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版上有没人在做Autophagy??

版上有没人在做Autophagy??# Biology - 生物学

s*x2010-04-25 07:04

1 楼

which one is easier?
I am F1, using CPT for job, but not graduated yet
Will apply OPT next year to continue the job
Which one is easier for F1 visa application?

j*l2010-04-25 07:04

2 楼

有一次私下给关系不错的同事A抱怨B人品不好，A也说讨厌B。
后来一次公司开会，A和B吵架，A急了说johninfl也不喜欢你！
我震精了

J*22010-04-25 07:04

3 楼

【以下文字转载自 Basketball 讨论区】
发信人: JoeJohnson2 (周强生), 信区: Basketball
标题: Re: RE: 慈世平您不去WWE实在太可惜了
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Apr 22 17:31:56 2012, 美东)
就你这种上来就 pa
你们家主都替你丢不起人
赶紧回去忏悔吧

r*e2010-04-25 07:04

4 楼

【以下文字转载自 TrustInJesus 讨论区】
发信人: reverie (缘生世间), 信区: TrustInJesus
标题: Re: 总结一下吃肉吃血的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Oct 27 18:52:52 2009, 美东)
这太有意思了，到底是因为GYFM附佛附耶才成为邪门外道，还是因为GYFM是邪门外道所
以只要是他们提到的都一定是邪门呢？
爸，

t*x2010-04-25 07:04

5 楼

请问如果想要得到Lc-3II,就是结合在autophagosome上的lc-3的话，你们都用什么
buffer，或者detergent提？？
我遇到的问题是，细胞处理1小时就看到vesicle了，6个小时看到很多，体积也逐渐变
大的autophagosome,可是wester-blot就是看不到Lc-3II的增加，随着时间增加，
vesicle逐渐减少，却开始看到lc-3II的蛋白条带了，请问这正常么？？
我用0.5%triton-x 100然后挺强的sonication裂解的细胞，我担心的是autophagosome
膜上的蛋白不能完全裂解出来，所以请教大家。
看到有人用SDS, Urea什么的裂解，有必要么？？
谢谢指教！！

s*x2010-04-25 07:04

6 楼

顶

【在 s*******x 的大作中提到】

: which one is easier?
: I am F1, using CPT for job, but not graduated yet
: Will apply OPT next year to continue the job
: Which one is easier for F1 visa application?

h*n2010-04-25 07:04

7 楼

race of you 3?

【在 j******l 的大作中提到】

: 有一次私下给关系不错的同事A抱怨B人品不好，A也说讨厌B。
: 后来一次公司开会，A和B吵架，A急了说johninfl也不喜欢你！
: 我震精了

J*22010-04-25 07:04

8 楼

福音就是被这帮人给穿坏了阿

【在 J*********2 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Basketball 讨论区】
: 发信人: JoeJohnson2 (周强生), 信区: Basketball
: 标题: Re: RE: 慈世平您不去WWE实在太可惜了
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sun Apr 22 17:31:56 2012, 美东)
: 就你这种上来就 pa
: 你们家主都替你丢不起人
: 赶紧回去忏悔吧

r*e2010-04-25 07:04

9 楼

这个很tricky啊
比方说WaiChi是个附佛外道，然后他对着NMAMTF说“是渴望心, 故心忆念佛. 非念佛名
号.”，作为佛弟子，驳好还是不驳，万一他真附对了呢（不管是不是连蒙带猜啦哈哈
），乱批的话岂不是很容易变成谤佛了？

【在 r*****e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 TrustInJesus 讨论区】
: 发信人: reverie (缘生世间), 信区: TrustInJesus
: 标题: Re: 总结一下吃肉吃血的问题
: 发信站: BBS 未名空间站 (Tue Oct 27 18:52:52 2009, 美东)
: 这太有意思了，到底是因为GYFM附佛附耶才成为邪门外道，还是因为GYFM是邪门外道所
: 以只要是他们提到的都一定是邪门呢？
: 爸，

z*z2010-04-25 07:04

10 楼

一般用RIPA
你说的现象正常，autophagsome多的时候，本身对LC-3II的降解很厉害，所以western
看不出来这个趋势，后来少的时候自噬能力减弱，反而能看见了。
真正体现的自噬流还得加抑制剂，试一下3-MA。
超声貌似没有必要，可以裂解时间长一点，加蛋白酶抑制剂，用小号的枪不断吹。
Good luck.

