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site-directed mutagenesis

site-directed mutagenesis# Biology - 生物学

j*22011-08-30 07:08

1 楼

通奸、包养、情妇录！富豪肖建华四季酒店藏5个"行宫" 情妇大曝光
中国超级富豪肖建华居住在四季汇的部分隐秘生活内情被港媒曝光。
明天系实际控制人肖建华的行踪迄今仍然暧昧不明。这位多年来超级低调的万亿富豪的
生活状况一直神秘莫测。日前，有知情者向港媒披露了肖建华近几年租住香港(专题)四
季汇的一些隐秘内情。
据《苹果日报》报导，肖建华从2011年开始就长期租住在四季汇，至少租用了5个套房
，俨然秘密行宫。其中3间套房分别在20楼及28楼，当中有一间是供贴身保镳休息的地
方。
据称，为避免暴露自己的行踪，肖建华并不固定住房，而是经常转房住。他的房间、办
公室和工人房分散不同楼层，其行踪诡秘，常常连佣人都不知肖身在哪个房间。不过，
不时会有女性朋友携同小孩探访他。
报导引述知情人士透露，肖建华聘用了一名从中国大陆来的管家，为他打点起居饮食，
但这名管家并不住在四季汇，肖的妻子周虹文虽然在四季也有房间，但并不经常住在那
里。
消息人士透露，肖建华平时行事十分低调、警惕，几乎足不出户。即使有时走出酒店，
都总是有多名戴着耳机的保镳贴身跟随。有时肖建华到IFC商场4楼平台散步，跟随在他
身边的几名女保镳中还会有一人拖箧，不知道里面放着甚么东西。肖建华平日衣着十分
朴素，每次出现在外人视线中总是戴着帽子，穿着松身衫裤和布鞋。
肖通过保安公司共聘请了5个贴身保镳，4女1男，其中最受信任的两名女保镳来自大陆
，其余3名保镳来自香港。据透露，无论肖建华身处何地，那两名来自大陆的女保镳都
会贴身跟随，而且与他住同一间套房。
报导引述消息人士透露说，肖建华当年曾经安排过一名37岁的女伴入住四季汇19楼。这
名被称为"马教授"的女人在那里生下来一个女婴。在女人"坐月子"期间，不但女人的母
亲在香港陪同，肖还以月薪2.4万元聘请了24小时的陪月员来照顾这个女人。肖建华本
人也曾多次来探望"马教授"及女婴，但每次逗留5分钟左右便走。他平时亦会派人送来
参茸海味。
消息人士指，肖建华夫妇经常前往欧洲，包括伦敦。在香港居住期间肖则绝大部份时间
都逗留在四季套房里，出外用膳只会去私隐度极高的IFC利苑酒家和湾仔古琴会所。在
肖用膳期间，所有保镳都会在食肆门口等候。

k*n2011-08-30 07:08

2 楼

本来吸毒就是错的，坐在评委席上是受人尊重的位置，他自身如此大的问题还怎么让观
众来尊重他？
而且这个节目能红，跟他一点儿关系也没有，江苏卫视什么时候愿意跟他终止合同都说
得过去
早就觉得他坐在那里的时候有时颤抖得很厉害，从前还觉得他只是不适应从幕后走到台
前有些紧张，现在看来，跟正常人的紧张还是不大一样，那些期我都不敢再看了

r*y2011-08-30 07:08

3 楼

我打算S>F G>A R>A
这样改变后不会对protein有什么影响吗，可以block掉原来的AA的function吧？还有那
里可以找到这种amino acid的替换表？还是两个AA不属于同一类就可以？当然S T Y不
要换成D就好？

