到】
: 今天看得我一路紧张~~
s*r
28 楼
试一试High-Five 细胞，单层，转染方便
b*n
29 楼
多谢金币兄
【在 g******n 的大作中提到】
: 好人，我给你mark上。收藏这种图片比收可乐盖子啤酒罐子强多了，延年益寿。
【在 g******n 的大作中提到】
: 好人，我给你mark上。收藏这种图片比收可乐盖子啤酒罐子强多了，延年益寿。
J*G
30 楼
我也不讨厌杨洋，不过挺讨厌某些杨洋的粉丝的。
【在 s******o 的大作中提到】
: 其實我不討厭楊洋，為啥大家都這麼恨她呢
: 當然，我最愛狗狗！
【在 s******o 的大作中提到】
: 其實我不討厭楊洋，為啥大家都這麼恨她呢
: 當然，我最愛狗狗！
a*n
31 楼
先克隆到bac-to-bac里面，用DH10Bac制作bacmid，用Cellfectin吧bacmid转进sf9，获
得P1 virus，然后amplify到P3。
P1和P2不是不可以用，只是titer很低。直接large scale结果相当烂。
P3收集多了，测过titer不错之后，可以用作seed做large scale（试过roller bottle
啥的，200mL）。
看似前期麻烦，但是比死命转不进去强多了。
得P1 virus，然后amplify到P3。
P1和P2不是不可以用，只是titer很低。直接large scale结果相当烂。
P3收集多了，测过titer不错之后，可以用作seed做large scale（试过roller bottle
啥的，200mL）。
看似前期麻烦，但是比死命转不进去强多了。
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