y*d2010-04-25 07:04

11 楼

哈哈

【在 j******l 的大作中提到】

: 有一次私下给关系不错的同事A抱怨B人品不好，A也说讨厌B。
: 后来一次公司开会，A和B吵架，A急了说johninfl也不喜欢你！
: 我震精了

W*i2010-04-25 07:04

12 楼

哈哈......... 好玩.
爸，

【在 r*****e 的大作中提到】

: 这个很tricky啊
: 比方说WaiChi是个附佛外道，然后他对着NMAMTF说“是渴望心, 故心忆念佛. 非念佛名
: 号.”，作为佛弟子，驳好还是不驳，万一他真附对了呢（不管是不是连蒙带猜啦哈哈
: ），乱批的话岂不是很容易变成谤佛了？

t*x2010-04-25 07:04

13 楼

呵呵，谢谢详细的回复！
那我就用RIPA buffer试一下
不过像你说的，如果这种现象正常的话，估计换了buffer也应该差不多的趋势。:)
刚开始的时候没有用sonication，只是0.5%triton X-100 30min 冰浴裂解
后来听别人建议，加了sonication,发现跑完westernblot，结果很一致，都是处理12小
时之后，在镜下观察发现vacuole都消失差不多了，才看到lc-3II的增加
呵呵，我以为是开始时lc3-II在vacuole膜上镶嵌，没有裂解下来，而时间长了
autophagosome跟lysosome结合吞噬，lc-3II被从膜上释放出来，成为cytosolic形式才
能被我检测到呢，所以一直在找比较强的裂解膜上蛋白的方法。
你这样说，我就比较放心了，恩，非常感谢！

western

【在 z****z 的大作中提到】

: 一般用RIPA
: 你说的现象正常，autophagsome多的时候，本身对LC-3II的降解很厉害，所以western
: 看不出来这个趋势，后来少的时候自噬能力减弱，反而能看见了。
: 真正体现的自噬流还得加抑制剂，试一下3-MA。
: 超声貌似没有必要，可以裂解时间长一点，加蛋白酶抑制剂，用小号的枪不断吹。
: Good luck.

m*92010-04-25 07:04

14 楼

...
hahah

p*y2010-04-25 07:04

15 楼

一堆狗屁
你们也讲佛耶

z*z2010-04-25 07:04

16 楼

哦
用bafilomycin A吧，阻断LC3-II的降解。3-MA是阻断自噬体的形成。

j*l2010-04-25 07:04

17 楼

chinese, chinese, american

【在 h*********n 的大作中提到】

: race of you 3?

b*l2010-04-25 07:04

18 楼

正人说邪法，邪法亦随正；邪人说正法，正法亦随邪.

【在 r*****e 的大作中提到】

q*22010-04-25 07:04

19 楼

能发发图看看，vesicle到底长啥样？我觉得有的细胞没处理也有 vesicle的样子

y*12010-04-25 07:04

20 楼

有那么傻的人吗？赶紧逼了她！

r*e2010-04-25 07:04

21 楼

这话本身有道理。但是我说的是你批的时候要小心，要批对，不要变成批佛法，不要因
为批WaiChi而自生邪见，执认邪法为正法，除非你能彻底忽略他所说的，完全不受影响
。不然的话，万一老想着“那话waichi说过，一定是邪见”就会产生障碍。我就随便说
说。
我觉得——邪人听正法，正法亦随邪。你看看佛陀时代提婆达多还能破和合僧团，那些
跟他走的当初可是亲从佛陀闻法啊。可见正邪在乎己心。

佛名
哈哈

【在 b*****l 的大作中提到】

: 正人说邪法，邪法亦随正；邪人说正法，正法亦随邪.

n*12010-04-25 07:04

22 楼

好像现在做这个东西的蛮多的，呵呵。

c*b2010-04-25 07:04

23 楼

吸取教训了没有?