C*e2011-08-30 07:08

4 楼

如果有结构的话还是用coot看一下比较好
用simple mutation的功能键就行
如果没有结构那完全就是在猜
谁也没办法给你准信

【在 r******y 的大作中提到】

: 我打算S>F G>A R>A
: 这样改变后不会对protein有什么影响吗，可以block掉原来的AA的function吧？还有那
: 里可以找到这种amino acid的替换表？还是两个AA不属于同一类就可以？当然S T Y不
: 要换成D就好？

s*y2011-08-30 07:08

5 楼

几乎肯定会有影响。
S>F G>A R>A。。。
？这也太极端了，几乎可以肯定会改变蛋白的构像。

【在 r******y 的大作中提到】

s*n2011-08-30 07:08

6 楼

具体得看结构和功能，别人无法给你答案。

【在 r******y 的大作中提到】

r*y2011-08-30 07:08

7 楼

构想影响无所谓了，只要蛋白功能没了就好那看来这么做也不错。怎么样才不极端呢
？以为这3个是确定了的functional residues

【在 s******y 的大作中提到】

: 几乎肯定会有影响。
: S>F G>A R>A。。。
: ？这也太极端了，几乎可以肯定会改变蛋白的构像。

s*y2011-08-30 07:08

8 楼

可是你这样把蛋白构型都变了，很容易就搞出一个沉淀物的，这样很难过
审稿者的关的。
一般来说，S--> M
R--> Q
是比较保险的选择，在大部分情况下能让侧链的功能没了，但是并不改变构型。
但是G比较麻烦，因为这个本来就不是侧链的功能（没有侧链），而是构型的功能。所以我不知道应该变成什么才保险。
当然，如果你完全不关心构型，就算是把蛋白彻底毁了也无所谓，那么你的刚才的选择
也可以。

【在 r******y 的大作中提到】

: 构想影响无所谓了，只要蛋白功能没了就好那看来这么做也不错。怎么样才不极端呢
: ？以为这3个是确定了的functional residues

C*e2011-08-30 07:08

9 楼

虽然你是前辈是我们的偶像
我还是忍不住说一句
未必“几乎可以肯定会改变蛋白的构像”
蛋白多大，
有没有多聚体形式，
这些基团在哪里，
是不是结合位点或者催化位点？
这些信息都不知道的话没有办法说“肯定”怎么样
如果这个蛋白已经有结构了
在coot里面一看就最清楚直接

【在 s******y 的大作中提到】

: 几乎肯定会有影响。
: S>F G>A R>A。。。
: ？这也太极端了，几乎可以肯定会改变蛋白的构像。

s*y2011-08-30 07:08

10 楼

呵呵，我也就是是按照一般规律来讲的，肯定也会有错的时候的嘛，
所以不必对我那么客气。
但是S--> F,在大部分情况下会改变蛋白的折叠方式。这个真的是有点极端了。
R--> A如果是在一个高亲水的岛里（比方旁边有很多亲水集团，导致该区域是一个
felxible loop）变得话倒也无所谓了，变完了还能大致维持构型。
如果周边的亲水性本来就不是那么高，或者这个R是盐桥的一部分，那么变了蛋白的折
叠方式就会改变。

【在 C*******e 的大作中提到】

: 虽然你是前辈是我们的偶像
: 我还是忍不住说一句
: 未必“几乎可以肯定会改变蛋白的构像”
: 蛋白多大，
: 有没有多聚体形式，
: 这些基团在哪里，
: 是不是结合位点或者催化位点？
: 这些信息都不知道的话没有办法说“肯定”怎么样
: 如果这个蛋白已经有结构了
: 在coot里面一看就最清楚直接

r*y2011-08-30 07:08

11 楼

我是用来做转基因的，做植物，只是改变guanylyl cyclase的功能，不过如果reviewer
说你构型变了不是因为GC功能没了那就比较麻烦了
以前看到过R>A的，估计对于我们不搞构型只看转基因后植物表型基因表达的没太大关系

所以我不知道应该变成什么才保险。

【在 s******y 的大作中提到】

: 可是你这样把蛋白构型都变了，很容易就搞出一个沉淀物的，这样很难过
: 审稿者的关的。
: 一般来说，S--> M
: R--> Q
: 是比较保险的选择，在大部分情况下能让侧链的功能没了，但是并不改变构型。
: 但是G比较麻烦，因为这个本来就不是侧链的功能（没有侧链），而是构型的功能。所以我不知道应该变成什么才保险。
: 当然，如果你完全不关心构型，就算是把蛋白彻底毁了也无所谓，那么你的刚才的选择
: 也可以。