【在 j******l 的大作中提到】

: 有一次私下给关系不错的同事A抱怨B人品不好，A也说讨厌B。
: 后来一次公司开会，A和B吵架，A急了说johninfl也不喜欢你！
: 我震精了

b*l2010-04-25 07:04

24 楼

我不担心这个问题，因为俺不太就一个说法纠缠，
只常常找“大师们”自相矛盾的地方。
另外，任何人都有正确和错误的地方。
只是如果因为害怕变成批佛法，而变得过度谨慎没有必要。
一切法皆是佛法，人们平时说错的时候多了，难道都成批佛法了？

【在 r*****e 的大作中提到】

: 这话本身有道理。但是我说的是你批的时候要小心，要批对，不要变成批佛法，不要因
: 为批WaiChi而自生邪见，执认邪法为正法，除非你能彻底忽略他所说的，完全不受影响
: 。不然的话，万一老想着“那话waichi说过，一定是邪见”就会产生障碍。我就随便说
: 说。
: 我觉得——邪人听正法，正法亦随邪。你看看佛陀时代提婆达多还能破和合僧团，那些
: 跟他走的当初可是亲从佛陀闻法啊。可见正邪在乎己心。
:
: 佛名
: 哈哈

w*y2010-04-25 07:04

25 楼

完全不一样，autophagy vesicle里面有很多electron dense的黑黑的东西

【在 q****2 的大作中提到】

: 能发发图看看，vesicle到底长啥样？我觉得有的细胞没处理也有 vesicle的样子

d*22010-04-25 07:04

26 楼

没

【在 c**b 的大作中提到】

: 吸取教训了没有?

r*e2010-04-25 07:04

27 楼

//support +U
那是，过度总是不好的
这个。。。“一切法皆是佛法”作为理由的使用方法我谨慎保留意见
要因
影响
便说
那些

【在 b*****l 的大作中提到】

: 我不担心这个问题，因为俺不太就一个说法纠缠，
: 只常常找“大师们”自相矛盾的地方。
: 另外，任何人都有正确和错误的地方。
: 只是如果因为害怕变成批佛法，而变得过度谨慎没有必要。
: 一切法皆是佛法，人们平时说错的时候多了，难道都成批佛法了？

t*x2010-04-25 07:04

28 楼

哦，好，谢谢
其实我以前试过3-MA了,在我的系统中并没有显示阻断autophagy的作用
autophagosome照样形成
呵呵
恩，去看看bafilomycin A了，呵呵。

【在 z****z 的大作中提到】

: 哦
: 用bafilomycin A吧，阻断LC3-II的降解。3-MA是阻断自噬体的形成。

y*e2010-04-25 07:04

29 楼

我感觉你同事好幼稚

【在 d****2 的大作中提到】

:
: 没

b*l2010-04-25 07:04

30 楼

那换个角度说，佛法要去三毒，但是人们多在追求这个，这是不是在批佛法呢？
所以即使附佛外道附对了一点两点，批或者讨论的话也没有谤佛的问题。

【在 r*****e 的大作中提到】

:
: //support +U
: 那是，过度总是不好的
: 这个。。。“一切法皆是佛法”作为理由的使用方法我谨慎保留意见
: 要因
: 影响
: 便说
: 那些

t*x2010-04-25 07:04

31 楼

这样么？我还没做过电镜
不过在phase-contrast镜下看不到里面黑点点的东西
就是中间很透亮的泡状膜

【在 w*****y 的大作中提到】

: 完全不一样，autophagy vesicle里面有很多electron dense的黑黑的东西

j*l2010-04-25 07:04

32 楼

什么叫逼了他？

【在 y********1 的大作中提到】

: 有那么傻的人吗？赶紧逼了她！

r*e2010-04-25 07:04

33 楼

你这个类比。。。我直觉不是那么恰当，但是我暂时不知道如何分析表达。

【在 b*****l 的大作中提到】

: 那换个角度说，佛法要去三毒，但是人们多在追求这个，这是不是在批佛法呢？
: 所以即使附佛外道附对了一点两点，批或者讨论的话也没有谤佛的问题。

t*x2010-04-25 07:04

34 楼

有个别细胞没处理前确实也有vesicle
不过那是极少数的细胞，而且数目也并不多，在我看来应该是正常情况下的autophagy
不过，处理后的细胞很容易看出区别
几乎每个细胞里都有，而且随着时间的增加，数目越来越多，体积也越来越大

【在 q****2 的大作中提到】

: 能发发图看看，vesicle到底长啥样？我觉得有的细胞没处理也有 vesicle的样子

k*a2010-04-25 07:04

35 楼

sex of you 3?

【在 j******l 的大作中提到】

: chinese, chinese, american

b*l2010-04-25 07:04

36 楼

呵呵，同样的，这也是一些人可以在没有自相矛盾前可以胡搅蛮缠的道理。
一句话要证伪就得花老鼻子功夫，等着其自相矛盾最简单。

【在 r*****e 的大作中提到】

: 你这个类比。。。我直觉不是那么恰当，但是我暂时不知道如何分析表达。

t*x2010-04-25 07:04

37 楼

真的么？以前从没做过，所以对它非常生疏
不过最近的处理发现了这种现象才开始做的
呵呵

【在 n**********1 的大作中提到】

: 好像现在做这个东西的蛮多的，呵呵。

b*o2010-04-25 07:04

38 楼

没啥，这事也发生在我身上，我，他，还有那个大家都不喜欢的race分别是
chinese,chinese,indian
经过那一次之后，我就觉得千万不要跟同事八卦。

r*e2010-04-25 07:04

39 楼

没错啊，这个我同意啊
但是你怎么定义“胡搅蛮缠”呢？怎么对付胡搅蛮缠呢？怎么批才会不给自己惹麻烦？
这是我所关注的。如果你不学佛，我就不跟你说这个了。对我来说批胡搅蛮缠和学佛，
还是后者重要，如果这个版上真的没法不充斥胡搅蛮缠，那我可能就彻底放弃了，呵呵

【在 b*****l 的大作中提到】

: 呵呵，同样的，这也是一些人可以在没有自相矛盾前可以胡搅蛮缠的道理。
: 一句话要证伪就得花老鼻子功夫，等着其自相矛盾最简单。

h*y2010-04-25 07:04

40 楼

请问这些表达LC3II的细胞有没有可能也undergo senescence呢？

【在 t*x 的大作中提到】

: 真的么？以前从没做过，所以对它非常生疏
: 不过最近的处理发现了这种现象才开始做的
: 呵呵

W*r2010-04-25 07:04

41 楼

也没啥吧，反正你们两个都不喜欢他，人家肯定也能看得出来了

b*l2010-04-25 07:04

42 楼

呵呵，我的理解，用文字绕来绕去而不用世间的逻辑多是胡搅蛮缠。
在胡搅蛮缠中锻炼八风不动也很有意思。
对事不对人就至少没有谤佛的问题。

【在 r*****e 的大作中提到】

:
: 没错啊，这个我同意啊
: 但是你怎么定义“胡搅蛮缠”呢？怎么对付胡搅蛮缠呢？怎么批才会不给自己惹麻烦？
: 这是我所关注的。如果你不学佛，我就不跟你说这个了。对我来说批胡搅蛮缠和学佛，
: 还是后者重要，如果这个版上真的没法不充斥胡搅蛮缠，那我可能就彻底放弃了，呵呵

a*v2010-04-25 07:04

43 楼

mark
看来要诱导比较长的时间了....

d*e2010-04-25 07:04

44 楼

去跟B解释，就说A老跟你抱怨他不好，你不好说什么，有时候哼哈两声被A误认为你赞
同他了。

【在 j******l 的大作中提到】

: 有一次私下给关系不错的同事A抱怨B人品不好，A也说讨厌B。
: 后来一次公司开会，A和B吵架，A急了说johninfl也不喜欢你！
: 我震精了

r*e2010-04-25 07:04

45 楼

赞！最后一句能展开说说吗？为啥？
烦？
佛，
呵呵

【在 b*****l 的大作中提到】

: 呵呵，我的理解，用文字绕来绕去而不用世间的逻辑多是胡搅蛮缠。
: 在胡搅蛮缠中锻炼八风不动也很有意思。
: 对事不对人就至少没有谤佛的问题。

s*g2010-04-25 07:04

46 楼

专家级的了!

western

【在 z****z 的大作中提到】

l*u2010-04-25 07:04

47 楼

even worse...

z*y2010-04-25 07:04

48 楼

4 hours before you lyse the cells, add 10 ug/ml E-64d and 10 ug/ml Pepstatin
A to the medium. Then you can see the increase of LC3II.
Good luck.