s*y2011-08-30 07:08

12 楼

构型变了GC功能肯定也没了吧？
这个关键看你们要做什么了，如果像我们做生化的需要把蛋白提出来在体外重复的话，
构型变了导致不溶解，下面就没办法继续了。但是你们的情况貌似真的是无所谓？
R>A的做法的确有，看我上面的回帖。

reviewer
关系

【在 r******y 的大作中提到】

: 我是用来做转基因的，做植物，只是改变guanylyl cyclase的功能，不过如果reviewer
: 说你构型变了不是因为GC功能没了那就比较麻烦了
: 以前看到过R>A的，估计对于我们不搞构型只看转基因后植物表型基因表达的没太大关系
:
: 所以我不知道应该变成什么才保险。

j*x2011-08-30 07:08

13 楼

搭车问一下，在一个酶的active site，和底物相互作用的关键位点上，M->K这种变化
可能有哪些理化影响？

【在 s******y 的大作中提到】

: 呵呵，我也就是是按照一般规律来讲的，肯定也会有错的时候的嘛，
: 所以不必对我那么客气。
: 但是S--> F,在大部分情况下会改变蛋白的折叠方式。这个真的是有点极端了。
: R--> A如果是在一个高亲水的岛里（比方旁边有很多亲水集团，导致该区域是一个
: felxible loop）变得话倒也无所谓了，变完了还能大致维持构型。
: 如果周边的亲水性本来就不是那么高，或者这个R是盐桥的一部分，那么变了蛋白的折
: 叠方式就会改变。

r*y2011-08-30 07:08

14 楼

哈哈，谢谢两位 S>F可能还是太厉害了。那S>A如何？

【在 s******y 的大作中提到】

r*y2011-08-30 07:08

15 楼

我们不做生化不需要提蛋白，应该没问题

【在 s******y 的大作中提到】

: 构型变了GC功能肯定也没了吧？
: 这个关键看你们要做什么了，如果像我们做生化的需要把蛋白提出来在体外重复的话，
: 构型变了导致不溶解，下面就没办法继续了。但是你们的情况貌似真的是无所谓？
: R>A的做法的确有，看我上面的回帖。
:
: reviewer
: 关系

p*m2011-08-30 07:08

16 楼

你要in vivo做的话，弄个truncation不就完了吧GC catalytic domain去掉

【在 r******y 的大作中提到】

: 我们不做生化不需要提蛋白，应该没问题

r*y2011-08-30 07:08

17 楼

这个实在kinase domain里面，如果影响kinase也不好

【在 p*****m 的大作中提到】

: 你要in vivo做的话，弄个truncation不就完了吧GC catalytic domain去掉

p*m2011-08-30 07:08

18 楼

I see，这样我看你只能做做mutation，然后用crude extract看看GC和kinase活性分别
有没有影响了吧否则怎么知道是影响了GC还是Both?

【在 r******y 的大作中提到】

: 这个实在kinase domain里面，如果影响kinase也不好

r*y2011-08-30 07:08

19 楼

恩，还得做kinase活性分析麻烦哪，我们文章要不出去就被别人挤了，急。多谢各位。

【在 p*****m 的大作中提到】

: I see，这样我看你只能做做mutation，然后用crude extract看看GC和kinase活性分别
: 有没有影响了吧否则怎么知道是影响了GC还是Both?

s*y2011-08-30 07:08

20 楼

我的建议是你们设计的时候同时做上几个不同的mutation 选择。
S-> M or A
R-> Q or A
G-> A
一般来说，如果不知道该变成什么，那么就变成A
但是为了保险以见，多设计几套方案，同时去做mutagenesis，然后挑效果最好的一个
来作下续工作。

【在 r******y 的大作中提到】

: 我们不做生化不需要提蛋白，应该没问题

s*y2011-08-30 07:08

21 楼

哦，这个影响可能会很大。
首先是电性就变了，如果本来是依靠M 来进行疏水力结合的话，那么变成
K就破坏了那个作用。

【在 j****x 的大作中提到】

: 搭车问一下，在一个酶的active site，和底物相互作用的关键位点上，M->K这种变化
: 可能有哪些理化影响？

s*n2011-08-30 07:08

22 楼

如果这些residue在表面的话，这样变一般没问题；如果在内部，可能有问题。所以象
ls说得，最好从结构上来看才保险。